大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布

应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。

电针可增强大鼠脑内前脑啡肽原mRNA的表达:原位杂交组织化学研究

本文采用原位杂交组织化学技术，结合计算机图象处理系统，对电针后大鼠脑内前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达进行半定量的观察。ＰＰＥｍＲＮＡ探针以半抗原的地高辛标记。电针１０小时之后，ＰＰＥｍＲＮＡ阳性信号的强度和神经元内合ＰＰＥｍＲＮＡ的面积在许多与痛和镇痛有关的核团明显增加，如尾核，伏核，视前区，中脑的脚间核，导水管周围灰质，黑质，红核等。表明电针促进了ＰＰＥｍＲＮＡ在大鼠脑内的表达。这可能是针刺具有累积和长期效应的机制之一。

外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化

以鹿角菜胶（ＣＡＲ）注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型，分别于ＣＡＲ刺激后６、１２ｈ和１、３ｄ处死动物，对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下，用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ阳性神经元、亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和μ阿片受体（ＭＯＲ）样阳性结构在大鼠脊髓背角（ＳＤＨ）的分布和变化。对照组大鼠ＳＤＨ内可见到大量ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元，这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层，ＣＡＲ刺激后６ｈ，刺激侧ＳＤＨ中ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元的数量明显增多，１２ｈ和１ｄ达到最高水平，３ｄ时略有下降，但仍高于正常水平。Ｌ－ＥＮＫ样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠ＳＤＨ的Ⅰ、Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，Ｌ－ＥＮＫ样阳性结构在刺激侧ＳＤＨ中的密度略有升高，３ｄ后下降直至低于正常水平。ＭＯＲ阳性胞体和纤维主要分布于ＳＤＨ的Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，刺激侧Ⅱ层中ＭＯＲ阳性结构明显增加，并持续到刺激后３ｄ。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。

鼠尾伤害性刺激与颧髎穴电针后弓状核-导水管周围灰质-延髓头端腹内侧区的前脑啡肽原mRNA的表达及与Fos蛋白共存

成年SD大鼠分成对照、尾部电流所致伤害性刺激、面部颧髎穴电针三组，分别观察弓状核、中脑中央灰质和延髓头端腹内侧区原位杂交后在神经元中首脑啡肽联原(PPE)mRNA的表达与Fos免疫阳性神经元的分布。痛刺激后上述各部位的PPEmRNA在神经元内均有不同程度表达，但当颧髎穴电针时表达更明显，细胞数也较多。尤其在延髓头端腹内侧区更显著，而在对照动物仅在面神经核等与运动有关核团出现表达，在PPEmRNA与Fos免疫组化相结合实验中．痛组与针刺组动物中皆可观察到一定比例数神经元的共存，及单独Fos和单独EnkmRNA阳性神经元的存在。

反复注射吗啡使大鼠脑内前强啡肽原mRNA和κ受体mRNA表达增强

为探讨急性吗啡耐受的分子机制，本研究观察了急性吗啡耐受对大鼠脑内与奖赏系统有关核团中前脑啡肽原、前强啡肽原和κ受体基因表达的影响。２４只雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠连续注射６次硫酸吗啡（６．２５ｍｇ／ｋｇ）或等体积生理盐水（１ｍｌ／ｋｇ），每两次注射间期为２ｈ。在最后一次注射后３０ｍｉｎ，断头取检测样品：全脑（除去皮层，小脑和低位脑干）、伏核、尾壳核、黑质。用灵敏的液相杂交ＲＮＡ酶保护分析法检测ｍＲＮＡ水平（ｐｇｍＲＮＡ／μｇ总ＲＮＡ）。结果显示：大鼠急性吗啡耐受时中枢神经系统强啡肽和κ受体基因ｍＲＮＡ增加（即基因表达增强），但不影响脑啡肽基因表达。以上结果提示强啡肽－κ受体系统可能参与了急性吗啡耐受的形成。此外，尾壳核前强啡肽基因表达增强、黑质κ受体表达减弱，提示多次吗啡注射影响了脑内与奖赏系统有关核团中强啡肽－κ受体系统基因的表达。

用原位杂交组化方法探测肾上腺中合成前脑啡肽原的mRNA

取经Zambonis’固定液固定的豚鼠肾上腺作冰冻切片.切片经预杂交后,用含生物素标记的前脑啡肽原A(PPA)的cDNA探针的杂交液孵育,然后孵于链霉抗生物素-辣根过氧化物酶复合物溶液中,用DAB呈色.结果:约90％的肾上腺髓质细胞呈阳性反应,阳性反应产物位于细胞质中。

实验性癫癎时海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽基因表达的影响

目的阐明在癫发作与发展中起着重要作用的脑内兴奋性氨基酸类递质和内阿片肽之间的关系。方法应用原位杂交方法观察了青霉素致及海马内微量注射ＮＭＤＡ受体阻断剂ＭＫ－８０１（５－ｍｅｔｈｙ１－１０，１１－ｄｉｈｙｄｒｏ－５Ｈ－ｄｉｂｅｎｚｏ［ａ，ｄ］ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎ－５，１０－ｉｍｉｎｅｍａｌｅａｔｅ）和非ＮＭＤＡ受体阻断剂ＤＮＱＸ（６，７－ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ－２，３－ｄｉｏｎｅ）后，大鼠海马内前脑啡肽原和前强啡肽原ｍＲＮＡ表达的变化。结果在青霉素致４ｈ后，海马ＣＡ１区、ＣＡ３区、齿状回前脑啡肽原ｍＲＮＡ和海马ＣＡ３区、齿状回前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显增加。在青霉素致前分别在海马内微量注射ＭＫ８０１（６μｇ）和ＤＮＱＸ（４μｇ），则在减弱发作的同时，海马内前脑啡肽原ｍＲＮＡ的表达明显减少，而前强啡肽原ｍＲＮＡ的表达继续增加。