Prelamin A相互作用蛋白的筛选及验证（英文）

【目的】筛选衰老相关蛋白prelamin A的相互作用蛋白并验证其相互作用情况。【方法】通过酵母双杂交方法从人骨骼肌c DNA文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白。一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting验证其在细胞外的相互作用,构建Ran BPM与绿色荧光蛋白融合表达载体p EGFP-N1-Ran BPM,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒p Ds Red1-N1-prelamin A.共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察细胞内的共定位情况。【结果】筛选得到包括Ran BPM在内的21个候选相互作用蛋白。一对一回复性杂交,GST pull-down,免疫共沉淀和Western blotting证明两者能在细胞外相互作用。激光共聚焦显微观察发现Ran BPM能与带红色荧光蛋白的prelamin A蛋白在核膜共定位。【结论】Ran BPM可能通过与Prelamin A发生相互作用参与了细胞衰老的过程。

衰老相关蛋白prelamin A与MT-2A的相互作用

目的分析衰老相关蛋白prelamin A是否与MT-2A相互作用,以及MT-2A与衰老的关系。方法采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选prelamin A的相互作用蛋白,酵母一对一回复性杂交和荧光共定位验证MT-2A与prelamin A是否相互作用。RT-PCR分析MT-2A在正常和早老细胞中的表达。结果通过酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选到prelamin A的候选相互作用蛋白MT-2A,一对一回复性验证也证明两者能在酵母细胞中相互作用。构建含绿色荧光蛋白的MT-2A融合表达载体转染HEK-293细胞,激光共聚焦显微观察发现MT-2A能与带红色荧光蛋白的prelamin A蛋白在核膜共定位。研究还发现MT-2A的表达在早老细胞中显著下调(P<0.01)。结论 MT-2A作为一个新的prelamin A结合蛋白,可能在细胞早老过程中具有重要的作用。

prefabrication和prelamination的辨析

prefabrication和prelamination是修复重建外科的常用术语,中文译名分别是"预构"和"预置",在使用中存在一定的混乱和争议。文章辨析了这两个名词的内涵和外延,并探讨了其中文译名。

Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析

目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。

预构皮瓣的研制及进展

预构皮瓣是按一定的设想设计,通过手术将皮瓣预先加工,改造成符合一定要求,具有一定功能和特性的皮瓣,使其更便于修复器官缺损,更好地恢复缺损器官的功能与形态。在皮瓣内植入轴型血管、大网膜或肌肉,将随意皮瓣变成轴形血管皮瓣,扩大了游离皮瓣供区的选择,这一技术已逐渐被广大整形外科医生所重视,并视为整形外科领域又一个新进展。1994年Prifag将血管植入皮瓣形成的轴型皮瓣称为预构皮瓣(prefabrication),而将在皮瓣中填加骨、软骨等进行器官再造称为预置(prelamination),我们姑且将二者合在一起,统称为预构皮瓣。现已在临床应用的预构皮瓣有:预构皮瓣鼻成形术、预构皮瓣耳成形术、预构皮瓣眼睑成形术、预构皮瓣阴茎成形术、预构大网膜轴型皮瓣、预构血管植入轴型皮瓣、预构肌皮瓣、预构扩张皮瓣等等,均获得了良好的临床效果。

A型核纤层蛋白前体与RanBPM相互作用的验证

目的：本实验室前期工作通过酵母双杂交技术初步证明RanBPM是一个与A型核纤层蛋白前体相互作用的蛋白，本研究进一步通过细胞外蛋白沉降实验（GST pull-down analysis）验证其细胞外的相互作用。方法：构建原核表达载体pET-32a-RanBPM，分别进行RanBPM和prelamin A的原核表达，通过GST pull-down实验证明两者在体外的相互作用。结果：成功构建原核表达载体pET-32a-RanBPM，通过GST pull-down实验验证了RanBPM和prelamin A在细胞外有相互作用。结论：RanBPM和prelaminA在细胞外有相互作用。

预构皮瓣的研制及其进展

预构皮瓣是按照一定的设想和设计，通过手术将皮瓣预先施以加。，改造成具有一定要求，功能和特性的皮瓣，使其更便于修复器官缺损，更好地恢复其功能与形态。也由于在皮瓣内植入轴型血管或大网膜或肌肉，将随意皮瓣变成轴形血管皮瓣，扩大了游离皮瓣供区的选择。这一技术已逐渐被广大整形外科医生所重视，并视为整形外科领域中又一个新进展。1994年Prifag将血管植入皮瓣形成轴型皮瓣称为预构皮瓣（Pre．fabrication）。而在皮瓣中填加骨，软骨等行器官再造称为预置（Prelaminatio），我们姑且将二者合在一起，统称为预构皮瓣，现在已经被临床应用的有：预构皮瓣鼻成形术，预构皮瓣耳成形术，预构皮瓣眼睑成形术，预构皮瓣阴茎成形术。预构大网膜轴型皮瓣，预构血管植入轴型皮瓣。预构肌皮瓣，预构扩张皮瓣等等，均获得了良好的临床效果。

扩张的额部复合皮瓣预制法鼻再造术

目的:探讨一种应用扩张的额部复合皮瓣预制进行鼻再造的手术方法。方法:2008年7月～2010年1月,对7例鼻缺损患者分四期行鼻再造术。一期:埋植额部扩张器,同时额部皮下移植自体软骨,额肌深面中厚植皮;二期:取扩张器,行额部扩张复合皮瓣转移鼻再造术;三期断蒂;四期修整。结果:7例患者手术后随访6～12个月,手术均取得较好的效果。结论:扩张的额部复合皮瓣预制法鼻再造术为修复鼻全层缺损提供了一种新的术式选择。

核层蛋白A前体的法尼基化与衰老

编码核层蛋白A(lamin A)的LMNA基因突变导致法尼基化的核层蛋白A前体(prelamin A)不能被进一步加工成成熟的核层蛋白A,从而导致一种Hutchinson-Gilford早老症综合征(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)。一种更严重的早老症——限制性皮肤病(restrictive dermopathy,RD),是由于缺失核层蛋白A前体加工过程中的剪切酶ZMPSTE24引起的。ZMPSTE24的缺失阻止了法尼基化的核层蛋白A前体不能正常加工成为成熟的核层蛋白A,同时导致法尼基化的核层蛋白A前体的堆积。在HGPS和RD病人的成纤维细胞中,发现法尼基化的核层蛋白A前体都定位在核膜,从而影响细胞核膜的完整性,并导致细胞核形的异常,进而导致衰老。最近研究表明经过法尼基酰转移酶抑制剂(farnesyltransferase inhibitor,FTI)处理后的细胞的核形异常减少。同时,FTI能够改善HGPS和RD小鼠的早老症状。本文就核层蛋白A前体的法尼基化对衰老的影响有关研究进展作一综述。

Twenty years of experience with the rabbit model,a versatile model for tracheal transplantation research

Pathologies comprising more than half the length of the trachea are a challenge to the reconstructive surgeon.Innovative tracheal transplantation techniques aim to offer the patient a curative solution with a sustained improvement in quality of life.This review summarizes the authors’experience with the rabbit as a versatile model for research regarding tracheal transplantation.Because of the segmental blood supply of the trachea,it is not feasible to transplant the organ together with a well-defined vascular pedicle.As such,the key element of successful tracheal transplantation is the creation of a new blood supply.This vascularized construct is created by prelaminating the rabbit trachea heterotopically,within the lateral thoracic fascia.After prelamination,the construct and its vascular pedicle are transferred to the orthotopic position in the neck.This model has become gold standard because of the advantages of working with rabbits,the anatomy of the rabbit trachea,and the reliability of the lateral thoracic artery flap.In this paper,the key elements of surgery in the rabbit are discussed,as well as the tracheal anastomosis and the harvest of the lateral thoracic artery flap.Practical tips and tricks are presented.The data described in this review represent the fundaments of ongoing translational research in the center over the past twenty years.