大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布

应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。

促性腺激素释放激素mRNA阳性细胞在大鼠胃肠胰系统的分布

用原位杂交组织化学法，研究了大鼠胃肠胰系统ＧｎＲＨ－ｍＲＮＡ阳性反应的上皮和神经细胞的分布。胃底腺、胰外分泌部和十二指肠绒毛都分布有（ＧｎＲＨ－ｍＲＶＡ强阳性反应的上皮细胞。在胃和十二指肠的肌间神经丛、粘膜下神经丛也有ＧｎＲＨ－ｍＲＮＡ阳性反应的神经细胞。以上结果和我们先前免疫组织化学研究的结果相一致，说明胃肠胰的一些上皮细胞和副交感神经节细胞都能自身合成ＧｎＲＨ。ＧｎＲＨ对胃肠胰系统可能有重要的功能意义。

电针可增强大鼠脑内前脑啡肽原mRNA的表达:原位杂交组织化学研究

本文采用原位杂交组织化学技术，结合计算机图象处理系统，对电针后大鼠脑内前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达进行半定量的观察。ＰＰＥｍＲＮＡ探针以半抗原的地高辛标记。电针１０小时之后，ＰＰＥｍＲＮＡ阳性信号的强度和神经元内合ＰＰＥｍＲＮＡ的面积在许多与痛和镇痛有关的核团明显增加，如尾核，伏核，视前区，中脑的脚间核，导水管周围灰质，黑质，红核等。表明电针促进了ＰＰＥｍＲＮＡ在大鼠脑内的表达。这可能是针刺具有累积和长期效应的机制之一。

仔猪下丘脑内生长抑素mRNA的分布定位──原位杂交组织化学法研究

用原位杂交组织化学法研究了５只仔猪下丘脑内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明，生长抑素ｚｎＲＮＡ主要见于下丘脑腹内侧核、穹窿周核、腹外侧核、弓状核、室旁核和室周核，此外在视交叉上核、视上核、下丘脑前区和后区偶见零散标记细胞。本研究结果与在绵羊和豪猪上用免疫组织化学法获得的结果略有不同，除与研究方法和种属差异有关外，还可能与实验动物年龄有关。

仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素mRNA的分布

用原位杂交组织化学法研究了５头仔猪海马结构及其周围皮质内生长抑素ｍＲＮＡ的分布。结果表明，生长抑素ｍＲＮＡ主要分布于海马的始层和齿状回的多形层，偶见于海马的辐射层和锥体细胞层。此外，在内嗅区和海马旁回内也见到标记细胞，主要位于深层。

肉用雏鸡下丘脑内生长抑素mRNA的分布

应用地高辛标记反意生长抑素ｃＲＮＡ探针原位杂交技术，研究５日龄ＡＡ肉鸡生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元胞体在下丘脑内的分布。结果表明：生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元主要分布在下丘脑外侧核吻侧部、后内侧核和后核吻侧部以及乳头体外侧核。生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元胞体为圆形、梭形和椭圆形，直径７～２０μｍ。胞质内均有强度不等的黑色或蓝黑色杂交反应物。生长抑素ｍＲＮＡ神经元胞体在下丘脑各核区的分布数目存在明显差异，其中下丘脑外侧核内的阳性胞体密度高于其它核区，提示下丘脑外侧核的生长抑素神经元的生理功能很活跃。有些核区显示的生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元有突起，说明这些神经元的树突或轴突可能可以储存生长抑素ｍＲＮＡ。

电针可促进前脑啡肽原mRNA在大鼠脊髓和延髓的表达:原位杂交研究

本实验室以往的研究表明电针可促进脊髓脑啡肽释放,本研究进一步利用原位杂交方法观察电针后前脑啡肽原mRNA在脊髓和延髓的表达。结果表明电针刺激(2Hz,1-2-3mA,30)后24h同侧脊髓背角前脑啡肽原(PPE)-mRNA阳性细胞数高于对侧。电针后对侧延髓腹内侧网状结构[包括延髓网状巨细胞核(Gi)及其α部(GiA)和Gi的外侧旁核(LPGi)]PPE-mRNA阳性细胞数高于同侧。我们推测电针诱发前脑啡肽原mRNA表达增加可弥补因脑啡肽释放增多而导致脑啡肽前体物质的损失,从而参与针刺镇痛的长期效应。

大鼠背海马内生长抑素mRNA神经元的老年变化

采用原位杂交组织化学及图像定量分析法,研究了大鼠背海马中生长抑素(SS)mRNA神经细胞的老年变化。年轻大鼠内,SSmRNA胞体主要分布于CA_1和CA_2区的锥体层和多形层、CA_3区的辐状层和多形层,以及齿状回的多形层。老年大鼠内,SSmRNA胞体则主要集中于背海马的多形层。和年轻大鼠相比,老年大鼠背海马内SSmRNA胞体数量显著减少,胞体灰度值明显升高,而胞体截面积无明显年龄变化。结果表明,大鼠背海马内SSmRNA神经细胞有明显的老年变化,这种变化的意义有待深入研究。

清开灵对脑出血大鼠前额皮层生长抑素mRNA表达影响的实验研究

本研究观察了脑出血后SOMmRNA在大脑皮层表达的变化以及中药清开灵注射液对其表达的影响。Wistar大鼠用胶原酶脑内注射法诱发脑出血，动物分别存活1、3、7d后，用地高辛标记的SOMcRNA探针进行杂交，抗地高辛抗体孵育，NBT／BCIP显色，用图像分析仪测量前额皮层Ⅱ～Ⅲ层的SOMmRNA阳性神经元。结果表明：大鼠脑出血后大脑皮层Ⅱ～Ⅲ层内表达SOMmRNA的神经元数目逐步减少，单个细胞SOMmRNA的光密度也逐步降低；清开灵可增加SOMmRNA表达的数量和神经元内SOMmRNA的强度。SOM在中枢神经系统中分布广泛，功能复杂。目前认为它还是一种神经营养性物质。我们认为SOMmRNA在脑出血后表达减少是神经元受损的表现，而清开灵治疗后SOMmRNA表达的上调是其治疗机理的重要部分。

生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布

肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-Teasy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-Teasy和PPE/pGM-Teasy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录。

实验性早期心肌缺血c-fos-mRNA原位杂交研究

用原位杂交和图像分析技术 ,观察大鼠实验性急性心肌缺血模型心肌细胞c fos mRNA的表达情况。结果显示 :正常心肌细胞表达少量c fos mRNA ;急性心肌缺血 15min ,心肌细胞表达c fos mRNA的阳性反应增强 ,心肌缺血后 30min ,c fos mRNA阳性反应达到最高峰 ,以后逐步下降。表明 :c fos mRNA的原位杂交检测可为一项灵敏的急性心肌缺血的死后诊断指标。

大鼠三叉神经节及尾侧亚核内PPTA mRNA在伤害性刺激条件下的时程变化

将福尔马林注入大鼠一侧口周皮下，用原位杂交法观察三叉神经节和三叉神经脊束核尾侧亚核内PPTAmRNA表达的时程变化。证明：PPTAmRNA在三叉神经节内的表达于刺激后4h有明显增加，24h达到高峰，48h后恢复至正常；在尾侧亚核中，PPTAmRNA的表达及变化主要限于Ⅰ、Ⅱ层，其时程变化与在三叉神经节中的变化相似。PPTAmRNA表达的增加仅出现于刺激侧的三叉神经节和尾侧亚核，而对侧和对照组则无明显变化。提示伤害性刺激可直接或跨突触增强尾侧亚核PPTAmRNA的表达，意味着PPTA在西口部伤害性信息的传递和调控中起重要作用。

面口部炎症刺激增强CGRP mRNA、PPTA mRNA及NOS在大鼠三叉神经节中的表达

为了研究ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ在伤害性刺激后大鼠ＴＧ中合成和表达的变化，将４％鹿角菜胶（ＣＡＲ）溶液注射到大鼠一侧口周皮下作为伤害性刺激模型，用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学法结合ＣＧＲＰ、ＰＰＴＡｍＲＮＡｓ原位杂交组织化学法对此进行了观察。结果显示：对照组大鼠ＴＧ中约有３２．２％、１６．２％和１０％的神经元分别呈ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性。ＣＡＲ刺激后，在刺激侧ＴＧ、ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元的数量均增多，其阳性率分别达到了３８．６％、２２．８％和１４．２％。ＴＧ中约有６．８％和７．３％的神经元同时呈ＮＯＳ和ＣＧＲＰｍＲＮＡ或ＮＯＳ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ阳性，ＣＡＲ刺激使得两种双标神经元的数量也明显增多，双标细胞占ＴＧ细胞总数的百分比分别达到了１１．０％和１０．９％，而且刺激后增加的ＮＯＳ阳性神经元主要为双标神经元。上述结果提示ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元，尤其是共存神经元可能在面口部伤害性信息的传递和调节中起重要作用，伤害性刺激所诱导的ＮＯＳ合成的增加与ＣＧＲＰｍＲＮＡ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ表达的增强可能有密切的关系。

马桑内酯致痫后大鼠海马生长抑素mRNA表达的变化

为探讨马桑内酯致痫与生长抑素的关系，用原位杂交组织化学法研究了马桑内酯致痫后大鼠海马生长抑素ｍＲＮＡ阳性神经元的变化，结果表明：致痫组大鼠ＣＡ１、ＣＡ２区及齿状回生长抑素ｍＲＮＡ的反应明显增强，以上各区的中、小神经元内生长抑素ｍＲＮＡ神经元的数目及强度明显高于正常对照组，两者有显著性差异。提示海马生长抑素阳性神经元可能参与了马桑内酯所致癫痫的发病过程。

面口部炎性刺激条件下PPTA mRNA在大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核神经元中的表达变化及与FOS的共存

将鹿角菜胶注射到大鼠口周皮下作成炎性刺激模型，用原位杂交法结合免疫组化法观察了三叉神经尾侧亚核中PPTAmRNA的表达变化及其与FOS蛋白表达的关系。结果发现：鹿角菜胶注射后，注射侧三叉神经尾侧亚核浅层内PPTAmRNA阳性神经元的数量与对照例相比明显增多。鹿角菜胶产生的炎性刺激也诱导了FOS蛋白在三叉神经尾侧亚核中的表达，FOS蛋白阳性神经元主要位于刺激侧三叉神经尾侧亚核浅层，而对照侧仅有少量分布。在三叉神经尾侧亚核浅层约60％的PPTAmRNA阳性神经元同时表达了FOS蛋白，而双重反应阳性的神经元仅占FOS阳性神经元的30％。上述结果提示：在面口部伤害性刺激诱导的三叉神经尾侧亚核内PPTAmRNA增强表达的过程中，FOS蛋白可能起着重要的调节作用。

逆行电刺激对相邻背根节PPT mRNA表达的影响

给予大鼠左侧胸 9脊神经背侧皮支或其外周断端较强电刺激后 ,用原位杂交方法观察相邻节段背根节 PPT m RNA表达的变化。结果表明 ,电刺激完整神经后 2 4h,同侧胸 8、胸 9和胸 10背根节 PPT m RNA表达的阳性细胞数明显高于对照组 ( P<0 .0 5 )。电刺激断离中枢的神经外周端后 2 4h,同侧胸 8和胸 10背根节 PPT m RNA表达的阳性细胞数明显高于对照组 ( P<0 .0 5 )。表明较强的逆行电刺激 ,可以在外周通过跨节段传递信息 ,引起相邻节段背根节的 PPT m RNA表达的增强。提示由 PPT生成的

肉用雏鸡海马结构及周围皮质样层内生长抑素mRNA的分布

应用地高辛标记反意生长抑素ｃＲＮＡ探针原位杂交技术，研究５日龄ＡＡ肉鸡生长抑索ｍＲＮＡ阳性神经元胞体在海马结构及其皮质样层内的分布。结果表明：生长抑素ｍＲＮＡ阳性胞体主要分布在背侧海马及隔海马核内；此外，在背内侧海马，旁海马及其周围皮质内也有少量标记细胞。生长抑素ｍＲＮＡ阳性胞体为梭形和椭圆形，直径约７～２０μｍ。胞质内均有强度不等的黑色或蓝黑色杂交反应物。

孤束核内生长抑素mRNA分布的原位杂交组化研究

用原位杂交法对孤束核尾侧部内生长抑素ｍＲＮＡ（ＳＯＭｍＲＶＡ）的分布进行了研究。ＳＯＭｍＲＮＡ位于不同平面孤束核内的神经元胞体和近端树突中，从ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元一般为中小型细胞，呈圆形或椭圆形，分布于孤束核的内侧亚核、背侧亚核、背外侧亚核、连合亚核、中间亚核、腹侧亚枝和腹外侧亚核，其中以最后区上段及其吻侧平面的孤束核的内侧亚核、连合亚核、背侧亚核和背外侧亚核最为多见。结果提示ＳＯＭｍＲＮＡ阳性神经元在该核尾侧部各亚核内的广泛分布可能与该核参与对血压、心血管、呼吸、胃肠道等内脏活动的中枢控制有密切关系。生长抑素作为一种神经调制物可能在上述孤束核参与的植物性神经复杂整合功能中起着重要的作用。

老龄大鼠内侧隔核TrkB mRNA的表达及人参皂甙的保护作用

目的:探讨人参皂甙对老龄大鼠内侧隔核TrkB mRNA表达的影响,为老年记忆减退性疾病的发病机制及人参皂甙的临床应用提供分子生物学基础。方法:选用Wistar大鼠,分成青年组、老龄组、给药组,采用原位杂交组织化学方法检测大鼠内侧隔核TrkB mRNA含量的变化情况。结果:老龄组内侧隔核TrkB mRNA阳性反应物的平均灰度值与青年组相比呈非常显著增高,而给药组的平均灰度值比老龄组呈显著降低。结论:老龄时内侧隔核TrkB mRNA表达低于青年组,而给药组较老龄组明显增加。说明人参皂甙具有增强TrkB mRNA表达,防止中枢神经系统神经元退行性改变的作用。

电刺激引起背根节PPTA mRNA表达的变化

给予大鼠背部左侧胸 9脊神经皮支电刺激后 ,用原位杂交方法观察了本节段背根节 PPTA m RNA表达的变化。证明电刺激后 2 4h,左侧胸 9节段背根节 PPTA m RNA的表达较对侧和对照组有显著增高 ( P<0 .0 1)。表明较强的电刺激可增加背根节细胞 PPTA m RNA的表达 ,提示