凋亡调节基因bcl-2,bax和fas在子宫内膜异位症中的表达

应用免疫组化法检测凋亡调节蛋白bcl 2 ,bax和fas在无异位症妇女的正常子宫内膜、腹腔液巨噬细胞与卵巢子宫内膜异位症患者在位子宫内膜、异位子宫内膜及腹腔液巨噬细胞中的表达。同时 ,用TUNEL法测出各种细胞的调亡率。结果表明 ,bcl 2在异位症患者在位、异位内膜及腹腔液巨噬细胞中的表达较无异位症者增强 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1)。bax在异位症中的表达较低 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。fas在异位症患者在位及异位内膜中的表达较低 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结果提示 ,子宫内膜异位症患者在位、异位内膜及腹腔液巨噬细胞中凋亡基因的表达与无异位症者不同 ,其凋亡率低 ,对凋亡的接受性降低 ,有利于异位内膜的种植、生存和发展。

参附强心丸对心肾综合征模型大鼠心肌细胞中LC3b、Bax表达的影响

目的:研究参附强心丸对心肾综合征(CRS)模型大鼠心肌细胞中自噬相关蛋白LC3b和促凋亡基因Bax表达的影响。方法:取大鼠随机分为假手术组(水)、模型组(水)、阳性对照组(卡托普利片2.3 mg/kg)和参附强心丸高、中、低剂量组[13.2、6.6、3.3g(生药)/kg],每组10只,除假手术组外其余各组大鼠采用腹主动脉缩窄合并肾脏急性缺血再灌注法复制CRS模型;术后8周开始ig相应药物,每天1次,连续4周。末次给药后24 h检测各组大鼠血浆中肌酐(Cr)、醛固酮(ALD)含量和心肌组织中LC3b、Bax蛋白表达,计算心室指数,观察心肌组织形态学变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血浆中Cr、ALD含量,心室指数和心肌组织中LC3b蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01);心肌细胞出现胞浆红色缺失,心肌横纹排列紊乱,细胞间隙有纤维化加重等现象。与模型组比较,阳性对照组和参附强心丸高剂量组大鼠血浆中Cr、ALD含量(除阳性对照组)和心肌组织中LC3b蛋白表达均明显降低,心肌组织中Bax蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01),心肌细胞病理变化得到改善;参附强心丸低、中剂量组大鼠的心室指数明显降低(P<0.05)。结论:参附强心丸可降低CRS模型大鼠血浆中Cr、ALD含量,抑制心肌细胞的自噬和凋亡。

补髓生血颗粒对慢性再障患者细胞凋亡及Bax基因的影响

目的 :探讨补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者骨髓造血细胞过度凋亡和Bax基因表达水平的影响及其与中医辨证分型的关系。方法 :应用原位末端标记法及原位杂交法检测慢性再障患者应用补髓生血颗粒治疗前后骨髓造血细胞凋亡阳性指数及Bax基因表达阳性指数。结果显示 :治疗后慢性再障患者骨髓造血细胞凋亡阳性指数及Bax基因表达水平均下降 ,且阳虚型细胞凋亡阳性指数接近于正常 ,阴虚型与正常组比仍有较显著差异 ;而治疗后两型Bax水平与正常对照组比仍有较大差异。结论 :补髓生血颗粒对慢性再障患者骨髓造血细胞过度凋亡有抑制作用 ,下调Bax基因表达水平仅是其抑制细胞凋亡的机制之一。

放疗前后宫颈鳞癌组织凋亡指数与bcl-2、bax基因表达的相关性研究

检测了宫颈鳞癌患者放疗前和放疗中凋亡指数 (AI)及bcl- 2、bax的基因表达 ,探讨了宫颈癌组织中基因表达与凋亡之间的关系。采用免疫组化SABC法检测bcl- 2和bax基因的表达 ,TUNEL法检测宫颈癌活检组织的细胞凋亡水平。在此基础上分析bcl- 2和bax基因表达的细胞阳性率与凋亡指数的关系。结果表明 ,X射线照射 10Gy后 ,宫颈癌组织bax基因表达增强 (p<0 .0 5 ) ,凋亡指数亦明显增加 (p <0 .0 1) ,bcl- 2基因表达的细胞阳性率水平无明显改变 (p >0 .0 5 )。照射前宫颈癌组织bcl- 2和bax的基因综合表达细胞阳性率与自发凋亡相关性较差 (p >0 .0 5 ,r=0 .370 3,其上界为 0 .70 71) ,而 10Gy照射后 ,宫颈癌组织中bcl- 2和bax的综合表达细胞阳性率与辐射诱导的凋亡具有明显的相关性 (p <0 .0 5 ,r =0 .5 2 6 4,其上界为 0 .70 71)。

促凋亡基因Bax在膀胱癌表达的免疫组化检测

目的：研究促凋亡基因Ｂａｘ在膀胱移行细胞癌（ＴＣＣ）中的表达，探讨Ｂａｘ在ＴＣＣ发生、发展中的作用和预后复发中的意义。方法：采用兔抗人Ｂａｘ多克隆抗体及Ｓ－Ｐ免疫组化法检测。结果：５６例ＴＣＣ中有３４例Ｂａｘ蛋白表达阳性，阳性率６０．７％。２０例正常膀胱粘膜中有６例表达阳性，阳性率３０％。两组差异显著（Ｐ＜０．０５）。Ｂａｘ蛋白表达部位在细胞胞浆中。Ｂａｘ蛋白表达与病理分级、临床分期及肿瘤复发无显著相关性。结论：促凋亡基因Ｂａｘ在大部分ＴＣＣ中具有不同程度的表达与其发生有关，与ＴＣＣ分级、分期及复发无关。

过度疲劳状态模型大鼠心脏功能及心肌细胞凋亡调控因子的变化

背景:力竭运动是超出人或动物生理极限的运动,强烈的运动刺激会打破机体原有的稳态,从而引起一系列应激反应,过度应激会出现损伤和功能异常。目的:通过大鼠心肌细胞运动性疲劳模型分析导致运动性心脏猝死的相关因素。方法:130只SD大鼠购自成都达硕生物科技公司。随机选取7只大鼠作为空白组对照,其余大鼠为疲劳模型,对大鼠进行游泳训练,每36 h训练1次,连续训练致过度疲劳。建模成功后出现超量恢复的负叠加状态即为过度疲劳状态,并分别训练3×36 h,6×36 h,9×36 h后,随机处死各7只大鼠,分别记录为疲劳组A组,疲劳组B组和疲劳组C组;训练过程中或训练结束24h死亡的大鼠(排除因呛水死亡的大鼠)记为运动性猝死组。TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡;免疫组织化学方法心肌组织Bax、Bcl-2表达;苏木精-伊红染色观察细胞形态变化。结果与结论:①在猝死组中,心肌纤维与其余组相比较为纤细,部分肌纤维出现断裂,血管极度扩张,心肌出现严重坏死伴随充血出血;②疲劳组及猝死组心肌细胞凋亡指数、心肌细胞凋亡数量都出现明显的增长(P <0.05);③当处于过度疲劳状态时,大鼠心脏组织中的促凋亡蛋白数量明显增加(P <0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降(P <0.01);④结果提示,连续训练而导致大鼠处于过度疲劳状态,会引发大鼠心肌细胞形态结构方面的变化,甚至导致损害,此时心肌组织中所含有的Bcl-2和Bax蛋白会出现异常表达情况。由于心肌细胞受到损害而导致心肌细胞凋亡,数量明显减少,进而影响整体心脏的结构以及功能,最终导致心源性运动性猝死。

梗死相关血管晚期再灌注对实验性心肌梗死心肌细胞凋亡的影响

目的探讨犬急性心肌梗死后梗死相关血管晚期再灌注对梗死周边缺血区心肌细胞凋亡以及凋亡相关基因bcl-2、bax及其相关蛋白表达的影响。方法健康成年杂交犬28只,全身麻醉下常规开胸暴露冠状动脉后随机分为三组:假手术组(n=8)、急性心肌梗死组(n=10)和晚期再灌注组(n=10)。假手术组仅行左冠状动脉前降支下穿过丝线而不结扎冠状动脉,急性心肌梗死组行左冠状动脉前降支高位永久结扎,晚期再灌注组在高位结扎左冠状动脉前降支6 h后松解结扎线予以6 h的再灌注处理。共有23只犬模型制作成功。各组犬均于术后12 h处死,采集心肌标本。使用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应法检测心肌细胞bcl-2和bax mRNA表达水平,免疫组织化学染色和蛋白印迹法分析bcl-2、bax在心肌细胞中的表达情况。结果晚期再灌注组心肌细胞凋亡指数较急性心肌梗死组明显减少(P<0.05),且两组心肌细胞凋亡指数均高于假手术组(P<0.01)。急性心肌梗死组和晚期再灌注组bcl-2和bax mRNA的表达均明显高于假手术组(P<0.01),且晚期再灌注组bax mRNA的表达明显低于急性心肌梗死组(P<0.05),而bcl-2 mRNA两组间差异无显著性。与假手术组相比,急性心肌梗死组和晚期再灌注组bcl-2蛋白的表达均明显升高(P<0.01),其中在晚期再灌注组的表达略高于急性心肌梗死组,但差异无显著性;晚期再灌注组bax蛋白的表达明显高于假手术组(P<0.01),但明显低于急性心肌梗死组(P<0.05)。结论急性心肌梗死后晚期再灌注可以减少梗死周边缺血区心肌细胞凋亡,其机制可能与心肌细胞bax基因及其相应的蛋白表达减少有关。

奈达铂体外诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制

目的探讨奈达铂(NDP)体外对人肺腺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法采用四氮甲唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的NDP对A549细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化;半定量PCR分析凋亡基因Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达情况。结果 NDP能显著抑制A549细胞的生长;FCM结果显示,10μg/mL NDP作用A549细胞48h后,与对照组相比,细胞凋亡明显增加[(25.14±3.97)%vs.(8.01±1.46)%];S期细胞的比例增加[(52.73±1.66)%vs.(38.38±3.91)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,Bax、Caspase-3、Caspase-9表达增加(P<0.05)。结论 NDP可抑制A549细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、细胞S期阻滞及上调Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达有关。

银杏内酯、银杏黄酮对蛛网膜下腔出血及脑淋巴阻滞后大鼠脑组织促凋亡基因Fas配体表达的影响

目的探讨银杏内酯、银杏黄酮对蛛网膜下腔出血(SAH)及脑淋巴阻滞(CLB)后大鼠脑组织促凋亡基因Fas配体(FasL)表达的影响。方法将96只Wistar大鼠分为正常对照组、SAH组、SAH+CLB组、SAH+CLB+生理盐水组(NS组),以及银杏内酯高、低剂量组和银杏黄酮高、低剂量组。用结扎颈部淋巴管、摘除淋巴结及注入自体动脉血法制作CLB和SAH大鼠模型。制作CLB模型后1 d诱导SAH模型。用免疫荧光法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠脑组织FasL蛋白及mRNA的表达。结果各模型组大鼠脑组织FasL蛋白及mRNA表达明显高于正常对照组(P<0.05～0.01),其中以SAH+CLB组、NS组表达最高。SAH组、银杏内酯和银杏黄酮高剂量组大鼠脑组织FasL蛋白及mRNA的表达水平明显低于SAH+CLB组、NS组(均P<0.01),其中两高剂量组表达又明显低于低剂量组(均P<0.01),两低剂量组大鼠脑组织FasL蛋白阳性细胞数与SAH+CLB组及NS组差异无统计学意义。结论 SAH+CLB能诱导脑组织FasL表达水平显著增高,银杏内酯和银杏黄酮对其有抑制作用,尤以高剂量组效果更明显。

凋亡基因与分娩发动相关性的研究进展

分娩动因触发机制复杂,学说众多,至今为止尚没有一个学说能完美阐释其机制。目前众多研究学者倾向于分娩发动是多种因素综合作用的结果。在整个妊娠过程中,Bcl-2/Bax、Fas/Fasl的表达水平高低决定着胎盘细胞的生长或凋亡。随着妊娠的继续,Bax、Fas表达水平逐渐升高,滋养层细胞逐渐减少,一直持续到胎儿足月。胎盘细胞的这种变化,不仅增加了细胞的凋亡,同时也减少了细胞的增殖,从而导致胎盘功能和结构异常,刺激子宫收缩,引起胎膜破裂,促进缩宫物质的产生,导致分娩的发动。

KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中的表达及与预后的相关性研究

目的探讨KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在白血病病人中的表达及与预后的相关性。方法选择2016年7月至2018年1月收治的老年白血病病人156例作为研究对象,设为观察组,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)67例,急性髓系白血病60例,慢性髓系白血病(CML)29例,所有病人均给予常规方法治疗,随访2年。选择同期健康体检的老年人79例,设为对照组。完成基因组DNA提取,检测KIR2DL4基因分型;采用实时荧光PCR技术测定2组促凋亡基因HtrA2 mRNA水平;对KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2表达与老年白血病病人预后的相关性进行分析。结果2组KIR2DL4基因多态性中2DL4-001、2DL4-005、2DL4-006、2DL4-008、2DL4-0011差异无统计学意义(P>0.05);观察组9A型KIR2DL4高于对照组(P<0.05);10A型KIR2DL4低于对照组(P<0.05)。观察组HtrA2 mRNA水平高于对照组(P<0.05)。随访期间死亡54例,死亡率为34.62%。死亡组2DL4-0011、9A型KIR2DL4检出率均高于存活组(P<0.05),10A型KIR2DL4检出率和HtrA2表达水平低于存活组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果表明老年白血病病人预后与2DL4-006、9A型KIR2DL4基因多态性及HtrA2表达水平均有关(P<0.05)。结论KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中表达异常,其水平与预后存在相关性。

FGF13通过ROS介导抑制乳腺癌细胞MCF7凋亡

[目的]探究成纤维细胞生长因子13(Fibroblast growth factor 13,FGF13)对乳腺癌细胞MCF7凋亡的调控作用。[方法]Western Blotting和免疫组织化学染色检测FGF13的表达;构建干扰和超表达FGF13的MCF7细胞株;TUNEL法和Western Blotting检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species, ROS)。[结果]与正常乳腺细胞相比,FGF13在乳腺癌MCF7细胞中表达升高(0.16±0.01 vs 3.89±0.23,P<0.001)。干扰FGF13后,MCF7细胞凋亡率升高(2.20%±0.10%vs 10.79%±0.69%,P<0.001),促凋亡蛋白Bax(0.99±0.02 vs 2.56±0.02)、Caspase 3(1.00±0.01 vs 1.70±0.01)和p53(0.98±0.01 vs 2.22±0.03)的表达上调(P<0.001),而抗凋亡蛋白Bcl-xl(0.99±0.01 vs 0.29±0.01)、Bcl-2(0.99±0.01 vs 0.27±0.01)的表达下调(P<0.001)。相反,超表达FGF13后,细胞凋亡率和促凋亡蛋白的表达均降低(P<0.001),而抗凋亡蛋白的表达均升高(P<0.001)。而且,干扰FGF13的表达引起细胞内ROS水平升高(1 552.00±51.37 vs 2 714.00±55.19,P<0.001),而超表达则导致ROS减少(2 102.83±65.29 vs 1 111.67±63.53,P<0.001)。[结论]FGF13可能通过ROS介导抑制乳腺癌MCF7细胞凋亡。

PUMA对人体肿瘤的促凋亡作用

p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)是Bcl-2蛋白家族的促凋亡成员之一,具有强大的促凋亡作用。研究发现PUMA表达水平降低与肿瘤的发生密切相关,上调肿瘤细胞中PUMA的表达可以增强肿瘤细胞对放化疗的敏感性,说明PUMA是一个非常有前景的肿瘤基因治疗靶点。本文简要综述了PUMA对人体肿瘤促凋亡作用的研究进展。

母源纳米硒对岢岚绒山羊后代睾丸发育的影响

为了研究母源纳米硒对后代羔羊睾丸发育的影响,在哺乳母羊日粮中添加0.5 mg/kg的纳米硒,120 d哺乳期结束后,采用原子荧光和可见光分光光度法、巴氏染色法、TUNEL法和Real-time PCR法,检测母羊与羔羊供试样品的硒含量、抗氧化性能、精子形态、睾丸组织凋亡和凋亡基因表达。结果显示:纳米硒添加组(S组)的母羊及羔羊血液及母乳硒含量均极显著高于正常饲喂组(C组)(P<0.01);C组硒含量排序为母羊血硒>初乳>羔羊血硒>常乳,S组中硒含量高低比较为初乳>母羊血硒>羔羊血硒>常乳;C组和S组母羊组织硒的沉积顺序均为肾脏>肝脏>心肌;C组羔羊组织中硒的沉积顺序是肾脏>肝脏≈睾丸>心肌,S组羔羊组织硒的沉积顺序为睾丸>肾脏>肝脏>心肌;S组睾丸组织发育显著优于C组(P<0.05),S组精子畸形率极显著降低(P<0.01);S组羔羊睾丸组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的抗氧化活性极显著高于C组(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)的活性显著提高(P<0.05),丙二醛(MDA)的浓度极显著降低(P<0.01);TUNEL检测S组羔羊睾丸组织细胞凋亡显著低于C组(P<0.05),促凋亡基因(Bax)的表达极显著降低(P<0.01)。结果表明:哺乳母羊日粮中添加纳米硒可以通过血乳屏障传递来提高后代公羔血液及睾丸组织的抗氧化力,促进睾丸组织发育,降低精子畸形率。