Prepro-orexin基因多样性与猪产仔数的相关性

为了研究Prepro-orexin基因多样性与繁殖性能的关系,确立其在分子标记育种中的应用价值。采用PCR-RFLP法分析猪Prepro-orexin基因第62位多态性位点在二花脸、香猪、淮猪和姜曲海猪4个品种中的多样性,并分析其不同基因型对二花脸猪产仔数的影响。结果表明,二花脸和香猪分别检出三种基因型,姜曲海猪有两种基因型,而淮猪只有一种基因型。各等位基因频率和基因型频率在不同品种间存在显著差异;二花脸猪不同基因型群体间产仔数差异不显著,说明该基因多样性对产仔数的影响不显著。

长白猪prepro-orexin基因多态性及其与采食和生长性状的关联分析

为揭示食欲素前体(prepro-orexin)基因对长白猪采食和生长性状的影响,试验采用PCR产物直接测序法对132头长白猪prepro-orexin基因的C62T和G426A位点多态性进行检测,并对各位点与30~100kg阶段的采食及生长性状进行关联分析。结果表明,长白猪prepro-orexin基因C62T和G426A位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态,等位基因频率表现为野生型(C、G)高于突变型(T、A);两个位点的4种单倍型和7种单倍型组合中,CG、TA为主要单倍型,CG/CG、TA/CG和TA/TA为主要单倍型组合。C62T位点的CC基因型、G426A位点的GG基因型及CG/CG单倍型组合均可显著减少日采食次数、延长每次采食时间和提高每次采食量(P<0.05);其中CG/CG组合的日采食次数、每次采食时间、每次采食量分别较TA/CG组合显著减少1.22次、延长0.79min和提高32.18g(P<0.05),而与TA/TA组合的差异未达到显著水平(P>0.05)。C62T位点的TT基因型、G426A位点的AA基因型及TA/TA单倍型组合可显著或极显著缩短达100kg体重日龄、提高30~100kg平均日增重(P<0.05;P<0.01);TA/TA组合达100kg体重日龄分别较CG/CG、TA/CG组合分别显著缩短6.23和6.69d(P<0.05),平均日增重分别极显著提高47.91和50.04g/d(P<0.01)。结果表明,prepro-orexin基因C62T和G426A位点对长白猪采食和生长性状的影响具有明显的协同效应。

prepro-orexin细胞及其神经纤维在致痫模型大鼠中的变化

目的:研究癫痫模型大鼠中prepro-orexin及其神经纤维在不同时间点的变化情况,以阐明prepro-orexin在癫痫发生中的作用,深化癫痫的发病机制。方法:本研究采用海人酸腹腔注射诱发大鼠癫痫发作,并分别于癫痫终止后8小时、1、3、7天和慢性复发时间点行免疫组化方法检测prepro-orexin免疫反应阳性细胞数及其神经纤维的变化情况。结果:prepro-orexin免疫阳性细胞的分布主要在外侧下丘脑和穹窿周围核,在海马、大脑皮层及其他大脑组织中并未检测到,各组之间prepro-orexin阳性细胞数进行方差分析表明其差异并不显著,P>0.05;而其免疫阳性神经纤维主要分布在下丘脑、丘脑室旁核及海马,数量稀少;结论:大鼠致痫后,随着时间的推移,prepro-orexin免疫阳性细胞总体减少,但未具有统计学意义,但并不能完全认为其与癫痫发作无关;而其免疫反应神经纤维稀少。

肝性脑病大鼠OXA神经元活性变化及其临床意义研究

目的探讨肝性脑病大鼠OXA神经元表达数量、活性变化及其临床意义。方法将雄性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,进行Morris水迷宫实验检测空间学习和记忆能力,Real-time qPCR方法检测前食欲素原(prepro-orexin)mRNA表达数量,免疫荧光法分别检测OXA、c-Fos表达。结果实验组血氨浓度显著高于对照组(P<0.05),空间学习和记忆能力较对照组显著降低(P<0.05),prepro-orexin mRNA的表达及OXA阳性神经元数量组间差异无统计学意义(P>0.05),但是实验组OXA/c-Fos双染阳性的神经元数量显著低于对照组(P<0.01)。结论肝性脑病大鼠空间学习及记忆能力降低,或许与激活状态的OXA神经元减少相关,而与OXA神经元总数量无关。

内源性Orexin-A调控大鼠胃运动的中枢及外周机制

目的:探讨内源性Orexin-A(OXA)对大鼠胃运动的中枢和外周作用机制。方法:选取成年Wistar大鼠为研究对象,通过禁食诱导大鼠合成内源性OXA。血浆OXA浓度采用放射免疫法测定。实验前大鼠注射OXA受体拮抗剂SB334867,观察内源性OXA的作用。迷走神经切断术用来观察迷走神经的介导作用。胃排空采用分光光度法测量,消化间期胃运动通过在胃窦部植入一应力传感器测量。Orexin前体(PPO)在胃和下丘脑组织的表达,采用蛋白印迹确定。结果:禁食18 h后,血浆OXA水平和PPO蛋白表达显著增加(P<0.05),在禁食36 h组达到最高水平(P<0.01)。内源性OXA促进胃排空(P<0.05),抑制消化间期胃蠕动(P<0.05)。外周注射SB334867均能阻断上述胃动力效应(P<0.05),但对PPO表达没有影响。迷走神经切断术不能阻断内源性OXA的介导作用(P>0.05)。结论:禁食能诱导内源性OXA的合成,内源性OXA能加速胃排空,同时它又抑制消化间期胃蠕动。

逍遥散对慢性应激模型大鼠下丘脑外侧区瘦素受体、食欲素A和食欲素受体1表达的影响

目的探讨逍遥散抗应激的可能作用机制。方法 72只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和逍遥散组各24只。除空白对照组外,其余两组以每天3 h束缚制动方式连续21天建立慢性应激动物模型。在造模第1天,逍遥散组灌服逍遥散混悬液3.85 g/(kg·d),其余两组灌服生理盐水1 ml/100 g。记录实验第0、7、21天时大鼠体重、摄食量以及旷场实验行为学变化;实验第22天测定血清D-木糖及下丘脑外侧区中食欲素A(OXA)、瘦素含量,免疫荧光染色观察下丘脑外侧区中瘦素受体(ob-R)、OXA与食欲素受体1(OX1R)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测ob-R、前食欲素原与OX1R mRNA表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠体重、摄食量以及在旷场实验5 min移动总距离和中央区总穿格数明显减少,血清D-木糖含量下降,下丘脑外侧区中OXA、OX1R蛋白表达降低,ob-R蛋白及mRNA表达、瘦素含量升高,前食欲素原、OX1R mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。逍遥散组上述各指标均较模型组改善(P<0.05或P<0.01)。结论逍遥散调节食欲抗应激的中枢机制可能与下丘脑外侧区中Leptin-ob-R-OXA/OX1R摄食通路有关。