Munc13-1、Munc18-1对锰染毒SH-SY5Y细胞中多巴胺分泌障碍的影响

[背景]慢性锰中毒诱发神经递质分泌障碍一直是其造成机体损伤的重要原因之一,但锰致神经递质分泌障碍的机制目前并不清楚。[目的]探究突触前膜胞内蛋白13-1(Munc13-1)与突触融合蛋白结合蛋白18-1(Munc18-1)对氯化锰(MnCl_(2))致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)多巴胺(DA)分泌障碍的影响。[方法]建立MnCl_(2)诱导SH-SY5Y细胞模型,根据MTT法测细胞存活率,实验分组为对照组和低、中、高浓度染锰组(0、100、200、400μmol·L^(−1)MnCl_(2)),处理24 h。用酶联免疫吸附试验试剂盒测定培养基中DA分泌量。通过实时荧光定量PCR检测细胞突触融合蛋白-1(Syntaxin-1)mRNA表达水平。提取细胞总蛋白,采用Western blotting检测Munc13-1、Munc18-1以及Syntaxin-1蛋白表达水平。并对MnCl_(2)染毒浓度和DA分泌量与Munc13-1、Munc18-1蛋白表达量之间做Pearson相关性分析。[结果]与对照组比较,随着锰染毒浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);各锰染毒组细胞培养液中DA浓度随锰浓度增加呈下降趋势,与对照组和低浓度染锰组比,中、高浓度染锰组差异具有统计学意义(P<0.05);Syntaxin-1的表达量在mRNA和蛋白层次上,在各组间变化不明显,差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,Munc13-1的蛋白表达量随染锰浓度增加而依次下降,Munc18-1的蛋白表达量依次上升(P<0.05),其中与低浓度染锰组相比,高浓度染锰组Munc13-1和中、高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05),与中浓度染锰组比,高浓度染锰组Munc18-1蛋白变化有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,MnCl_(2)染毒浓度与Munc13-1蛋白表达呈负相关(r=-0.898,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈正相关(r=0.678,P<0.05);DA浓度与Munc13-1蛋白表达呈正相关(r=0.932,P<0.05),与Munc18-1蛋白表达呈负相关(r=-0.817,P<0.05)。[结论]锰染毒SH-SY5Y细胞致DA的分泌抑制,与其上调Munc18-1和下调Munc13-1蛋白的表达水平有关,这可能是锰致神经损伤的原因之一。