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Effect of total isoflavones from pueraria lobata on the expressions of preproenkephalin, prodynorphin and D2 dopamine receptor mRNA in PC12 cells induced by MPP^+
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作者 Miaoxian Dong Chengchong Li +3 位作者 Yutao Gen Chun Zhang Xiaoming Li Yingcai Niu 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2010年第1期48-52,共5页
Objective: The aim of the study was to observe the effect of total isoflavones from pueraria Iobata (TIP) on D2 dopamine receptor mRNA, preproenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA expressions in Parkinson's disea... Objective: The aim of the study was to observe the effect of total isoflavones from pueraria Iobata (TIP) on D2 dopamine receptor mRNA, preproenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA expressions in Parkinson's disease (PD) model cells induced by 1-methyl-4-phenylpyridinium ion (MPP^+). Methods: TIP was dissolved in 0.1 M NaOH and added to the culture medium at a final concentrations of 50 mg/L, 100 mg/L and 200 mg/L. Some cells (control) were exposed to 0.001 M NaOH. TIP was added to PC12 cells 30 min prior to the administration of MPP^+. TIP and MPP^+ remained in the culture medium for 96 h. D2 dopamine receptor mRNA, preproenkephalin mRNA and prodynorphin mRNA expressions were assayed by real-time quantitative reverse transcription-PCR. Results: The D2 dopamine receptor mRNA and preproenkephalin mRNA expressions were up-regulated in MPP^+ group compared with the control group, and prodynorphin mRNA expression was down-regulated in that. The D2 dopamine receptor mRNA expression being down-regulated and prodynorphin mRNA expression being up-regulated in TIP group compared with the MPP^+ group. And there was no effect of TIP on preproenkephalin gene expression in PC12 cells induced by MPP^+. Conclusion: The results suggest that TIP down-regulates the D2 dopamine receptor mRNA expression, up-regulates prodynorphin mRNA expression and not affects preproenkephalin gene expression in PC12 cells induced by MPP^+. 展开更多
关键词 Parkinson's disease (PD) total isoflavones from pueraria Iobata (TIP) preproenkephalin D2 dopamine receptor PRODYNORPHIN 1-methyl-4-phenylpyddinium ion (MPP^+)
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人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株的构建 被引量:8
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作者 安珂 田玉科 +2 位作者 杨辉 高峰 王鹏 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期167-170,共4页
目的构建人前脑啡肽原(hPPE)基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法采用DNA重组技术将质粒pCMVhPPE.SEQ中的人前脑啡肽原基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,经酶切鉴定和测序分析后,采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE... 目的构建人前脑啡肽原(hPPE)基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株。方法采用DNA重组技术将质粒pCMVhPPE.SEQ中的人前脑啡肽原基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)上,经酶切鉴定和测序分析后,采用脂质体介导法将重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE和空质粒pcDNA3.1(+)分别转染永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST)。经G418(600μg/ml)筛选,挑选阳性克隆并扩大培养。采用免疫细胞化学法、RTPCR和放射免疫法检测转染细胞亮氨酸脑啡肽(LEK)的表达及分泌,同时检测Neo基因的存在以证实转染成功。结果重组质粒经酶切后分别出现5.4kb和950bb片段,测序分析与文献报道结果一致,表明重组质粒pcDNA3.1(+)hPPE亚克隆成功。Neo基因检测显示重组质粒和空质粒已成功转染至IAST中,筛选获得IAST/hPPE和IAST/Neo两个细胞株,LEK免疫染色均阳性,但平均光密度结果显示IAST/hPPE的LEK表达明显强于IAST/Neo和IAST(P<0.01)。IAST/hPPE细胞与IAST/Neo和IAST细胞相比,hPPEmRNA表达水平和培养上清液中LEK的分泌量明显增高(P<0.01),而IAST与IAST/Neo细胞相比无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建了人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST/hPPE),为该细胞移植用于镇痛的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 前脑啡肽原 星形胶质 基因修饰 细胞株 永生化 大鼠 pcDNA3.1(+) DNA重组技术 免疫细胞化学法 重组质粒 真核表达载体 脂质体介导法 亮氨酸脑啡肽 RT-PCR L-EK mRNA表达 免疫法检测 Neo基因 平均光密度 培养上清液 显著性差异
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2Hz和100Hz电针加速脑内三种阿片肽基因表达 被引量:36
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作者 郭惠夫 王晓民 +2 位作者 田今华 侯跃平 韩济生 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期121-127,共7页
我室以往的工作证明2Hz和100Hz电针可引起中枢释放不同种类的阿片肽,本工作试图阐明不同频率的电针是否影响三种阿片肽的基因转录。用地高辛标记的反义cRNA探针进行原位杂交,显示大鼠脑内前脑啡肽原(preproenkephalin,PPE),前强... 我室以往的工作证明2Hz和100Hz电针可引起中枢释放不同种类的阿片肽,本工作试图阐明不同频率的电针是否影响三种阿片肽的基因转录。用地高辛标记的反义cRNA探针进行原位杂交,显示大鼠脑内前脑啡肽原(preproenkephalin,PPE),前强啡肽原(preprodynorphin,PPD)和前阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)mRNA。结果:(1)低、高频电针均不影响POMCmRNA的水平。(2)对PPE的影响,两种频率电针诱导脑干网状结构头端腹内侧区PPEmRNA升高的幅度相似,2Hz电针诱导视上核、视交叉上核、下丘脑室分核、弓状核、腹内侧核反外侧丘系核的PPEmRNA表达比100Hz电外高得多。(3)对PPD的表达,2Hz电针不改变脑内PPDmRNA的水平,100Hz电针可使现上核、下丘脑室旁核、腹内侧核及脑干臂旁核的PPDmRNA明显升高。鉴于肽类的加速释放必然引起合成的增加,上述结果为不同频率电针加速不同内源性阿片肽的释放和合成,从而发挥镇痛作同,提供了有力的佐证。 展开更多
关键词 电针刺激 针刺镇痛 阿片肽 基因表达 神经生理学
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人参皂苷Re对MPTP致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用 被引量:26
4
作者 徐琲琲 刘纯青 +3 位作者 马涛 周晓棉 曹颖林 张万琴 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期36-44,共9页
目的研究人参皂苷Re对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methy 4 phenyl 1,2 ,3,6 te trahydropyridine ,MPTP)诱致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法通过给C5 7BL小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病 (pa... 目的研究人参皂苷Re对 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (1 methy 4 phenyl 1,2 ,3,6 te trahydropyridine ,MPTP)诱致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法通过给C5 7BL小鼠皮下注射MPTP制备帕金森病 (parkinson’sdisease ,PD)模型 ,灌胃给予人参皂苷Re预处理后 ,运用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)、免疫组织化学染色以及图像分析等技术分别对纹状体前脑啡肽原 (preproenkephalin ,PPE)mRNA、前强啡肽原 (preprodynorphin ,PPD)mRNA的表达水平和黑质酪氨酸羟化酶 (TH)、γ 氨基丁酸 (GABA)免疫反应阳性神经元数目等多项指标进行考察。结果Re能使黑质致密部 (SNc)的TH阳性神经元和黑质网状部 (SNr)的GABA阳性神经元数目显著增多 ;Re高剂量预防组 (2 6mg·kg-1)PPD扩增产物较模型组显著增加 (P <0 0 5 ) ;Re预防组的PPE扩增产物与模型组比没有显著差异。结论人参皂苷Re对MPTP诱致帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元具有明显的保护作用 ,其作用可能与改变GABA能神经元以及PPDmRNA表达水平 ,从而调节PD中直接回路和间接回路的兴奋 展开更多
关键词 人参皂苷RE 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 前脑啡肽原 前强啡肽原 γ-氨基丁酸 酪氨酸羟化酶
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可诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株的构建 被引量:7
5
作者 徐颖 田玉科 +3 位作者 田学愎 梅伟 安珂 杨辉 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2006年第5期400-403,共4页
目的:构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株(IAST).方法:应用分子克隆技术构建含人前脑啡肽原基因(hPPE)的逆转录病毒四环素反应质粒(pRe-vTRE/hPPE);以脂质体转染法将重组质粒pRevTRE/hPPE和调节质粒pRevTet-On分别转染... 目的:构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的大鼠星形胶质细胞株(IAST).方法:应用分子克隆技术构建含人前脑啡肽原基因(hPPE)的逆转录病毒四环素反应质粒(pRe-vTRE/hPPE);以脂质体转染法将重组质粒pRevTRE/hPPE和调节质粒pRevTet-On分别转染入包装细胞PT67,分别收集病毒上清;将含有RevTet-On病毒上清感染IAST,挑选单克隆并瞬时转染报告质粒pRevTRE-Luc,通过检测萤光素酶活性,挑选出强力霉素诱导表达高、背景表达低IAST/Tet-On细胞株;再将RevTRE/hPPE病毒上清感染IAST/Tet-On细胞株,得到稳定表达脑啡肽的IAST/Tet-On/hPPE细胞株,通过RT-PCR、免疫细胞化学及间接免疫荧光染色检测该细胞株中强力霉素定量调控脑啡肽的表达.结果:重组逆转录病毒载体pRe-vTRE/hPPE构建成功;经挑选得到了高表达、低背景IAST/Tet-On细胞株,其诱导倍数为20.6;在IAST/Tet-On/hPPE细胞株中,hPPE基因表达受强力霉素调控,呈剂量依赖关系.结论:成功构建了受四环素及其衍生物强力霉素定量调控表达脑啡肽的永生化IAST,为可调控基因治疗慢性疼痛的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 人前脑啡肽 基因表达调控 多瘤病毒转化 星形胶质细胞
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大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布 被引量:6
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作者 陈良为 张建华 +1 位作者 饶志仁 施际武 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期256-260,共5页
应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结... 应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。 展开更多
关键词 前-原脑啡肽 MRNA 原位杂交 延髓 亮氨酸 神经元
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电针可增强大鼠脑内前脑啡肽原mRNA的表达:原位杂交组织化学研究 被引量:3
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作者 朱崇斌 李晓艳 +1 位作者 朱燕华 许绍芬 《神经科学》 SCIE CAS 1994年第3期21-28,共8页
本文采用原位杂交组织化学技术,结合计算机图象处理系统,对电针后大鼠脑内前脑啡肽原(PPE)mRNA的表达进行半定量的观察。PPEmRNA探针以半抗原的地高辛标记。电针10小时之后,PPEmRNA阳性信号的强度和神经元... 本文采用原位杂交组织化学技术,结合计算机图象处理系统,对电针后大鼠脑内前脑啡肽原(PPE)mRNA的表达进行半定量的观察。PPEmRNA探针以半抗原的地高辛标记。电针10小时之后,PPEmRNA阳性信号的强度和神经元内合PPEmRNA的面积在许多与痛和镇痛有关的核团明显增加,如尾核,伏核,视前区,中脑的脚间核,导水管周围灰质,黑质,红核等。表明电针促进了PPEmRNA在大鼠脑内的表达。这可能是针刺具有累积和长期效应的机制之一。 展开更多
关键词 前脑啡肽原 MRNA 电针 原位杂交组化
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强力霉素诱导表达脑啡肽细胞株的构建及其对慢性神经痛大鼠的镇痛作用 被引量:2
8
作者 徐颖 田玉科 +3 位作者 田学愎 高峰 安珂 杨辉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期617-621,共5页
目的构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株,并评价鞘内移植该细胞对慢性坐骨神经压榨性损伤(CCI)大鼠的镇痛效应。方法应用逆转录病毒转染法,建立受强力霉素调控表达人前脑啡肽原基因(hPPE)的永生化大鼠星形胶质细胞... 目的构建受强力霉素诱导表达脑啡肽的永生化大鼠星形胶质细胞株,并评价鞘内移植该细胞对慢性坐骨神经压榨性损伤(CCI)大鼠的镇痛效应。方法应用逆转录病毒转染法,建立受强力霉素调控表达人前脑啡肽原基因(hPPE)的永生化大鼠星形胶质细胞株(IAST/Tet-On/hPPE),实时定量PCR及放射免疫分析法检测强力霉素对该细胞株脑啡肽表达的定量调节。将IAST/Tet-On/hPPE细胞植入CCI大鼠蛛网膜下腔,观察腹腔注射强力霉素对其镇痛效应的影响及免疫组织化学检测脊髓背角Fos蛋白的表达。结果实时定量PCR及放射免疫分析结果显示,强力霉素可定量调控IAST/Tet-On/hPPE细胞株中脑啡肽的表达;IAST/Tet-On/hPPE植入CCI大鼠的蛛网膜下腔后,大鼠机械缩爪阈值升高(P<0.05),脊髓背角浅层Fos蛋白表达明显降低(P<0.05),且该镇痛效应受强力霉素调控。结论成功构建了可调控的定量表达脑啡肽的永生化星形胶质细胞株,其有望成为慢性疼痛治疗的新方法。 展开更多
关键词 人前脑啡肽原基因 慢性疼痛 星形胶质细胞 逆转录病毒转染法 细胞移植 大鼠
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针刺镇痛后大鼠脑中脑啡肽mRNA的基因表达及其与Fos的共存 被引量:5
9
作者 笪翠娣 范斌 周敬修 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第1期19-22,共4页
目的大鼠尾部伤害性刺激的电针抑止甩尾反射后观察脑内PPEmRNA的表达与Fos的共存变化。方法成年大鼠,分对照、电流尾部伤害性刺激、颧穴电针镇痛等组作成脑切片经脑啡肽(Enk)mRNA原位杂交,观察基因表达。部分切... 目的大鼠尾部伤害性刺激的电针抑止甩尾反射后观察脑内PPEmRNA的表达与Fos的共存变化。方法成年大鼠,分对照、电流尾部伤害性刺激、颧穴电针镇痛等组作成脑切片经脑啡肽(Enk)mRNA原位杂交,观察基因表达。部分切片再用Fos免疫组化法观察共存。结果伤害性刺激和针刺镇痛后均可在端脑、下丘脑、中脑、脑桥和延脑许多部位见到不少EnkmRNA基因表达神经元,其中额区皮质表达痛组主要在内侧,而镇痛组主要在外侧,蓝斑和PAG背侧部痛组更显著。其他各部则镇痛组更明显;并且孤束核、网状外侧核、三叉神经脊束核和延髓头端内侧部表达细胞数镇痛组明显较多,具有统计上的显著性。在EnkmRNA和Fos的共存切片中,总能见到单纯EnkmRNA、单纯Fos和共存神经元的存在。结论针刺和痛刺激均能激活内阿片肽基因表达,但程度上有差异。 展开更多
关键词 脑啡肽 颧Liao穴 针刺镇痛 大鼠 MRNA C-FOS
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生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布 被引量:2
10
作者 柳金雄 冯亚枚 陈秋生 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期294-302,共9页
肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(... 肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-Teasy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-Teasy和PPE/pGM-Teasy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录。 展开更多
关键词 鸡肠Remak神经 生长抑素前体蛋白1 前脑啡肽原 原位杂交 RNA探针
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大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 逄坤芳 陈鹤翔 +2 位作者 杨辉 卜慧莲 刘希江 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期329-332,352,共5页
目的构建大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因小发卡RNA(shRNA)及人前脑啡肽原基因(hu-man preproenkephalin gene,hPPE)双表达慢病毒载体并鉴定。方法根据大鼠DOR mRNA序列设计shRNA并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,... 目的构建大鼠δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)基因小发卡RNA(shRNA)及人前脑啡肽原基因(hu-man preproenkephalin gene,hPPE)双表达慢病毒载体并鉴定。方法根据大鼠DOR mRNA序列设计shRNA并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入至shRNA表达载体pENTR/U6vector中,构建shRNA表达质粒,并转化至感受态细胞DH5α,抽提质粒后进行测序。合成hPPE基因序列并插入到表达载体pcDNA3.1(+)中,转化至感受态细胞DH5α,挑取多个单克隆进行测序验证。将hPPE插入已构建成功的pENTR/U6-shRNA载体中,再与慢病毒载体pLenti7.3/V5-DEST重组,构建慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA并转化DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆并测序验证,保留测序验证正确的LR重组质粒。用构建的慢病毒表达载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,并测定滴度。结果经测序验证重组质粒pENTR/U6-shRNA、pcDNA3.1(+)-hPPE和慢病毒载体pLenti-CMV-hPPE-U6-shRNA均构建成功。大鼠δ阿片受体基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒包装成功,病毒滴度为1×107 TU/mL。结论大鼠DOR基因小发卡RNA及人前脑啡肽原基因双表达慢病毒载体构建成功,为研究DOR和hPPE在吗啡耐受中的作用机制及探求更加合理的镇痛方式奠定了基础。 展开更多
关键词 Δ阿片受体 人前脑啡肽原基因 RNA干扰 慢病毒 吗啡耐受
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毒蕈碱和NMDA受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干前脑啡肽原和前强啡肽原mRNA表达的影响 被引量:2
12
作者 刘惠芬 谢小虎 +1 位作者 周文华 杨国栋 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2000年第1期90-94,共5页
目的 观察毒蕈碱 (M)受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干前脑啡肽原 ( preproenkephalin ,PPE)和前强啡肽原 ( preprodynorphin ,PPD)mRNA表达的影响。 方法 本文利用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,以 β actinmRNA为内标检测了PPE和... 目的 观察毒蕈碱 (M)受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干前脑啡肽原 ( preproenkephalin ,PPE)和前强啡肽原 ( preprodynorphin ,PPD)mRNA表达的影响。 方法 本文利用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR) ,以 β actinmRNA为内标检测了PPE和PPDmRNA。结果 吗啡依赖大鼠脊髓和脑干PPE基因表达和正常大鼠相比都略有增加 ,吗啡依赖大鼠注射纳洛酮激发戒断反应后 ,脊髓PPE基因表达增加 ,而脑干中变化不明显。吗啡依赖大鼠脊髓和脑干PPD基因表达都低于正常大鼠组 ,吗啡戒断反应时脊髓PPD基因表达在 1h变化不明显 ,2h时增加到峰值 ,4h时仍高于依赖组 ,而脑干强啡肽基因表达在 1h、2h和 4h时都明显减少。经M受体拮抗剂甲基东莨菪碱和M1拮抗剂 pirenzepine处理后大鼠脊髓和脑干PPE和PPD基因表达较戒断 1h组有不同程度的增加 ;经NMDA受体拮抗剂MK 80 1处理后 ,脊髓和脑干中PPE基因较戒断组 1h无明显差异 ,脊髓和脑干PPD基因表达较戒断组明显增加 ;而经NOS抑制剂L N 硝基精氨酸甲酯 (L NAME)处理后大鼠脊髓和脑干PPE基因表达较戒断 1h组有不同程度的增加 ,脊髓和脑干PPD基因表达变化不明显。脊髓和脑干中 β actin基因表达在各处理组之间没有差别。结论 M受体拮抗剂。 展开更多
关键词 吗啡依赖 毒蕈碱 NMDA受体拮抗剂 PPE PPD mRNA
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低、高频电针诱导原癌基因c-fos/c-jun和阿片肽基因表达及其关系的比较研究 被引量:14
13
作者 郭惠夫 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期135-138,共4页
本工作对低频(2Hz)和高频(100Hz)电针引起大鼠中枢Fos/Jun表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究,并用针对c-fos/c-jun的反义寡核苷酸(ODNs)对电针引起的Fos/Jun表达进行选择性阻... 本工作对低频(2Hz)和高频(100Hz)电针引起大鼠中枢Fos/Jun表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究,并用针对c-fos/c-jun的反义寡核苷酸(ODNs)对电针引起的Fos/Jun表达进行选择性阻断,然后观察阿片肽基因表达是否受到影响,以确定Fos/Jun复合物在电针引起阿片肽基因表达中的作用。主要结果如下:(1)2Hz和100Hz电针引起脑内不同部位的Fos/Jun表达;(2)2Hz电针使前脑啡肽原(PPE)mRNA表达大幅度增高,100Hz电针也能增加PPEmRNA的转录,但不如2Hz电针的作用显著;但100Hz电针能使某些脑区的前强啡肽原(PPD)基因转录加速,而2Hz电针没有这一作用;(3)用c-fos/c-jun反义ODNs特异地阻断Fos/Jun表达后,电针引起的PPD转录加速被明显阻断,而PPE表达不受影响。提示Fos/Jun是电针引起PPD(而非PPE)基因表达的转录因子。 展开更多
关键词 针刺镇痛 电针镇痛 原癌基因 阿片肽 基因表达
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伤害性刺激及电针时大鼠脊髓中前脑啡肽原与Fos蛋白的表达 被引量:1
14
作者 范斌 笪翠娣 周敬修 《上海医科大学学报》 CSCD 1997年第6期461-464,共4页
目的:通过分子原位杂交和免疫组化分别观察骰尾段脊髓前脑啡肽原(PPENK)Fos、蛋白以及共存的变化。方法:成年SD大鼠,分成对照、尾部伤害性刺激、面部颧穴电针及针刺镇痛4组。结果:总能在伤害性刺激。针刺和针刺镇痛各组观察到单纯... 目的:通过分子原位杂交和免疫组化分别观察骰尾段脊髓前脑啡肽原(PPENK)Fos、蛋白以及共存的变化。方法:成年SD大鼠,分成对照、尾部伤害性刺激、面部颧穴电针及针刺镇痛4组。结果:总能在伤害性刺激。针刺和针刺镇痛各组观察到单纯Fos、单纯PPEmRNA和共存的3种神经元,并且总能观察到大鼠,骶尾段脊髓除IX板层以外各层的变化,但以浅层背角、V层及X层为明显。痛刺激后其表达明显加强,不但表达细胞数增多,染色也变深。针刺组则不明显。针刺镇痛有效后表达则大为减少,尤其在背角浅层与尾部伤害性刺激组相比较具有统计上的显著性(P<O.02)。结论:针刺可调控伤害性刺激时脊髓内Fos蛋白表达的变化,PPEmRNA的基因表达可能是通过。c-fos来调控的。 展开更多
关键词 前脑啡肽原 脊髓 原癌基因 C-FOS基因
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Fos蛋白参与牙髓炎疼痛中枢调控作用的实验研究
15
作者 林正梅 程斌 +2 位作者 凌均棨 陈小华 刘建伟 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期253-255,259,共4页
目的 :研究大鼠实验性牙髓炎疼痛诱导Fos蛋白表达与其靶基因脑啡肽前体mRNA转录、脑啡肽水平改变之间的关系 ,探讨牙痛的中枢调节机制。方法 :应用免疫组化方法观察Fos蛋白在三叉神经脊束核尾侧亚核 (sp5c)内的表达、原位杂交技术检测PE... 目的 :研究大鼠实验性牙髓炎疼痛诱导Fos蛋白表达与其靶基因脑啡肽前体mRNA转录、脑啡肽水平改变之间的关系 ,探讨牙痛的中枢调节机制。方法 :应用免疫组化方法观察Fos蛋白在三叉神经脊束核尾侧亚核 (sp5c)内的表达、原位杂交技术检测PENKmRNA的转录和放射免疫技术测定sp5c内ENK含量的变化。结果 :实验性牙髓炎疼痛诱发Fos蛋白在sp5c内的表达呈时间依赖性 ,Fos蛋白在诱痛后 0 5h表达 ,2h达高峰 ,4h后渐减弱 ;PENKmRNA在牙痛后 2h始转录 ,4h达高峰 ,8h后渐减弱。牙髓炎诱痛后 4hsp5c内ENK含量显著升高 (P <0 0 1)。结论 :Fos蛋白通过激活靶基因脑啡肽前体基因的转录 ,引起中枢内脑啡肽水平的升高而参与牙痛的中枢调节。 展开更多
关键词 牙痛 FOS蛋白 脑腓肽前体基因 脑啡呔 牙髓炎 中枢调节 RNA
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外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化
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作者 王亚云 武胜昔 +1 位作者 李云庆 施际武 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期63-68,共6页
以鹿角菜胶(CAR)注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型,分别于CAR刺激后6、12h和1、3d处死动物,对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下,用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽(PPE)mRNA... 以鹿角菜胶(CAR)注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型,分别于CAR刺激后6、12h和1、3d处死动物,对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下,用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽(PPE)mRNA阳性神经元、亮氨酸脑啡肽(L-ENK)和μ阿片受体(MOR)样阳性结构在大鼠脊髓背角(SDH)的分布和变化。对照组大鼠SDH内可见到大量PPEmRNA阳性神经元,这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层,CAR刺激后6h,刺激侧SDH中PPEmRNA阳性神经元的数量明显增多,12h和1d达到最高水平,3d时略有下降,但仍高于正常水平。L-ENK样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠SDH的Ⅰ、Ⅱ层,CAR刺激后1d,L-ENK样阳性结构在刺激侧SDH中的密度略有升高,3d后下降直至低于正常水平。MOR阳性胞体和纤维主要分布于SDH的Ⅱ层,CAR刺激后1d,刺激侧Ⅱ层中MOR阳性结构明显增加,并持续到刺激后3d。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。 展开更多
关键词 脊髓 伤害性刺激 PPE MRNA L-ENK Μ阿片受体 大鼠
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pIRES-GFP-前脑啡肽原载体在体内外的表达及生物学效应
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作者 刘雪琴 胡伊乐 +1 位作者 郭绍芳 任亚丽 《新乡医学院学报》 CAS 2013年第6期435-437,共3页
目的检测pIRES-GFP-前脑啡肽原载体在体内外的表达,以探索脑啡肽基因镇痛的生物学效应与临床应用的可行性。方法将大鼠前脑啡肽原基因与绿色荧光蛋白真核质粒连接构建重组质粒,体外转染机体细胞,通过阳性细胞绿色荧光表达的强弱与细胞... 目的检测pIRES-GFP-前脑啡肽原载体在体内外的表达,以探索脑啡肽基因镇痛的生物学效应与临床应用的可行性。方法将大鼠前脑啡肽原基因与绿色荧光蛋白真核质粒连接构建重组质粒,体外转染机体细胞,通过阳性细胞绿色荧光表达的强弱与细胞上清液脑啡肽水平的放射免疫测定,观察重组质粒在细胞内的合成与表达;大鼠蛛网膜下腔注射重组质粒,观察大鼠热痛阈值的变化,确定重组质粒在机体细胞内合成外源性脑啡肽的生物学活性。结果体外试验表明重组质粒转染24 h后COS-7细胞内开始有绿色荧光表达,48 h达高峰,持续27 d开始减弱,动物实验大鼠热痛阈值的变化与体外试验基本相符。结论重组质粒在机体细胞内合成的外源性脑啡肽具有与内源性脑啡肽相同的生物学活性,可以作为一种长效的基因镇痛方法应用于临床。 展开更多
关键词 pIRES—GFP-前脑啡肽原 镇痛 基因治疗 鞘内注射
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鼠尾伤害性刺激与颧髎穴电针后弓状核-导水管周围灰质-延髓头端腹内侧区的前脑啡肽原mRNA的表达及与Fos蛋白共存
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作者 笪翠娣 范斌 周敬修 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 1997年第3期130-133,144,共5页
成年SD大鼠分成对照、尾部电流所致伤害性刺激、面部颧髎穴电针三组,分别观察弓状核、中脑中央灰质和延髓头端腹内侧区原位杂交后在神经元中首脑啡肽联原(PPE)mRNA的表达与Fos免疫阳性神经元的分布。痛刺激后上述各部位的PPEmRNA在神... 成年SD大鼠分成对照、尾部电流所致伤害性刺激、面部颧髎穴电针三组,分别观察弓状核、中脑中央灰质和延髓头端腹内侧区原位杂交后在神经元中首脑啡肽联原(PPE)mRNA的表达与Fos免疫阳性神经元的分布。痛刺激后上述各部位的PPEmRNA在神经元内均有不同程度表达,但当颧髎穴电针时表达更明显,细胞数也较多。尤其在延髓头端腹内侧区更显著,而在对照动物仅在面神经核等与运动有关核团出现表达,在PPEmRNA与Fos免疫组化相结合实验中.痛组与针刺组动物中皆可观察到一定比例数神经元的共存,及单独Fos和单独EnkmRNA阳性神经元的存在。 展开更多
关键词 前脑啡肽原mRNA c-fos 尾痛刺激 颧髎穴电针 弓状核-中央灰质-延髓头端腹内侧区
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实验性癫癎时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的影响
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作者 任今鹏 黄志农 程介士 《上海医科大学学报》 CSCD 1999年第1期33-36,共4页
目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射NMDA受体阻断剂MK-801(5-methy1-10,11-dihydro-5... 目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射NMDA受体阻断剂MK-801(5-methy1-10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cycloheptan-5,10-iminemaleate)和非NMDA受体阻断剂DNQX(6,7-dinitroquinoxaline-2,3-dione)后,大鼠海马内前脑啡肽原和前强啡肽原mRNA表达的变化。结果在青霉素致4h后,海马CA1区、CA3区、齿状回前脑啡肽原mRNA和海马CA3区、齿状回前强啡肽原mRNA的表达明显增加。在青霉素致前分别在海马内微量注射MK801(6μg)和DNQX(4μg),则在减弱发作的同时,海马内前脑啡肽原mRNA的表达明显减少,而前强啡肽原mRNA的表达继续增加。 展开更多
关键词 癫痫 内阿片肽 氨基酸受体 基因表达
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静脉-吸入复合全身麻醉对患者内源性前阿片肽的影响
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作者 王华庆 徐卫平 +1 位作者 徐晖 符新春 《新医学》 2010年第4期228-231,共4页
目的:研究静脉-吸入复合全身麻醉下患者手术过程中血浆部分内源性阿片肽水平的变化和手术前后淋巴细胞内前阿片肽基因表达的变化。方法:20例美国麻醉医师协会病情分级标准(ASA)Ⅰ-Ⅱ级患者,吸入异氟醚复合靶控输注异丙酚行全身麻醉。于... 目的:研究静脉-吸入复合全身麻醉下患者手术过程中血浆部分内源性阿片肽水平的变化和手术前后淋巴细胞内前阿片肽基因表达的变化。方法:20例美国麻醉医师协会病情分级标准(ASA)Ⅰ-Ⅱ级患者,吸入异氟醚复合靶控输注异丙酚行全身麻醉。于手术开始前,开始后20、40、60、80min抽取动脉血4ml,用放射免疫分析法检测血浆β-内啡肽(β-EP)、亮氨酸脑啡肽(LEK)、强啡肽A(DynA)的水平。手术开始前、开始后80min分别抽取动脉血2.5ml,分离淋巴细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测前强啡肽原(PPD)和前脑啡肽原(PPE)的基因表达水平。结果:手术开始后各时间点血浆β-EP和LEK水平均较手术开始前升高(P<0.05);DynA水平在手术开始后20、40min较手术开始前升高(P<0.05);手术开始后80min淋巴细胞PPD/β-actin和PPE/β-actin较手术开始前均明显升高(P<0.05)。结论:静脉-吸入复合全身麻醉手术过程中患者外周血阿片肽水平升高,一些前阿片肽基因表达明显增加。 展开更多
关键词 全身麻醉 内源性阿片肽 前强啡肽原 前脑啡肽原
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