检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的 比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法 收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果 pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论 pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。

人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。

荧光定量PCR和外周血白细胞pp65抗原血症实验对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测

目的 探讨肾移植术后 3个月巨细胞病毒 (CMV)的感染状况 ,比较荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验两种方法对肾移植术后巨细胞病毒感染的检测情况和使用价值。方法 分别用荧光定量PCR、外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验和ELISA法对我院 2 0 0 1年 1月～2 0 0 2年 12月 5 6例肾移植患肾移植术后 3个月的外周血进行巨细胞病毒的检测。结果 5 6例肾移植患者中CMVpp5 6抗原血症阳性 9例 ( 16 1% ) ,PCR阳性 11例 ( 19 6 % ) ,12例 ( 2 1 4 % )诊断为CMV感染 ,其中 7例为症状性感染 ,5例为无症状性感染。荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的一致性为 92 % ,阳性符合率 6 7% ,阴性符合率 92 %。CMVpp6 5抗原、CMVDNAPCR、CMV IgM的敏感性、特异性分别为 72 %、92 % ;10 0 %、92 % ;4 3%、88%。结论 荧光定量PCR和外周血白细胞 pp6 5抗原血症实验的联合应用 ,对监测CMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。

急性脱髓鞘脑病患者人巨细胞病毒pp65抗原血症检测的临床意义

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)在急性脱髓鞘脑病(ADBD)中的病原学作用,并评估HCMV-pp65抗原血症在ADBD活动性HCMV感染早期诊断、抗病毒治疗及疗效判断中的价值。方法采用HCMV单克隆抗体免疫荧光法,对64例ADBD患者的外周血进行HCMV-pp65抗原检测,同时采用金标免疫斑点法检测血清HCMV-IgM,并对检测结果以及抗病毒药物应用与疗效进行分析。结果64例ADBD中HCMV-pp65阳性17例(26.6%),HCMV-IgM阳性8例(12.5%);HCMV-pp65阳性者,应用膦甲酸钠治疗9例,痊愈6例(66.7%),好转3例(33.3%);应用无环鸟苷治疗8例,痊愈2例(25.0%),好转4例(50.0%),无效2例(25.0%)。结论HCMV与ADBD的发生密切相关,HCMV-pp65抗原检测是一种敏感性、特异性强的方法,有助于HCMV感染疾病的早期诊断,指导抗病毒治疗及疗效的评价;膦甲酸钠对HCMV感染所致ADBD效果良好。

外周血白细胞中人巨细胞病毒pp65抗原的定位及意义

目的明确人巨细胞病毒(HCMV)磷酸基质蛋白65(pp65)抗原在阳性细胞中的定位并初探其定位与病毒活动间的关系,为指导临床病毒抗原血症的监测提供依据。方法利用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料能与细胞双链DNA结合的特点,在激光共聚焦显微镜下对HCMV pp65单抗阳染细胞进行抗原定位;同时通过外周血白细胞与病毒共培养技术,检测分析其定位与病毒活动的关系。结果临床标本检测的HCM- Vpp65抗原阳染细胞的表现形式有3种,即细胞浆型、细胞核型和细胞浆核混合型,其中细胞核中的HCMV pp65抗原聚集于细胞核的内部,而非仅仅附着于核表面。进一步的白细胞与病毒共培养结果显示,只有野生型病毒株感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)与外周血白细胞共培养,才能检出HCMV pp65抗原阳性的白细胞,而且表现为仅初期(培养1 h内)可检出细胞浆阳染型,随着时间延长,约80%～90%的抗原阳染白细胞表现为细胞核型,偶见细胞浆核混合型。结论HCMV pp65抗原血症时阳染的外周血白细胞的表现形式有3种,即细胞核型、细胞浆型以及细胞浆核混合型,其中细胞核型属细胞核内部型,并非细胞核表面附着型。结合共培养结果认为,细胞核型阳染细胞的检出更能提示病毒的活动。

巨细胞病毒抗原血症检测在肾移植术后的应用

目的评估巨细胞病毒抗原血症检测方法对诊断肾移植患者巨细胞病毒感染的意义。方法收集2021年9月至2021年12月昆明市第一人民医院就诊90例肾移植患者的110例血样,对其进行巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)pp65抗原血症检测与Ig G抗体、CMV DNA结果比较,评估CMV pp65抗原血症结果与肌酐、他克莫司(tacrolimus,Tac/FK506)药物浓度、淋巴细胞亚群的相关性。结果CMV pp65抗原血症结果与CMV DNA结果一致性为65.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CMV pp65抗原血症检测结果与CMV IgG抗体检测结果一致性为57.3%,差异不具有统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与肌酐、FK506药物浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CMV pp65抗原血症结果与淋巴细胞亚群比较中,仅与NK细胞绝对值差异有统计学意义(P<0.05)。结论CMV pp65抗原与CMV IgG抗体结果一致性为57.3%。CMV pp65抗原与CMV DNA结果一致性为65.5%,两种方法联合检测,对提高CMV感染临床诊断准确率具有一定意义。在CMV pp65抗原阴性组与阳性组中,血清肌酐水平、全血FK506药物浓度两组间差异无统计学意义,NK细胞绝对值差异具有统计学意义,NK细胞绝对值偏高的肾移植患者,发生CMV感染的概率偏低。

PP65抗原血症检测法在发热患儿巨细胞病毒感染中的诊断价值

目的探讨低基质磷酸化蛋白（PP65）抗原血症检测法（AA法）对发热患儿巨细胞病毒（CMV）感染的诊断价值。方法对128例发热患儿（发热时间7～14d）采用间接免疫荧光染色法检测PP65抗原血症、酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗CMV抗体（CMV—IgM）、尿光镜找包涵体等三种方法平行检测128例血标本和尿标本。结果PP65抗原血症、CMV—IgM、尿找巨细胞包涵体的阳性检出率分别为17．2％、8．6％、6．3％。PP65抗原血症与CMV—IgM及尿找巨细胞包涵体的阳性符合率分别为50％（11／22）、36％（8／22）。19例患儿随着病情好转，PP65抗原血症水平从阳性转为阴性，另3例临床痊愈时复查PP65仍为阳性，其中2例2周后复查PP65转为阴性，1例3周后复查转为阴性。结论PP65抗原血症检测法对CMV活动性感染具有早期诊断的意义，可以检测病情变化、指导早期干预治疗。

孕妇人巨细胞病毒-PP65及IgM的检测分析

目的探讨妊娠妇女人巨细胞病毒的感染状况及监测效果。方法分别采用酶联免疫吸附试验和间接荧光免疫染色法检测2004年1月～2007年6月在深圳市福田区第二人民医院行产前检查的760例孕妇外周血人巨细胞病毒-PP65抗原血症和人巨细胞病毒-IgM。结果孕妇人巨细胞病毒感染阳性率为4．87％，其中人巨细胞病毒-IgM抗体阳性率为1．58％（6／380），外周血白细胞人巨细胞病毒-PP65抗原血症的检测结果阳性率为8．16％（31／380）。两种检测方法比较χ^2=18．99，P〈0.001，有非常显著性差异。结论同时应用人巨细胞病毒-IgM抗体和人巨细胞病毒、PP65抗原检测方法可对孕妇妊娠早期人巨细胞病毒活动性感染进行监测及治疗指导。

应用荧光定量PCR技术检测小儿尿液中人巨细胞病毒

目的:探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液中人巨细胞病毒(HCMV)对儿童HCMV活动性感染的检测价值。方法:对收集的175份临床标本分别用FQ-PCR方法及低基质磷酸化蛋白(pp65)抗原血症检测方法进行平行检测比较。结果:71例临床患者尿液FQ-PCR检测阳性59例;血液pp65抗原检测阳性53例。尿液中HCMVD-NA检测结果与HCMVpp65抗原血症的一致性为84·2%。结论:FQ-PCR检测敏感性要高于pp65抗原血症检测,可以有效提示体内病毒的活跃程度,具有良好的应用价值。

巨细胞病毒感染和系统性红斑狼疮等结缔组织病

系统性红斑狼疮(SLE)等结缔组织病(CTDs)与巨细胞病毒(CMV)感染关系密切,CMV的感染可能是CTDs患者发病的因素之一,CMV通过分子模拟机制引发了自身免疫反应,同时CTDs患者由于疾病本身及免疫抑制治疗容易发生活动性巨细胞病毒感染。CMVpp65抗原血症检测是早期诊断和鉴别CTDs患者活动性CMV感染的较好指标。SLE患者合并活动性CMV感染时临床表现多样,与SLE疾病本身表现不易区分,确诊CMV感染可通过CMV抗原血症鉴别。CTDs患者的CMV感染需要合适的抗病毒及激素治疗。

献血者巨细胞病毒感染筛查的初步研究

目的 探讨检测人巨细胞病毒 (HCMV)的低基质磷酸化蛋白 (pp65 )抗原对健康献血者巨细胞病毒感染情况的筛查。 方法 对 2 0 0 3年 2～ 7月收集的 10 3份EDTA抗凝外周血标本 ,用免疫组化方法进行pp65抗原血症检测 ,同时以ELISA法检测其中的 86份血清中的IgM和IgG抗体。 结果 10 3份标本中共有 10份pp65抗原阳性 ,阳性率为 9 71% ;ELISA法检测 86份标本CMV -IgM抗体全部阴性 ,CMV -IgG抗体 5 6例阳性 ,阳性率为 62 % ( 5 6/ 86) ,10份pp65抗原阳性的标本中 ,CMV -IgG阳性 9例。 结论 pp65抗原是检测CMV感染的一种敏感、特异的方法 ,而检测CMV -IgM、CMV -IgG不能预测CMV的活动性感染 ,因此对需要输注全血、成分血的免疫力低下或各种移植病人 ,应进行CMVpp65抗原的检测。

实时定量聚合酶链反应在肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用研究

目的:建立血浆、外周血白细胞HCMV DNA实时定量聚合酶链反应检测方法,评价其监测肾移植后人巨细胞病毒活动性感染的临床应用价值。方法:用重组质粒PQHY-1制作标准曲线;分别用实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学方法,对28例肾移植术后病人采血标本动态检测,并将结果进行比较。结果:实时定量PCR最低可检测出20拷贝/孔的HCMV DNA,且可重复性强(批内及批间误差均<5％),在102～107拷贝/孔的浓度范围时与Q值有很好的线性关系(r=-0.978)。与PP65抗原血症检测结果比较,血浆及外周血白细胞定时定量检测的灵敏度分别为88.5％,94.2％;特异度分别为97.8％,95.4％。HCMV活动性感染时血浆和外周血白细胞HCMV DNA平均含量分别为102.4拷ml和103.2拷贝/106PBL。血浆和外周血白细胞中HCMV DNA阳性检出时间较PP65抗原血症阳性检出时间平均要早1.6和3.8天。结论:实时定量聚合酶链反应检测方法是一种灵敏度高,特异度好的定量检测方法,可用于监测早期HCMV活动性感染。

异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒抗原血症检测指导巨细胞病毒感染的防治

人巨细胞病毒感染及巨细胞病毒疾病是异基因造血干细胞移植后的常见并发症 ,巨细胞病毒性间质性肺炎是移植后巨细胞病毒疾病的主要类型 ,如未能及时检出和救治则病死率极高。为探讨采用免疫组化法测定人巨细胞病毒的方法学 ,指导临床治疗 ,我们采用免疫组化法对 4 5例(慢性粒细胞白血病 2 3例 ,急性髓性白血病 7例 ,急性淋巴细胞白血病 6例 ,骨髓增生异常综合征4例 ,非何杰金氏淋巴瘤 3例 ,再生障碍性贫血 2例 )进行造血干细胞移植后巨细胞病毒抗原血症的检测 ,并与巨细胞病毒血清学检测进行了对比。 4 5例中 38例患者进行了异基因外周血干细胞移植 ,2例骨髓移植 ,5例外周血与骨髓共移植。移植前 ,对供 受者均进行巨细胞病毒抗体检查 ;移植后 ,受者采用本方法进行抗原检查。结果表明 ,有 2 5例患者发生巨细胞病毒相关性间质性肺炎 ,移植后随访时间为 6 - 2 8个月 (平均时间为 18个月 ) ,根据巨细胞病毒检测结果进行预防性治疗的患者预后较未进行预防性治疗的患者有明显差异。预防组巨细胞病毒相关的死亡率为 1 2 9,未预防组为 12 16。提示采用免疫组化法对异基因造血干细胞移植患者进行定期随访监测可更早期、快速的检出巨细胞病毒感染 ,对患者预后有重要意义。

新生儿人巨细胞病毒感染的实验室诊断研究进展

新生儿巨细胞病毒性疾病是一种新生儿常见疾病,因其发病隐匿,故临床上以实验室检测为诊断疾病的关键。本文综述了实验室常用的检测方法,比较了各种检测方法的利弊及临床的应用状况和前景,为医生合理地诊断新生儿巨细胞病毒性疾病提供参考。

CMV-PP65抗原检测在婴儿巨细胞病毒性肝炎治疗中的意义

目的观察婴儿巨细胞病毒性肝炎患者治疗前后CMV-PP65抗原的变化。方法共有84例患儿纳入研究,根据临床表现及CMV-IgM、CMV-PP65和肝功检查结果确诊后给予更昔洛韦抗病毒治疗,同时给予护肝、利胆、退黄等对症治疗,依据CMV-PP65转阴、肝功恢复等情况决定停用或减量使用更昔洛韦。结果治疗前后患儿的总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量差异均有统计学意义(P<0.05),治疗前CMV-IgM和CMV-PP65阳性率差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后CMV-PP65阳性细胞数分别为(10.69±4.28)个/2×105白细胞和2.23±1.25个/2×105白细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在CMV肝炎诊断中,CMV-PP65抗原检测比CMV-IgM检测更灵敏,可供治疗时参考。

HCMV-PP65和HCMV-DNA与孕妇HCMV感染的相关性研究

目的探讨妊娠妇女HCMV的感染状况。方法采用间接免疫荧光染色法检测孕妇外周血白细胞HCMV-pp65及FQ-PCR检测其孕妇血浆HCMV-DNA,以此来作为判断妊娠妇女HCMV感染的观察指标。结果100例妊娠妇女HCMV-PP65抗原血症阳性为8例,阳性率为8%,HCMV-DNA的阳性为9例,阳性率为9%。两者均阳性为6例。两种检测方法一致率为95%。一致性较好,两者之间的阳性检出率无显著性差异(χ2=0.064P>0.05)。结论应用HCMV-pp65抗原检测及HCMV-DNA的检测可以对孕妇孕娠早期HCMV活动性感染进行监测及指导治疗,对预防及降低胎儿宫内感染和优生优育都有着极其重要的意义。

早期监测人巨细胞病毒激活感染的两种检测方法的比较

目的 探讨人巨细胞病毒 (HCMV)的低基质磷酸化蛋白 (pp6 5 )抗原血症检测与荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)方法 ,对不同人群中HCMV活动性感染的检测价值。方法 用 2种方法对从不同人群 (共 10 6例 )中收集的 2 0 4份血标本进行平行检测比较。结果 HCMVpp6 5抗原血症与血浆中HCMVDNA检测结果的一致性为 84 .8% ,相关性很高 (r=0 .86 1) ;与外周血多形核细胞 (PMNLs)中HCMVDNA检测结果的一致性为 79.8%。6例骨髓移植患者有 5例均在术后 30～ 5 0d间出现HCMVDNA拷贝数增加 ,同一时间PMNLs中HCMVDNA的拷贝数高于血浆 (81 7% )。免疫状况不同群体间HCMV激活程度不同 ,但无论有无免疫能力 ,有症状HCMV感染者HCMVDNA拷贝数平均值(7.71× 10 3 /ml)与HCMVpp6 5抗原阳染细胞数平均值 (10 4个 / 2× 10 5)均大于无症状HCMV感染者(1 5 3× 10 2 /ml;2 7个 / 2× 10 5)。结论 FQ PCR方法对监测低水平HCMV复制更为敏感 ,但HCMVpp6 5抗原血症检测对HCMV病的预测以及对抗HCMV药 (更昔洛韦 )的敏感性均高于DNA检测。两种方法的联合应用对监测HCMV活动性感染、临床疗效及预后更加客观。

荧光定量PCR在婴儿巨细胞病毒感染诊断和治疗监测中的价值

巨细胞病毒（CMV）感染在人群中广泛流行，免疫功能异常的个体易受到感染，在新生儿和小婴儿中发病率很高。小婴儿受到CMV感染后易引起神经系统异常，因此及时诊断和治疗尤为重要。目前用于诊断CMV感染以及治疗监测中最常用的方法为荧光定量PCR法，该法敏感性和特异性较高，且操作简便不易受其他物质污染，是目前临床应用的一线方法。

FQ-PCR与IFA检测HCMV感染效果比较

目的比较检测孕妇HCMV-DNA与HCMV-pp65对诊断HCMV感染的效果。方法采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测孕妇血浆HCMV-DNA及采用间接免疫荧光染色法(IFA)检测其外周血白细胞HCMV-pp65抗原,比较两者的诊断效果。结果 100例孕妇HCMV-DNA的阳性为9例,阳性率为9%,HCMV-pp65阳性为8例,阳性率为8%,两者均阳性为6例。两检测方法一致率为95%,两者之间的阳性检出率无显著性差异(χ2=0.064,P>0.05)。结论应用HCMV-DNA及HCMV-pp65抗原检测的两种联合监测,能更有效地提高孕妇早期HCMV活动性感染的诊断水平,对预防及降低胎儿宫内感染有着较好的临床价值。