AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ—Tag法，以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，与复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸柱前衍生，用Waters2695 HPLC仪器，AccQ—Tag^TM柱，以醋酸钠（pH4．95）缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5止。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0．9996～0．9999（n=5），平均回收率为93．3％～104．4％（RSD值为0．88％～3．05％，n=6）。结论本法快速，简便，结果准确。

麦冬多糖单次静脉注射在大鼠体内组织分布

目的建立柱前荧光衍生-高效凝胶色谱(HPGPC)法测定大鼠组织样品中麦冬多糖的方法,并研究麦冬多糖在大鼠体内的分布特点和规律。方法将SD大鼠单次静脉注射麦冬多糖50mg·kg-1后,于5,10,30,60min取各组织,用HPGPC法测定药物浓度。结果大鼠心、肝、脾、肺、胃、肾、脑的AUC分别为3.270,2.031,2.303,6.178,4.963,214.571,0.613μg·h·mL-1。结论绝大多数药物聚集在肾脏,并以尿的形式排泄,其他组织中含药量分布顺序从高到低依次为肺、胃、心、脾、肝、脑。

柱前衍生化高效液相色谱法测定莲子心中去甲乌药碱含量

以9-芴甲基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯(Fmoc-OSu)为荧光衍生化试剂,建立了柱前荧光衍生化反相高效液相色谱法分析去甲乌药碱的高灵敏分析方法.在硼酸缓冲溶液(pH=8.5)中,去甲乌药碱与Fmoc-OSu在温和的反应条件下反应生成具有荧光性的去甲乌药碱衍生物.采用UltimateR○XB-C18(5μm,150mm×4.6mm i.d.)色谱柱,用乙腈-水(体积分数比为85∶15)等溶液强度洗脱,以λ=265nm为激发波长,λ=315nm为发射波长,对去甲乌药碱衍生物进行了检测.实验结果显示:去甲乌药碱在0.05～20μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 8),其最低检出限(S/N=3)为5.0ng/mL,加标回收率为94.1%～105.9%,RSD为2.74%(n=5).本方法灵敏度高、选择性好、准确度高,能够满足含去甲乌药碱中药材的质量控制.

HPLC法检测几种α-酮酸化合物的柱前衍生化条件优化

目的为了筛选柱前衍生-HPLC法测定α-酮酸化合物的最优衍生化条件。方法采用紫外分光光度法检测a-酮酸标准品衍生化后的最大吸收波长。运用单因素试验,以柱前衍生α-HPLC法所检测出的峰面积作为评价指标,对影响衍生化反应的因素(pH值、温度、加热时间、物质的量的比例)进行优化。结果丁酮酸、丙酮酸钠、酮戊二酸单钾盐与衍生化试剂4-硝基-1,2-苯二胺(NPDA)反应所得的衍生化产物产生的紫外吸收最大波长约为260 nm。丁酮酸最佳衍生条件是pH=3、60℃、加热2 h、衍生化试剂与其物质的量比为10∶1;丙酮酸钠最佳衍生条件是p H=3、80℃、加热1 h、衍生化试剂与其物质的量比为10∶1;酮戊二酸单钾盐最佳衍生条件是pH=5、80℃、加热1h、衍生化试剂与其物质的量比为8∶1。同时对该方法的线性范围和精密度进行了考察。结论本研究说明NPDA作为衍生化试剂与a-酮酸类化合物反应后,能够提高a-酮酸类化合物的检测灵敏度和准确性,为检测生物样品、药品、化妆品等中的a-酮酸类化合物提供参考。

HPLC法检测晚期糖化产物前体物质的柱前衍生化条件优化

目的 HPLC-柱前衍生化法测定晚期糖化产物的前体物质α-二羰基类化合物的最优衍生化条件。方法采用紫外分光光度法检测α-二羰基类化合物标准品衍生化后的最大吸收波长。运用单因素试验,以HPLC-柱前衍生化法所检测出的峰面积作为评价指标,对衍生化反应的影响因素——p H值、温度、加热时间、物质的量的比例进行优化。结果 2,3-戊二酮、甲基乙二醛、2,3-丁二酮、乙二醛用衍生化试剂4-硝基-1,2-苯二胺(NPDA)衍生化产物的紫外吸收最大波长约是260nm。2,3-戊二酮最佳衍生条件是p H值为3、40℃、加热20min、衍生化试剂与其物质的量比例为1:1;甲基乙二醛最佳衍生条件是p H值为3、60℃、加热20min、物质的量比例为8∶1;2,3-丁二酮最佳衍生条件是p H值为5、40℃、加热30min、物质的量的比例为1∶1;乙二醛最佳衍生条件是p H值为9、40℃、加热30 min、物质的量的比例为10∶1。并考察方法的线性范围和衍生物的稳定性。结论本次研究说明NPDA可在温和的反应条件下,短时间内与α-二羰基类化合物发生衍生化反应。加热温度不宜过高,加热时间不宜过长,否则衍生化产物可能会发生分解。

HPLC柱前衍生化法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量

目的:建立发酵虫草制剂中总氨基酸的含量测定方法,同时评价各发酵虫草制剂的质量。方法:采用Zorbax C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙酸钠缓冲液(A)-80%乙腈水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0~20 min,100%A→97%A;20~24 min,97%A→88%A;24~30 min,88%A→78%A;30~50 min,78%A→68%A;50~50.5 min,68%A→0%A;50.5~60 min,0%A),流速为1.0 m L·min-1,柱温为40℃,检测波长254 nm,运用外标法测定发酵虫草制剂中总氨基酸的含量。结果:各发酵虫草制剂的质量评价,对于独家生产的品种(如金水宝胶囊、百令胶囊和心肝宝胶囊),心肝宝胶囊中总氨基酸含量为199.3~224.9 mg·g^(-1);金水宝胶囊中总氨基酸含量为224.0~281.7 mg·g^(-1);百令胶囊中总氨基酸含量为294.0~346.7 mg·g^(-1),样品各批间一致性较好,可以控制总氨基酸含量结合羟脯氨酸(指标成分)占总氨基酸的含量来控制制剂质量。而对于多厂家生产的发酵虫草制剂(如宁心宝胶囊和至灵胶囊),由于生产工艺的不同和原料来源不同,总氨基酸含量差异较大,宁心宝胶囊中总氨基酸含量为234.9~337.1 mg·g^(-1),至灵胶囊总氨基酸含量为241.1~356.1 mg·g^(-1)。结论:经方法学验证,本文方法可用于测定发酵虫草制剂的氨基酸含量,也可用于评价各发酵虫草制剂的质量。

AccQ.Tag法测定人血浆中的17种氨基酸

目的 用AccQ.Tag法测定人血浆中17种氨基酸的含量.方法 用AccQ.Flour试剂衍生人血浆中的氨基酸,衍生产物用AccQ.Tag法专用C18色谱柱进行分离,梯度洗脱,用荧光检测器（λex=250 nm,λem=395 nm）检测,流动相为AccQ.Tag流动相稀释液-乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温37℃.结果 在测定的浓度范围内,17种氨基酸的浓度与峰面积比值的线性关系良好（r2＞0.9900）,平均回收率为87.7％ ～ 117.1％,批内和批间RSD分别小于10.3％、11.0％.结论 所用方法简便、稳定、分离效果好,可用于人血浆中氨基酸浓度的检测.

右江流域5种野生蔬菜的氨基酸含量及营养价值评价

采用柱前衍生rP-HPLC法测定右江流域壮族5种野生蔬菜中游离氨基酸和水解氨基酸的含量,以WHo/FAo氨基酸参考模式为评价标准,对其营养价值开展评价。游离氨基酸检测结果显示,狗肝菜、铜锤玉带草均含有18种游离氨基酸,狗肝菜、铜锤玉带草、鸭儿芹的鲜味和甜味氨酸含量较高,是味道较好的野生蔬菜。水解氨基酸检测结果显示,狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草的总氨基酸含量均较高,铜锤玉带草中的天冬氨酸和谷氨酸含量最高;5种野生蔬菜均具有8种人体必需氨基酸,其中鸭儿芹、狗肝菜、铜锤玉带草含量较高,而且药效氨基酸含量丰富。与WHo/FAo推荐标准模式相比,狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草和野芋叶柄的必需氨基酸含量配比较为合理。狗肝菜、鸭儿芹、铜锤玉带草属于较优质的蛋白质来源,具有较好的开发前景。