多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶2在SGC7901细胞中同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊(英文)

多肽∶N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)在高尔基体中催化粘蛋白型O-糖基化的第一步.首先进行了人ppGalNAcT2多克隆抗体的制备和鉴定,进一步通过对分离的亚细胞结构进行蛋白质印迹分析,免疫细胞化学后共聚焦显微镜观察此抗体和两个高尔基体标记GS28(顺面高尔基体的分子标志)和TGN38(反面高尔基体的分子标志)来研究ppGalNAcT2在SGC7901细胞株中的亚细胞定位.结果表明:约有60%的ppGalNAcT2信号和GS28共定位,大约36%的ppGalNAcT2信号和TGN38共定位.约有34%的TGN38和ppGalNAcT2信号重叠,而约38%的反面高尔基体标志和ppGalNAcT2重叠.结论是:在SGC7901中,ppGalNAcT2同时定位于高尔基体顺面囊和反面囊中,实验证实了在高尔基体中进行粘蛋白型O-糖基化的起始反应.

电子直线加速器照射对神经胶质瘤SHG44细胞MMP2 ppGalNAcT2表达的影响及牛磺酸的防护作用

目的 :探讨电子直线加速器照射对SHG4 4细胞MMP2、ppGalNAcT2表达的影响 ,并探讨牛磺酸对此影响的防护作用。方法 :电子直线加速器 15Gy照射细胞SHG4 4作为阳性对照组 ,不照射的作为阴性对照组 ,另设三组加药组 15Gy照射 ,加药量分别为 5 0mg/L、10 0mg/L、2 0 0mg/L ,照后 12h收集。采用RT PCR法检测MMP2、ppGalNAcT2mRNA的表达差异变化。结果 :电子直线加速器照射SHG4 4细胞后MMP2上升 ,ppGalNAcT2下降 ,两者呈负相关性。而牛磺酸可使细胞在照射后与阳性对照组比MMP2下降 ,ppGalNAcT2上升 ,且与剂量相关。结论 :15Gy电子直线加速器照射促进SHG4 4细胞MMP2的表达 ,而对ppGalNAcT2有抑制作用 ;不同剂量的牛磺酸通过下调MMP2 ,上调ppGal NAclT2 ,从而抑制电离辐射引起的肿瘤细胞潜在的浸润和转移能力 ,达到生物防御作用。

γ射线对白血病细胞K562 ppGalNAcT2 mRNA表达的影响及中药多糖的防护作用

目的 探讨γ射线对白血病细胞株K562中多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2,E.C2.4.1.41)基因mR-NA表达的影响,并探讨中药多糖对此种影响的防护作用。方法 以不同剂量的^(60)COγ射线照射K562细胞,并设加中药多糖实验组,观察不同剂量(5Gy、10Gy、15Gy)γ射线对K562细胞ppGalNAcT2 mRNA表达影响,及加入不同剂量中药(50mg/L,100mg/L,200mg/L)后对10Gy照射K562细胞组中T2 mRNA表达的防护作用。以RT-PCR法检测ppGalNAcT2 mRNA的表达差异变化。结果 γ射线照射K562细胞后ppGalNAcT2 mRNA表达明显减少,且与剂量呈负相关,而中药多糖则可对抗此种作用,使加中药多糖组细胞在照射后ppGalNAcT2 mRNA表达水平维持在正常细胞水平。结论 5～15Gyγ射线照射抑制白血病细胞ppGal-NAcT2 mPNA表达,可能与肿瘤细胞受照后分化抑制有关,而中药多糖明显对抗此种抑制作用。

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶的分布及功能研究

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶家族是结构上、功能上相似的多基因家族,参与黏蛋白O-糖基化的初始阶段。家族各成员在其特异性表达分布、底物选择及功能上不完全相同,尤其是在肿瘤组织中表达,甚至有些家族成员,如GALNT2、T6、T14与肿瘤的浸润转移密切相关,参与信号转导,这也为肿瘤药物治疗靶点选择方面开辟了新的方向。

干扰素治疗病理性瘢痕的实验研究

目的 :研究体外干扰素 (INF)对瘢痕组织成纤维细胞 (FB)中转化生长因子 β1(TGF β1)、血小板衍生生长因子BB(PDGF BB)、基质金属蛋白酶 (MMP 1)以及糖基转移酶 (ppGalNAc T2 )的mRNA表达的影响 ,以求阐明干扰素对病理性瘢痕的作用机理。方法 :组织块法培养瘢痕组织FB ,传代后分成 3组①对照组 :生理盐水处理 ;②低浓度组 :10 0U/mlINF α2b处理 ;③高浓度组 :10 0 0 0U/mlINF α2b处理 ;RT PCR检测TGF β1、MMP 1、PDGF BB及ppGalNAc T2表达。结果 :体外培养瘢痕FB经 10 0U/ml及 10 0 0 0U/ml干扰素α 2b处理后 ,RT PCR检测TGF β1、PDGF BB及pp GalNAc T2表达降低 ,MMP 1表达升高 ,呈显著差异 ,且具有浓度依赖性。结论 :干扰素α2b对瘢痕FB具有抑制作用 ,其机理可能与多种细胞因子有关 ,如TGF β1、PDGF BB。

β照射对NIH3T3细胞中基质金属蛋白酶和糖基转移酶表达的影响及牛磺酸的干预作用

目的观察β射线对NIH3T3成纤维细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)和N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2,E.C2.4.1.41)基因mRNA表达的影响,并探讨牛磺酸对β辐射损伤的防护作用。方法以不同剂量的高能电子射线模拟β射线照射NIH3T3细胞,另外在15Gy照射组中提前12h加入不同浓度的牛磺酸(Tau),照后12h收集各组细胞,采用RT-PCR法检测MMP2、ppGalNAcT2在mRNA水平的表达差异。结果β射线照射NIH3T3细胞后MMP2的mRNA表达量增加,且与照射剂量呈正相关,ppGalNAcT2的变化情况正好相反,加入牛磺酸后可以起干预作用。结论5～15Gyβ射线照射对NIH3T3细胞中ppGalNAcT2在mRNA水平的表达有抑制作用,提示ppGalNAcT2可能与细胞的癌变等过程有关,牛磺酸能抑制MMP2的表达,同时促进ppGalNAcT2的表达,因而具有辐射防护作用。