基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因及其表达验证

【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根据基因丰度结果确定后续研究的功能基因。利用大肠杆菌BL21(DE3)对功能基因进行诱导表达,对表达产物进行酶活性测定。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,将密码子优化后的功能基因分别敲入枯草芽孢杆菌C6基因组ctc位点并进行表达验证。【结果】从Fosmid文库1700个克隆子中筛选到1个具有蛋白酶活性的阳性克隆Pro4-C5。通过二代测序技术,鉴定出3个潜在的蛋白酶基因gene0833(内肽酶,EC编号:EC3.4.21.53)、gene0196(金属内肽酶,EC编号:EC3.4.24)和gene0585(羧肽酶,EC编号:EC3.4.17.14)以及1个L-天冬酰胺酶基因(gene0683,EC编号:EC3.5.1.1)。以pET-28a(+)为表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)原核诱导表达发现,gene0585和gene0196未表达;gene0833表达的蛋白分子质量为87 ku,蛋白酶活性为10.45 U/mL;gene0683表达的蛋白分子质量为37 ku,L-天冬酰胺酶活性为88.52 U/mL,同时发现该蛋白也具有蛋白酶活性,酶活性为5.25 U/mL。将密码子优化后的gene0683和gene0833定点敲入枯草芽孢杆菌C6基因组中表达发现,gene0833未表达,gene0683表达的蛋白酶活性为109.72 U/mL,相比原始菌株(100.97 U/mL)显著提高了8.67%(P<0.01);L-天冬酰胺酶活性为31.63 U/mL,相比原始菌株(22.79 U/mL)显著提高了30.06%(P<0.01)。【结论】从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选和鉴定出了2个具有蛋白酶活性的功能基因(gene0833和gene0683),均来源于微小杆菌属(Exiguobacterium),其中gene0683在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达产物具有较高的蛋白酶和L-天冬酰胺酶酶活性。

柠条资源饲料化开发技术及在反刍动物生产中应用的研究进展

柠条是我国西北地区防风固沙、改善生态的重要豆科灌木,具有生物量大和抗逆性强等优点,富含木质纤维素、氨基酸、多酚及黄酮等物质,具备较高的营养价值和潜在利用价值。文章综述了柠条的营养特性、饲料化利用方式及饲用价值,总结了其在反刍动物中的饲喂效果,剖析了柠条饲料化利用难点及利用方式,同时,对柠条未来研究与开发方向进行了展望,为柠条非常规饲料资源的深入开发与利用提供参考。

中国与哈萨克斯坦贸易现状及竞争力研究——基于“一带一路”倡议提出十周年背景

基于UN Comtrade数据库SITC的Rev.4分类,构建了比较优势、竞争优势和互补优势的贸易竞争力综合指标体系,进而从总体产业和细分产业层面进行贸易竞争力研究。结果表明:2022年中国按原材料的制成品、机械运输设备和杂项制品三类产品具有比较优势和竞争优势,哈萨克斯坦非食用原料、燃料矿物品和按原材料的制成品三类产品具有比较优势和竞争优势;2022年中对哈按原材料的制成品和杂项制品具有互补优势,哈对中非食用原料和按原材料的制成品具有互补优势。通过对细分产业的进一步分析,提出了提升优势产业核心竞争力、提高互补产业合作水平、加强重点产业贸易联系、拓展其他类产业与沿线国家经贸合作、推动中哈产能合作全面发展等对策建议。

川西地区超高压气井井下节流设计及投产技术

随着天然气勘探开发进程的深入,出现越来越多的超高压气藏。四川盆地西部地区(简称“川西地区”)部分超高压气井的原始地层压力已高达130 MPa、关井井口压力达110 MPa,传统的天然气水合物防治技术措施不足以满足超高压气井的安全生产需要。而井下节流技术作为一种高效的天然气水合物防治技术,可在提高采气集输系统安全性的同时降低地面建设成本,已在国内西南油气田、长庆油田、塔里木油田等得到广泛应用。川西地区超高压气井亟须开展井下节流工艺的现场应用。为此,从关键参数的计算方法入手,结合现场参数,对超高压气井的井下节流工艺设计方法及投产技术进行研究,为现场应用奠定基础。研究结果表明:①通过DAK法、LXF法、修正LXF法计算偏差系数与实测偏差系数的对比分析,推荐修正LXF法作为超高压气藏天然气偏差系数的计算方法。②井下节流工艺设计主要针对两个参数,即节流器下入深度、节流嘴直径;通过对应公式代入相关参数后的反复试算,可确定节流器下入深度,以满足节流后温度高于对应深度处的水合物生成温度;同时,结合压力、温度、预计产量等参数,优选节流嘴直径。③超高压气井从开井到井下节流器稳定发挥作用期间,井口面临高压节流,因此,在开井瞬间避免井口针阀冰堵,是下入井下节流器的超高压气井安全投产的关键。④针对不同区块的超高压气井,可通过瞬态软件模拟不同开井制度下井口压力、温度、产气量和水合物过冷度随时间的变化趋势,从而优选开井制度,保证超高压气井顺利投产。研究结果为川西地区超高压气井井下节流工艺的现场应用奠定了基础,提供了技术方法。

高比例可再生能源电力系统中火电深度调峰改造经济性分析

随着可再生能源的大规模渗透,电力系统的调峰压力越来越大。为此提出了采用时序生产模拟对建立的模型进行仿真,以燃煤发电成本以及机组启停成本的经济性最优作为目标函数,然后围绕目标函数建立约束。结果表明:对机组本身进行改造,效益远高于加储能装置,而且机组节省启停的费用远高于增发的可再生能源收益。

大倾角煤层综采产效要素系统分析与促产提效精准策略研究

大倾角煤层迄今仍为国际公认的复杂难采煤层,我国赋存较多且广泛,煤质优良。近10多年,先进的大倾角煤层长壁综采技术发展较快,工作环境改善,劳动强度降低,安全水平提升,但一直存在产量低、效率差等亟待解决的问题,致使综采技术经济优势和投资效益不能充分发挥,制约了大倾角煤层综采的高效持续发展。基于多年的系统研究与工程实践,综合分析认为大倾角煤层综采产量效率主要受到地质、设备、工艺、人员、管理、其他等6方面的因素制约,并确定各因素的权重。依据各影响因数的权重有的放矢地采取精准探测、精准检修、精准操作、精准管理、精准培训和精准补充等措施,尤其应更加关注采矿自动化和智能化发展方向并将其作为大倾角煤层综采促产提效的核心精准对策,从根本上改变大倾角煤层综采用人多、产效低的被动现状,实现大倾角煤层长壁综采安全高产减人提效之目标。

饲料桑加工工艺、生物学活性及对动物生产应用的研究进展

桑叶作为一种重要的药食同源植物资源,具有无残留、无耐药性、毒副作用低和多功能等特点;富含蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质等营养成分,具有降血脂、降胆固醇、抗氧化等生物学功能,在动物生产中有广阔的应用前景。另外,桑叶的加工形式多样,不同的加工工艺使饲料桑产生不同的饲用效果。寻求更合理的加工工艺提高饲料桑作为饲料原料的利用效果是目前饲料桑资源开发利用的重要研究方向。文章综述了饲料桑的加工工艺、生物学活性及其在动物生产上的作用,并提出存在问题及开发应用前景,旨在为桑叶的作用机制及开发利用提供参考。

大运河文化带传统技艺类非物质文化遗产的时空分异与传承保护

传统技艺类非物质文化遗产的传承保护既是大运河文化带空间生产的内容,又直接推动着空间本身的生产。历时性的空间生产最终导致大运河文化带传统技艺类非物质文化遗产空间分异格局的形成。当前大运河文化带传统技艺类非物质文化遗产整体分散、局部群簇的分布特征,正是非物质文化遗产空间生产的累积结果和直观反映。大运河贯通南北后,大运河文化带传统技艺类非物质文化遗产呈现出由多中心分散到向运河两端集中分布演变的时空分异规律。应立足大运河文化带历时性的空间生产逻辑,从建构传统技艺类非物质文化遗产的空间生产场域、塑造传统技艺类非物质文化遗产文化空间的社会共识、凝结传统技艺类非物质文化遗产的文化意识系统等方面探讨大运河文化带传统技艺类非物质文化遗产的传承保护。

加氏乳杆菌的特性与生物学功能及其生产应用

加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)是一种定居在人类胃肠道、口腔、阴道中的常见微生物,具有多种益生特性,主要因其减肥特性而闻名。目前主要被应用于食品行业,能够降低金黄色葡萄球菌等病原体在肉产品中的生长,还能作为人用益生菌改善人体胃肠道功能。文章综述了加氏乳杆菌的相关生物学功能及其在家禽生产上的应用及前景,以期为加氏乳杆菌复合制剂保健、治疗疾病等方面提供参考。

定型钢模在引江济淮朱集站肘型流道中的应用

针对引江济淮工程朱集泵站大尺寸肘形流道施工技术要求高、模板加工难度大、模板易发生变形、模板加工周期长等问题,采用在普通装配式钢模的基础上进行全断面整体制作、分拆安装的方法,解决了大型泵站肘形流道线形、模板体系稳定性及外观质量难控制的难题。

大庆外围低渗透油藏注水开发调整技术研究

依据大庆外围已开发扶杨油层油藏的地质特征和注水开发动态特点,研究了低渗透储层有效驱动体系、裂缝基质系统渗流特征、裂缝储层水驱油特点、裂缝储层渗吸法采油机理。应用矿场资料求取启动压力梯度,建立了有效驱动模型。在此基础上,以提高扶杨裂缝性油层有效动用为核心,进行了线状注水方式和井网加密调整的研究。将这些技术用于大庆外围扶杨油层的注水开发调整,提高和改善了外围油田的开发效果。

相国寺石炭系气藏改建地下储气库运行参数设计

相国寺气田位于重庆市渝北、北碚区境内。该气田石炭系气藏地理位置优越,储层分布稳定,储层渗流性好,气质纯,气井产能高,井间连通性好,开发中表现出视均质气藏特征,盖层和断层封闭性好,水体能量有限,地层水不活跃,非常有利于改建地下储气库。为此,在比较了枯竭气藏改建地下储气库与气藏开发的异同之后,根据相国寺地下储气库的定位及调峰需求(主要用于解决川渝地区天然气市场的季节调峰问题,可为中卫—贵阳管线提供季节调峰,同时具备天然气战略储备应急能力),利用该气藏丰富的静态资料和长期开发的动态资料,优化设计了储气库的上限压力、下限压力、库容量、工作气量、垫底气量、注采井数等关键运行参数。模拟结果表明:相国寺气田石炭系气藏改建地下储气库后,运行压力介于11.7～28.0MPa,库容量可达40.5×108 m3,垫底气量为17.7×108 m3,工作气量为22.8×108m3,储气库具备较强的调峰能力。最后还对该储气库的注采方案进行了设计分析。

油菜高油种质+化学诱导雄性不育杂优利用模式及其应用技术

应用CHA配制油菜杂交种比CMS、GMS快速、安全和高效。李殿荣等筛选研制的SX-1是一种优良的CHA,已成功应用于油菜化学杂交的诸多方面。通过对SX-1诱导技术、机械化喷洒制种技术以及配制和改良杂种的方法进行论述,认为"高油种质+化学诱导雄性不育"油菜杂优利用模式将高油和杂优有效结合起来,可促进油菜杂优育种的较大发展。

延川南区块煤层气井高产水成因分析及排采对策

为了解鄂尔多斯盆地延川南区块煤层气井高产水的成因及高产水对煤层气井产能的影响,对延川南区块内煤层气的地质条件、压裂施工情况以及不同产水量煤层气井生产特征进行了分析研究,探讨了延川南区块高产水特征形成的原因,确定了高产水煤层气井的排采方法。结果表明,压裂缝的缝高过大,沟通了二叠系下统下石盒子组砂岩裂隙含水层组,是导致延川南部分煤层气井产水量过大的主要原因;高产水会造成实际见气储层压力比临界解吸压力低,降低了煤层气井产能。高产水煤层气井的排采难度大,需要选择合理的排采设备,在气井产气之前井底流压要平稳、快速下降,使煤层气井尽早见气,见气之后适当放缓排采速度。该排采方法在高产水煤层气井进行了应用,排采效果较好。

“三端员定型”法识别滨岸相砂岩储层隔夹层:以塔里木盆地哈得逊油田东河砂岩为例

滨岸相砂岩储层发育薄层隔夹层,由于测井垂向分辨率和薄层效应的影响,用于识别不同类型隔夹层的关键测井参数的数值范围部分重合,使常用测井识别方法面临困难。针对这一问题,本研究在多口井岩心观察描述的基础上,基于常规测井资料、岩心实验分析资料,创新性采用"三端员定型"法识别三类隔夹层:钙质隔夹层、泥灰质隔夹层和泥质隔夹层。不同类型隔夹层在图版上不仅能有效区分,同时还能反映出钙质含量、泥质含量变化对隔夹层物性的影响。依据隔夹层识别结果,将研究区隔夹层垂向上分为4种接触关系:单一型、渐变型、突变型和多峰型;平面上分为4种分布模式:片状大面积分布型、突变接触型、渐变接触型和随机分布型,明确了隔夹层的发育特征。研究认为,垂直渗透率与钙质含量具有正相关性,与泥质含量相关性差;应用产量控制系数C(与隔夹层厚度和垂直渗透率相关)论证了具有一定厚度的隔夹层对产量的控制能力按泥质隔夹层、泥灰质隔夹层、钙质隔夹层顺序依次增强,因此钙质隔夹层在研究区对油水垂向运动的影响最大。研究成果对滨岸相砂岩储层油田开发后期剩余油挖潜及制订开发调整方案具有重要意义。

中国超深层大气田高质量开发的挑战、对策与建议

中国超深层天然气勘探开发潜力巨大,已成为天然气业务增储上产、效益增长的主体和未来油气上游业务发展的重要战略领域,实现其高质量开发意义重大。为此,通过对气田开发特点、开发效果进行梳理和评价,明确了超深层大气田实现高质量开发面临的挑战,针对制约气田开发效果的关键认识和技术瓶颈,基于室内物理模拟实验、储层评价、气藏动态评价、数值模拟研究以及国内外气田开发的经验与教训,提出了超深层大气田高质量开发的要求,以及具体的对策与建议:(1)强化气藏前期评价,落实可动用储量,确定气田合理的产能规模,避免功能浪费;(2)优化井位部署与单井合理配产,实现气藏均衡开发,以获得高储量动用率和采收率;(3)持续进行钻完井技术及有针对性的储层改造技术攻关,通过前者进一步缩短钻完井周期、使开发成本不断下降,通过后者进一步提高单井产量、提高储量动用程度,实现低品位储量的有效动用;(4)创新管理模式,建立超深层大气田开发建设和生产运行的科学程序,严格控制产量上限指标,更加突出质量效益。结论认为,高质量开发超深层大气田是一项艰巨复杂的系统工程,勘探、开发技术和管理模式的持续创新是最终实现该目标的必由之路。

技术距离、地理距离对大学-企业协同创新的影响研究

扩充技术距离为横向的技术相似度与纵向的技术深度,并以铁路时间定义地理距离,采用改进的Jaffe-Griliches知识生产函数模型,选用2006～2014年间我国31个省级地区的大学-企业协同创新活动的数据,探讨技术距离、地理距离对大学-企业协同创新活动的影响。实证发现：横向、纵向的技术距离对大学-企业协同创新活动均有显著的促进作用,尤其是横向的技术相似度是影响协同创新的最主要因素之一;以铁路时间测度的地理距离越近越有利于协同创新开展。

东濮凹陷煤系烃源岩评价中的几个问题

在明确了有机质丰度参数不一致的地球化学根源后,提出泥岩评价标准的下限值,并剖析了古生界地层中火成岩侵入时期及其热催化作用对二次生烃的贡献。结果表明:马厂和长垣地区烃源岩评价应侧重于有机碳含量,尤其是煤系泥岩;煤系泥岩有机碳标准下限值应定为0.80％;火成岩侵入时期早(白垩纪时期),对晚期成藏不利;煤和泥岩低温阶段演化同步,高温阶段煤的演化速率高于泥岩,但均以晚期生烃为主。

多段生产水平井试井解释方法

以水平井为柱源,考虑井筒储集效应、水平井分段产液及各生产段不同表皮效应的影响,运用Green函数并结合Newman乘积方法,建立了非均匀产液水平井试井解释新模型;利用数值反演算法计算井底压力,绘制出样板曲线,并讨论了分段生产的参数对井底压力的影响。研究结果表明,水平井N段生产时,最终水平径向流段压力导数0.5水平线前出现一个压力导数值为0.5/N的新"平台";水平井分段生产时,生产段数越多、两端的生产段长度越长、两端的生产段流量越大、两端地层的表皮损害越小,越有利于水平井产能的提高,应特别注意对水平井两端地层进行改造;水平井各生产段所造成的压力响应,不仅与表皮系数大小及分布有关,还与各生产段的长度与流量分布有关。实例应用表明,本文提出的新模型对水平井的产液井段诊断及解释、增产措施制定具有重要指导意义。

从GPN 1.0到2.0:全球生产网络理论研究进展与评述

在全球生产网络理论(GPN 1.0)基础上,Coe和Yeung发展了更为动态的全球生产网络理论(GPN 2.0)。通过与GPN 1.0相比,该文认为GPN 2.0形成于全球化深度调整阶段,与GPN 1.0所处的全球化加速发展阶段有较大差异;GPN 2.0对网络内的企业行动者进行了更为精细的划分;GPN 2.0对全球生产网络的形成以及动态变化具有更强的解释力;GPN 2.0提出的战略耦合的3种模式与8种区域发展类型,对区域发展具有更强的指导作用。与此同时,GPN 2.0理论框架还存在一些局限与不足,明晰定量研究中的因果机制与研究变量、基于产业异质性分析全球生产网络的驱动力与影响因素、将国内市场与技术创新等解释变量纳入分析框架、加强网络内不同行为主体之间相互作用及其影响下的网络动态演化研究,应成为GPN理论发展的重要方向。