老年前期及老年期甲状腺乳头状癌C-MET和PP60C-SRC蛋白的表达

目的探讨45岁以上老年前期及老年期甲状腺乳头状癌(PTC)组织中C-MET和PP60C-SRC蛋白表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色法分别检测27例45岁以上老年前期及老年期PTC组织、31例45岁以下人群PTC组织和27例甲状腺良性病变(腺瘤和结节性甲状腺肿)组织C-MET和PP60SRC蛋白表达。结果 C-MET在PTC中表达阳性率:老年前期及老年组为96.3%,45岁以下组为74.2%,甲状腺良性病变组为33.3%,各组差异显著(均P<0.05)。PP60C-SRC在癌组织中表达阳性率:老年前期及老年组为66.7%,45岁以下组为64.5%,甲状腺良性病变组为18.5%,PTC组与甲状腺良性病变组差异显著(P<0.05),但不同年龄组PTC中PP60C-SRC表达差异无统计学意义。结论 C-MET和PP60C-SRC在PTC存在高表达,且C-MET随年龄的增加有表达上调的趋势。

pp60c-src在高静水压培养的人脐静脉内皮细胞增殖中的作用

目的 :探讨短期高压刺激是否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)增殖以及pp60c -src所起的作用。方法 :分大气压 (AP ,0mmHg) ,中压 (MP ,12 0mmHg)和高压培养 (HP ,180mmHg) 3组 ,各组分别用卡托普利 (Cap ,10μmol/L)和厄贝沙坦 (Irb ,10 μmol/L)进行干预。测定 β -N -乙酰氨基己糖苷酶活性以反映细胞增殖。用Westernblotting法测定细胞内pp60c -src含量。结果 :① 2h时各组氨基己糖苷酶活性相似 ;中、高压组 4h时酶活性明显增高 (0 118± 0 0 0 3vs 0 14 5± 0 0 18和 0 14 4± 0 0 19,P <0 0 1) ,而大气压组 8h才见增高。 12h时各组酶活性相近。与此相应 ,2h时中、高压组pp60c -src明显高于大气压组 (0 12± 0 0 3vs 0 16± 0 0 2和 0 19± 0 0 6,均P <0 0 5) ,而大气压组 4h后才缓慢增加至中、高压组水平。② 12h时大气压组Cap与Irb对细胞数无影响 ,而在中、高压组两药使细胞增加 (MP组 0 189± 0 0 0 6vs 0 2 0 2± 0 0 0 5和 0 2 0 7± 0 0 0 3 ,P <0 0 5;HP组 0 193± 0 0 0 4vs 0 2 13± 0 0 0 4和0 2 2 1± 0 0 0 4,P <0 0 5)。但Cap与Irb干预组pp60c -src含量与对照组相似。结论 :压力刺激促使HUVECs早期 (4h)增殖 ,pp60c

三七总皂甙对凝血酶诱导VSMCs增殖及pp60c-src活性的影响

目的探讨三七总皂甙(total spaonins of panax notoginseng,tPNS)对凝血酶诱导大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖作用及与pp60c-src活性的关系。方法采用4-10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。通过MTS法测定VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定pp60c-src的活性。结果①0.5U/mL和1.0U/mL2种浓度的凝血酶(Thrombin,TH)促VSMCs增殖相对于对照组,在各时间段均有明显促增殖作用(P<0.05)。增殖曲线呈双峰样改变(峰值在1h和24h);②不同浓度(300.0～600.0μg/mL)的tPNS在24h时对凝血酶刺激VSMCs都有明显抑制作用(P<0.05),且各浓度之间差异有显著性意义(P<0.05)。③相对凝血酶组,tPNS(450.0μg/mL)有效地降低了凝血酶诱导VSMCs增殖的1、24h峰值(P<0.05)。④凝血酶刺激组pp60c-src活性在1h(P<0.01)明显增加,并且6、12、24、48、72h也有增加。用tPNS干预凝血酶诱导VSMCs增殖组,与凝血酶组比较,pp60c-src活性在1h(P<0.01)高峰明显被抑制,并且6、12、24、48、72h也有减少。结论①凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变。②不同浓度的tPNS对凝血酶诱导VSMCs增殖均有抑制作用。③tPNS能抑制凝血酶早期快速及后期促VSMCs增殖作用。④tPNS对凝血酶诱导VSMCs增殖有明显抑制作用,部分机制与其降低pp60c-src活性有关。

凝血酶诱VSMCs增生中PDGF自分泌与pp60c-src的关系

目的探讨凝血酶诱血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)增生中PDGF自分泌与pp60csrc的关系。方法采用培养大鼠胸主动脉3～10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。用MTS法测凝血酶促VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定PDGF的含量。结果①0.5μmol/ml和1.0μmol/ml两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组,在各时间段均有明显促增殖作用,且两者作用程度相似,呈双峰样改变,增殖峰在1h(P<0.05)和24h(P<0.05)。②凝血酶组,PDGF自分泌高峰在6h(P<0.01)及12h(P<0.01)。用PP1干预凝血酶诱VSMCs增殖组,与凝血酶组比较,PDGF在6h(P<0.01)、及12h(P<0.01)自分泌高峰明显被抑制。结论①凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶不仅有早期快速促VSMCs的增殖作用,而且有后期促VSMCs的增殖作用。②pp60csrc参与了凝血酶促VSMCs自分泌PDGF。

PP60C-SRC/ERK1/2信号通路调节大鼠精原干细胞活性

目的研究PP60C-SRC通过磷酸化的细胞外调节激酶1/2(p-ERK1/2)调节体外培养的9日龄大鼠精原干细胞的活性。方法用MTT观察反义C-SRC脱氧寡核苷酸(ODNs)及PD98059对精原干细胞活性的影响;用W est-ern b lot检测PP60C-SRC和p-ERK1/2的表达。结果与空白对照组相比,10μmol/L反义C-SRCODNs作用12 h后精原干细胞活性下降了8.1%(P<0.05),10μmol/L PD98059作用24 h后精原干细胞活性下降了9.4%(P<0.01)。反义C-SRCODNs组PP60C-SRC、p-ERK1/2蛋白表达与空白对照组相比分别下降了33.8%和45.3%(均P<0.01);10μmol/L PD98059作用精原干细胞24 h后,p-ERK1/2蛋白表达下降了34.5%。结论PP60C-SRC可能通过p-ERK1/2蛋白而调节精原干细胞的活性。

c-Src在TAM治疗耐药的人乳腺癌MCF-7细胞株中的表达及其意义

目的:探讨c-Src在乳腺癌三苯氧胺(TAM)中耐药的表达及意义。方法:用Western blot法检测TAM治疗耐药与敏感的两种人乳腺癌MCF-7细胞中c-Src的表达及其磷酸化水平;用c-Src阻滞剂PP2处理两种细胞后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果:与TAM敏感MCF-7细胞比较,TAM耐药MCF-7细胞c-Src的表达量及其磷酸化水平均明显增高;PP2处理后,TAM敏感MCF-7细胞的富集指数(EF)及细胞凋亡率高于TAM耐药MCF-7细胞(均P<0.05)。结论:c-Src在TAM治疗耐药的人乳腺癌MCF-7细胞株中处于高表达及高活性状态,并可能参与乳腺癌内分泌治疗耐药的机制。

c-Src介导的ERα与EGFR互作关系在乳腺癌三苯氧胺耐药中的作用

目的:探讨雌激素受体(ER)与表皮生长因子受体(EGFR)的关系及其在乳腺癌三苯氧胺(TAM)治疗耐药中的作用与机制。方法:选用TAM治疗敏感(TAM-S)与耐药(TAM-R)的两种人乳腺癌MCF-7细胞,用免疫沉淀(IP)法检测ERα和EGFR在两种细胞中的结合情况,以及c-Src与前两者的结合情况,并用Western blot法检测两种细胞中c-Src的磷酸化水平;c-Src阻滞剂PP2处理两种细胞后,IP法再次检测ERα和EGFR结合情况。结果:ERα和EGFR在两种细胞中均以复合物的形式结合,但在TAM-R细胞中的结合量明显高于TAM-S细胞(P<0.05);c-Src与ERα、EGFR在两种细胞中均以复合物的形式结合,其磷酸化水平在TAM-R细胞中明显高于TAM-S细胞(P<0.05);PP2阻断c-Src的活性后,两种细胞中ERα和EGFR结合量均降低,且在TAM-R细胞中的降低程度明显大于TAM-S细胞(P<0.05)。结论:ERα和EGFR之间存在结合的现象,且两者的互作关系可能在乳腺癌TAM治疗耐药中起了重要作用,而c-Src的活化(磷酸化)是可能是介导了两者结合的关键机制。