芍药苷对UVB诱导的小鼠色素沉着的改善与调控机制研究

为探讨芍药苷对皮肤色素沉着的改善作用及调控机制,采用UVB反复诱导方法建立C57小鼠皮肤色素沉着模型,评价芍药苷抑制皮肤色素沉着的作用及对酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)、转运蛋白RAB27A (RAB27A)、前阿黑皮素(POMC)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF2)、干细胞因子(SCF)、白介素-1α(IL-1α)的表达水平的调控作用,同时利用分子对接法分析芍药苷与靶点之间的结合活性。结果表明:外用芍药苷降低了UVB诱导的C57小鼠的经皮失水率,皮肤组织切片中的表皮厚度和黑色素含量显著降低,皮肤组织中色素沉着相关的TYR、MITF、RAB27A蛋白的表达均极显著降低(P<0.01),黑色素细胞受体结合的旁分泌因子POMC、SCF、FGF2和炎症因子IL-1α的蛋白表达均极显著降低(P<0.01);分子对接结果显示,芍药苷对角质细胞分泌的POMC和SCF有极高的结合活性(活性总分值>7)。表明芍药苷可通过抑制旁分泌因子来抑制黑色素合成,发挥抑制皮肤色素沉着的作用。

长短日照下绍鸭性成熟时间,下丘脑GnRH-I、POMC和NPY mRNA表达的差异

利用长日照和短日照环境调控绍鸭的性成熟时间,并采用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法, 检测两种日照组(n=6)鸭性成熟过程中下丘脑促性腺激素释放激素-Ⅰ(GnRH-Ⅰ)、阿片促黑激素皮质素 原(POMC)和神经肽Y(NPY)mRNA表达的发育性变化及日龄间差异。结果表明,长日照组性成熟时间较短 日照组提前30d。RT-PCR结果显示,两组鸭下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA的发育性表达模式相似,从出雏至性成熟 过程中,其表达水平呈逐渐增加趋势;长日照组下丘脑GnRH-Ⅰ mRNA表达丰度均高于同日龄短日照组,并于 120日龄时其差异达显著水平。两组POMC mRNA的表达丰度呈现先增加后降低趋势,于性成熟前后显著下降; 日照长度对其基因表达具有显著影响。两组NPY mRNA表达水平分别于60和90日龄时显著升高,于性成熟时 显著下降,但光照对其基因表达无显著影响。下丘脑GnRH-Ⅰ基因表达的显著上调可能是禽类性成熟启动的关 键因素,也是长日照条件下绍鸭性早熟的主要原因;GnRH-Ⅰ表达的上调与下丘脑POMC和NPY mRNA表达变 化有关。

电针后不同时间佐剂性关节炎大鼠炎症局部阿片肽基因表达的变化

目的:从时效关系角度观察电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠镇痛后效应随时间延续的变化规律,并探讨电针镇痛后效应的产生机制。方法:以Freunds完全佐剂造成AA大鼠模型,在电针治疗后1h、3h、6h、12h、24h和48h观测大鼠痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)和前脑啡肽(PENK)mRNA的表达。结果:电针治疗后1h、3h、6h、12h,大鼠的痛阈提高,炎症局部的POMC和PENKmRNA的表达增强。结论:电针对AA大鼠镇痛有明显的后效应,可延续12h以上,且后效应的产生与大鼠炎症局部的POMC和PENKmRNA表达增强有关。

用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在垂体的分布

用地高辛标记反意前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)cRNA探针原位杂交组化在光镜和电镜水平观察了POMC mRNA在大鼠垂体的分布,并比较了碱性磷酸酶(AKP)显色系统和辣根过氧化酶(HRP)显色系统在光镜水平上的敏感性.结果:POMC mRNA广泛地分布于垂体的中间叶和前叶.中间叶全部细胞均为POMC mRNA阳性.前叶中除前叶的腹侧缘和前叶与中间叶交界处阳性细胞较少外,都有较多的POMC mRNA阳性细胞分布.AKP显色系统比HRP显色系统敏感.在电镜水平,POMC mRNA主要分布于粗面内质网,少数分泌颗粒可能呈阳性反应,胞核未见阳性反应沉淀.文内还就阳性分泌颗粒在调节细胞合成功能方面可能起的作用进行了讨论.

6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。

早期和后期限饲对肉鸡采食量及下丘脑POMC、NPY和瘦素受体mRNA转录的影响

采用隔日限饲方式对0～2周龄(早期)和7～9周龄(后期)三黄肉鸡进行限饲处理,分别于2和9周龄时各组随机选取10羽肉鸡宰杀后采样。结果显示:与对照组相比,早期限饲组鸡体重极显著降低(P<0.01,n=40),后期限饲组鸡8周龄时体重显著降低(P<0.05,n=20),9周龄时无显著差异(P>0.05,n=10);早期限饲组鸡的平均日采食量低于对照组,而后期限饲组鸡平均日采食量升高;限饲期间肉鸡料重比增加,而自由采食期间无差异。Real-time PCR测定结果显示:肉鸡下丘脑神经肽Y(NPY)、阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)和瘦素(leptin)受体mRNA转录丰度均随日龄增加而显著升高(P<0.05,n=10);早期限饲仅引起下丘脑POMC基因转录的显著下调(P<0.05,n=10),后期限饲对下丘脑NPY、POMC和leptin受体mRNA无显著影响(P>0.05,n=10)。以上结果提示:早期2周的隔日限饲显著减少了肉鸡的采食量,从而最终导致体重的显著下降。下丘脑POMC、NPY和leptin受体基因在转录水平上表现出对慢性限饲的适应现象且差异不显著。

孵出至产蛋前绍兴鸭下丘脑GnRH-Ⅰ与POMC mRNA表达的变化

采用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法 ,检测绍兴蛋鸭出雏后至性成熟期 (12 0日龄 )下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH Ⅰ )和阿片促黑激素皮质素原 (POMC)mRNA的变化。结果表明 :从 1日龄到 12 0日龄 ,下丘脑GnRH ⅠmRNA水平逐渐升高 ,1日龄水平最低 ,90日龄时显著高于 1日龄 (P <0 0 5 ) ,12 0日龄时极显著高于 1和 30日龄 (P <0 0 1) ,显著高于 6 0日龄 (P <0 0 5 )。下丘脑POMCmRNA含量呈先升后降趋势 ,6 0日龄时表达量最高 ,其水平极显著高于 1,30和 12 0日龄 (P <0 0 1) ,显著高于 90日龄时水平 (P <0 0 5 )。提示POMC基因表达的下调与GnRH Ⅰ基因表达的上调之间可能存在联系 ,两者的协同作用可能是青春期启动的关键因素。

长期大强度运动大鼠脑组织阿黑皮素原mRNA表达的变化

目的和方法：采用生物素标记阿黑皮素原（POMC）cRNA探针（Bio－cRNA）原位来交法结合图象分析，从基因转录水平现农长时期（共7周）大强度（速度由15m／min递增至35m／min，运动时间为20-25min/d）跑台运动的大鼠不同防区PONCmRNA表达。结果：该强度下大鼠末次运动结束后POMC基因表达在额叶皮层、海马CA1下降（前者至运动结束后3h仍未恢复，后者至运动结束后对30min即恢复），在下丘脑则增强。结论：POMCmRNA表达在该强度下运动的大鼠不同脑区呈现不同的动态变化趋势。

安君宁对吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响

目的:研究安君宁对吗啡依赖雄性SD大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的影响。方法:30只体重180-220g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12d、30d组,吗啡戒断并淀粉治疗12d、30d组。吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5mg/kg/次￣50mg/kg/次,2次/日,腹腔注射)。安君宁干预方法:灌胃1g/kg/次,2次/日;对照组灌等量的淀粉。各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织。采用原位杂交技术测定伏隔核(NAs)内前阿黑皮素原(POMC)mRNA水平。结果:安君宁干预组与干预对照组相比,NAs内POMC mRNA水平显著增高(P<0.05)(吗啡戒断12、30d时,安君宁干预组NAs内POMC mRNA水平分别为0.34±0.11、0.51±0.13,干预对照组分别为0.33±0.17、0.39±0.15。(xs±)×10-2)。结论:安君宁能促进吗啡依赖大鼠伏隔核内前阿黑皮素原表达的恢复。

青年及老年大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原mRNA的表达

目的 :观察青年和老年期大鼠下丘脑弓状核阿黑皮素原 m RNA(POMC m RNA)的表达水平。 方法 :应用原位杂交技术显示 POMC m RNA和用计算机图像分析观察杂交信号的强弱及阳性细胞的面积。 结果 :与青年组相比 ,老年组下丘脑弓状核及其附近区域 POMC m RNA阳性神经元的平均灰度值下降 ;POMC m RNA阳性神经元的数目无明显变化。结论 :老年期 POMC m RNA阳性神经元相应的 m RNA表达水平下降可能是下丘脑 POMC基因衍生肽表达水平下降的原因之一。

垂体ACTH分泌瘤分泌调节的体外研究

本文对来源于柯兴氏病病人2例单纯垂体人CTH瘤用单层细胞培养的方法,以N-POMC作为ACTH分泌的指标,详细研亢了癌细胞ACTH分泌的调节。结果丧明cRH和AVP均能兴奋N-POMC分泌,并有协同作用;皮质醇对ACTH瘸细胞N-POMC分泌不抑制反使其分泌反常增加,表明皮质醇对AcTH分泌的负反馈调节消失;β-内啡肽对ACTH瘤细胞有直接兴奋N-POMC允泌的作用,这种作用可被纳洛酮阻断;GHRH_(1-44)、SRIF、AT_Ⅱ和VIP对N-POMC分泌无明显影响。

瘦素和体重调节反馈模式的研究

瘦素(Leptin)被认为是一种外周组织反映脂肪量的信号,反馈作用于中枢神经系统。近年来,瘦素的负反馈系统已被部分揭示。下丘脑调节食欲和代谢的中枢受多种分子的协同作用,包括瘦素、神经肽Y(NPY),前阿片类黑色素原(POMC)等。根据已有的对瘦素的理解,建立一个关于瘦素负反馈的模型,可加深了解体内食欲和能量平衡调节机制。

电针对肥胖大鼠下丘脑POMC、AgRP蛋白和基因表达的影响

目的观测电针对肥胖大鼠下丘脑前阿黑皮素(POMC))和刺鼠相关肽(AgRP)蛋白、基因表达的影响,探讨针刺治疗肥胖的可能机制。方法雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组,每组10只。高脂饮食喂养造肥胖模型,造模成功后给予电针组动物足三里、丰隆、关元和中脘电针10 min,3次/周,总疗程为8周。每2周记录大鼠体质量和进食量;用Western Blot法检测大鼠下丘脑POMC、AgRP蛋白表达水平,用real-time PCR法检测大鼠下丘脑POMC、AgRP基因表达。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠的体质量从干预前到干预结束后均升高(P<0.05);进食量始终较高(P<0.01);下丘脑POMC蛋白、基因表达显著降低(P<0.01);下丘脑AgRP蛋白、基因表达显著升高(P<0.01);与模型组相比,干预4周后,电针组大鼠进食量显著低于模型组(P<0.01),且该差异一直持续至干预8周后;干预6周后,电针组大鼠体质量开始低于模型组(P<0.05);干预8周后,电针组大鼠体质量均显著低于模型组(P<0.01);电针组大鼠下丘脑POMC蛋白、基因表达显著升高(P<0.01);电针组大鼠下丘脑AgRP蛋白表达低于模型组(P<0.05),基因表达显著降低(P<0.01)。结论电针能够改善肥胖大鼠下丘脑食欲肽的蛋白和基因表达,上调下丘脑抑食欲肽POMC的蛋白表达和基因表达、下调下丘脑促食欲肽AgRP的蛋白表达和基因表达,明显降低肥胖大鼠的进食欲望,减少其进食量,控制体质量增长、改善肥胖状态,这可能是针刺改善肥胖能量代谢的中枢机制之一。

促肾上腺皮质激素细胞肿瘤生化静默机制研究进展

促肾上腺皮质激素细胞肿瘤(CTs)根据患者有无库欣病表现可以分为功能型CTs和静默型CTs(SCTs)2种亚型。2种亚型肿瘤的病理表现一致,免疫组织化学染色检测均可见促肾上腺皮质激素(ACTH)和T-box转录因子19的表达,但SCTs患者外周血ACTH水平正常,无库欣病表现,且表现为侵袭性生长,术后复发率高。有研究表明SCTs生化静默的机制涉及阿片黑素皮质素原(POMC)(ACTH前体)基因的表达和ACTH分泌的各个过程。本文现围绕正常腺垂体细胞ACTH生理合成及调控,SCTs中POMC基因的转录、转录后调控、翻译后调控以及ACTH分泌异常等方面对SCTs的生化静默机制进行综述,以期为SCTs的研究和临床诊治提供参考。

针刀松解法对第三腰椎横突综合征模型大鼠脊髓背角POMCmRNA、PPEmRNA阳性细胞表达的影响

目的:观察针刀松解法对第三腰椎(L3)横突综合征大鼠脊髓背角前阿黑皮素(POMC)、前脑啡肽原(PPE)mRNA表达的影响,探讨其中枢镇痛机制。方法:选用SD雄性大鼠,随机分为4组:正常组、模型组、电针组、针刀组,后3组文献方法建立左侧L3横突综合征的动物模型,针刀组和电针组分别给予针刀松解和电针干预。造模28d后取材,应用mRNA原位杂交方法检测大鼠脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞的表达。结果:造模后,模型组大鼠脊髓背角POMC、PPE mRNA的阳性细胞表达较正常组显著增多,阳性强度显著增高(P<0.05,P<0.01),针刀组和电针组大鼠脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA阳性细胞表达较模型组显著减少,阳性强度显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:针刀松解法或电针可能通过调解脊髓背角POMC mRNA、PPE mRNA的表达,参与镇痛过程。

前体基因阿片促黑素原基因在功能性肾上腺瘤旁组织中的表达及其意义

目的 检测肾上腺内前体基因阿片促黑素原(POMC)基因编码促肾上腺皮质激素(ACTH)的序列在功能性肾上腺瘤周围组织中的表达。方法 检测3 5例皮质醇瘤、3 1例原醛瘤瘤组织和瘤旁组织ACTH的表达,逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)半定量检测编码ACTH的POMC基因的表达量,并测定其序列与Genebank中该基因进行同源性比较分析。结果 肾上腺皮质醇瘤瘤旁组织和瘤组织ACTH表达率分别为91.4%和17.1% ,肾上腺原醛瘤瘤旁组织和瘤组织ACTH表达率分别为90 .3 %和16.1% ,差异有统计学意义(P <0 .0 5 ) ;其前体基因POMCmRNA在皮质醇瘤周围和瘤组织表达分别为1.0 2±0 .10和0 .76±0 .0 3 ,原醛瘤瘤旁组织与瘤组织表达分别为0 .83±0 .0 6和0 .3 5±0 .0 1,差异有统计学意义(P <0 .0 5 ) ;肾上腺内编码ACTH的POMC基因序列与Genebank中完全相同。

随舰远航直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽及调节因子的变化

目的探讨短、中、长期驻舰远航前后直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽β-内啡肽(β-EP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)及调节因子促肾上腺皮质素释放激素(CRH)含量变化的特点,为做好航空医学保障提供依据。方法对6名为期7 d(短期)、11名为期21 d(中期)和6名为期132 d(长期)驻舰远航的直升机飞行人员,采用放射免疫法测定其远航前后血浆β-EP、ACTH 和 CRH 的含量。结果短期驻舰远航后血浆β-EP、ACTH 较远航前显著升高(t=2.839、3.104,P<0.05),血浆 CRH 无显著变化(t=0.612,P>0.05);中期远航后血浆β-EP、ACTH 和CRH 较远航前显著升高(t=3.416、2.496、1.951,P<0.01或 P<0.05);长期远航后血浆β-EP、ACTH 和 CRH 则显著性下降(t=2.988、2.427、2.129,P<0.05)。结论远航可导致直升机飞行人员血浆前阿片黑素细胞皮质激素源性肽β-EP、ACTH 及调节因子 CRH 含量发生变化,且航程对血浆β-EP、ACTH 和 CRH 的变化有不同的影响。