肾组织preS1/S2-Ag检测在乙型肝炎病毒相关性肾炎诊断中的作用

目的:观察前S1/S2抗原(preS1/S2-Ag)及其它乙型肝炎病毒(HBV)抗原在HBV相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患者肾组织中的表达,探讨它们在HBV-GN诊断中的应用价值。方法:回顾性收集2003年1月～2013年1月于中山大学附属第三医院肾内科住院的患者,并符合以下入组标准:血清学HBsAg阳性;有血尿、蛋白尿等临床表现;经肾组织活检病理诊断为肾小球肾炎病变;排除合并有系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、糖尿病、丙肝等疾病。入组共49例。用免疫组织化学的方法对其肾组织石蜡切片进行preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检测。随机选取5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者作对照。结果:49例HBV感染合并肾小球肾炎患者中preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg检出阳性率分别为32.7%(16例)、38.8%(19例)、14.3%(7例)和46.9%(23例),总阳性率为70.2%(36例);preS1/S2-Ag主要表达在肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞和内皮细胞胞质内;其表达与肾组织HBcAg的表达呈正相关(r=0.459,P<0.01)。5例HBsAg阴性的肾小球轻微病变患者,4种抗原均未检测到;5例HBsAg阳性的非肾小球肾炎患者有2例表达HBeAg,1例表达HBcAg,无1例表达preS1/S2-Ag及HBsAg。结论:HBV-GN患者肾组织中检测到preS1/S2-Ag;preS1/S2-Ag、HBeAg、HBsAg和HBcAg联合检测可提高HBV-GN的临床诊断率。

慢性乙型肝炎表面抗原携带者前S1/S2基因的相似株现象

为了解慢性ＨＢＶ携带者体内ＨＢＶ病毒的状况，以选择ＨＢＶ前Ｓ１／Ｓ２为研究区段，应用半巢式ＰＣＲ法从３例慢性ＨＢＶ携带者血清中扩增出ＨＢＶ前Ｓ１／Ｓ２基因，分别将其克隆于噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８、Ｍ１３ｍｐ１９，每例随机筛选１０个阳性克隆，进行序列分析及遗传距离分析，结果发现：３例病人各克隆分别与同源性最好的ＨＢＶ野生株相比，存在着明显的碱基替代、缺失和插入。此类病人体内的ＨＢＶ株同源性差，克隆间最大的遗传距离为０．１２５。慢性ＨＢＶ携带者体内的ＨＢＶ株呈“相似株”分布。

Relationship between variation of HBV preS function domains and clinical consequences of HBV infection

Objective:To investigate the relationship between variation of HBV preS genes and clinical consequencesof HBV infection. Methods: We selected 3 groups (3 in each) of HBV infected individuals including those of acuteinfection with complete recovery, chronic HBV carriers and chronic severe hepatitis B. The preS genes were amplified from serum samples with half nested PCR. The PCR products were cloned into M13 vectors and 10 cloneswere randomly selected for each individual and sequenced with standard methods. A total of 90 clones were sequenced and analyzed by DNA homological comparison. Results: The characteristics of the preS genes were significantly different in HBV-infected individuals with different clinical consequences.①As for acute hepatitis B, thepreS function domains were stable and no changes in epitopes for T and B cells were found. ②For chronic HBVcarriers, the function domains within preS proteins showed potentially changes with epitope drifts of T and B cellsbecause of the high variation of HBV preS genes. ③For chronic severe hepatitis B, there were special changes inthe function domains of B cells. The abnormally high immune response would cause severe liver injury in these individuals. Conclusion: This study provides experimental evidence for researches about the possible association ofvariation of preS1/S2 functional regions with clinical consequences.

献血者乙型肝炎病毒体液免疫和细胞免疫水平研究

目的:研究自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份的体液、细胞免疫应答水平,及两者的相关性。方法:ELISA检测献血者血浆中HBsAb、HBcAb、preS1+S2-Ab的阳性率,ELISOPT检测外周血单个核细胞中抗原特异性IFN-γ分泌细胞水平。结果:体液免疫应答检测结果表明preS1+S2-Ab的检出率最高,占85.7%(48/56),核心杭体的检出率最低30.4%(17/56);特异性细胞免疫检测结果提示献血者总体preS1+S2-Ag、HBcAg的特异性细胞免疫应答水平有着良好的一致性,无统计学差异(P>0.05),但显著优于HBsAg;preS1+S2-Ag和HBsAg特异性细胞免疫和体液免疫应答有着较好的一致性,但HBcAg特异性细胞免疫和体液免疫无明确关联(P>0.05)。结论:自然状态下献血者对乙型病毒性肝炎不同抗原成份均有较好的体液、细胞免疫应答,preS1+S2的体液免疫应答水平优于表面及核心抗原提示人HBV疫苗的侯选对象。

HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定

目的构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)大分子表面蛋白基因的重组载体,以便进一步研究其基因免疫以及对宿主细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响。方法设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1/S2/S基因)片段;用HindⅢ和BamHI双酶切后,连接到质粒pcDNA3.1(+)相应酶切位点,转化宿主菌DH5α,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBV大分子表面蛋白基因的重组载体。