冻干重组人脑利钠肽对缺血性心肌病心力衰竭患者NT⁃proBNP、AngⅡ、NE水平、心室重构和炎症因子的影响

目的探讨缺血性心肌病(ICM)心力衰竭(HF)患者应用冻干重组人脑利钠肽治疗对N末端脑钠肽前体(NT⁃proBNP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、去甲肾上腺素(NE)水平、心室重构和炎症因子的影响。方法于2020年10月至2023年2月从宿松县人民医院选择86例ICM HF患者分为对照组和试验组,均43例,以随机数字表法分组。对照组和试验组分别予以常规治疗和冻干重组人脑利钠肽联合常规治疗,均治疗2周。比较两组疗效(治疗2周后)、血清NT⁃proBNP、AngⅡ、NE、心室重构指标和炎症因子水平(治疗前和治疗2周后)。结果治疗2周后,较对照组(74.42%),试验组总有效率(93.02%)更高,差异有统计学意义(χ^(2)=5.460,P<0.05)。两组治疗2周后的血清NT⁃proBNP、AngⅡ、NE、TNF⁃α、IL⁃6、IL⁃8和LVTWP、PWS、IVSS较治疗前降低,试验组更低,差异有统计学意义(t=5.672、20.016、55.416、6.742、5.851、5.258、5.940、6.681、5.865,P<0.05)。结论ICM HF患者应用冻干重组人脑利钠肽治疗可降低血清NT⁃proBNP、AngⅡ、NE水平,改善神经分泌功能,同时可抑制心室重构及机体炎症,疗效显著。

直接经皮冠状动脉介入治疗联合冠状动脉内注射重组人尿激酶原或替罗非班对ST段抬高型心肌梗死患者疗效与安全性的Meta分析

目的直接经皮冠状动脉介入治疗(PPCI)期间冠状动脉内注射重组人尿激酶原(rhPro-UK)或替罗非班有助于改善冠状动脉微循环灌注。本研究旨在探索ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者PPCI期间冠状动脉内注射rhPro-UK或替罗非班的有效性和安全性。方法计算机检索PubMed,Ovid-MEDLINE,Embase,Web of Science,Cochrane Library,clinical trials.gov,中国知网(CNKI),维普网(VIP),中国生物医学文献服务系统(SinoMed),万方数据知识服务平台(WANFANG)数据库,纳入STEMI患者PPCI期间冠状动脉内注射rhPro-UK或替罗非班的随机对照试验(RCT)及队列研究。检索时间为从建库至2023年11月27日。文献筛选、资料提取及偏倚风险评估均由2名研究者独立完成。采用RevMan 5.4软件对数据进行Meta分析。结果共纳入12项研究,包括1721例患者,冠状动脉内注射rhPro-UK 864例(试验组),注射替罗非班857例(对照组)。Meta分析显示,与对照组相比,试验组可改善PPCI术后冠状动脉微循环灌注,包括心肌梗死溶栓治疗试验(TIMI)血流分级Ⅲ级及TIMI心肌灌注分级(TMPG)Ⅲ级比例显著高于对照组(OR 1.83,95%CI 1.36~2.46,P<0.0001;OR 2.38,95%CI 1.22~4.66,P=0.010);校正TIMI帧计数(cTFC)显著低于对照组(MD–2.43,95%CI–2.94~–1.92,P<0.00001);ST段回落率(STR)≥70%高于对照组(OR 1.93,95%CI 1.01~3.68,P=0.050)。显著降低术后1个月主要不良心血管事件(MACE)发生率(OR 0.54,95%CI 0.35~0.82,P=0.004)。改善心功能,术后1个月左心室射血分数(LVEF)高于对照组(MD1.71,95%CI0.04~3.38,P=0.050)。缩小心肌梗死面积,术后肌酸激酶同工酶MB型(CK-MB)峰值低于对照组(MD–74.16,95%CI–83.59~–64.74,P<0.00001)。两组间出血事件发生率比较(OR1.18,95%CI0.64~2.16,P=0.600),差异无统计学意义。结论STEMI患者PPCI期间,冠状动脉内注射rhPro-UK较替罗非班可有效改善患者冠状动脉微循环灌注、心功能,缩小心肌梗死面积,降低术后1个月MACE发生率,同时两组间出血事件差异无统计学意义。

差序式领导对员工亲上级非伦理行为的影响

基于资源保存理论和差序格局理论,采用层次回归的分析方法,对来自企业内部问卷调研的374个样本进行实证分析。研究发现:差序式领导对员工的亲上级非伦理行为有显著正向影响;上下级关系在差序式领导对员工亲上级非伦理行为的影响中起中介作用;人情导向在差序式领导对员工亲上级非伦理行为的影响中起调节作用。

多组织包埋在人表皮生长因子受体2免疫组织化学阳性对照制作中的应用

目的探讨多组织包埋在人表皮生长因子受体2(HER2)免疫组织化学阳性对照制作中的应用。方法收集2022年8月至2023年8月满足中山大学孙逸仙纪念医院病理科临床诊断后剩余的乳腺癌组织,通过免疫组织化学定位,选取HER2均一表达0、+、++、+++的组织,进行多组织包埋,制作成阳性对照蜡块。结果每张组织化学片中对照组织中均能HER2表达0、+、++、+++。结论多组织包埋可以很好地应用在HER2免疫组织化学阳性对照制作中。

重组人尿激酶原的体外变复性研究

重组人尿激酶原在大肠杆菌中过量表达时形成不溶物包涵体,需经体外变复性后才能获得生物活性。本文旨在提高包涵体中变性尿激酶原的复性效率,通过对pH,温度,变性剂种类及浓度,蛋白浓度,以及巯基氧化还原对的比率等的定性定量分析,研究重组人尿激酶原体外变复性的基本条件,并比较了添加某些非特异有效成分,脉冲稀释,梯度透析等方法对提高重组人尿激酶原体外变复性效率的作用。确定了重组人尿激酶原体外变复性的适宜方法,复性效率可达20%～30%。

重组人尿激酶原质控方法和质量标准的研究

目的建立重组人尿激酶原的质控方法和质量标准。方法以纤维蛋白平板法测定重组人尿激酶原的生物学活性,S-2444发色底物法测定单双链比例,还原型SDS-PAGE测定相对分子质量,SDS-PAGE和分子筛色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按《中国药典》三部(2005版)规定进行。结果用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2005版)的要求。结论所建立的质控方法和质量标准可用于重组人尿激酶原产品的常规检定。

T7 启动子作用下人尿激酶原 cDNA 在大肠杆菌中的高效表达及分离纯化

化学合成的人尿激酶原ｃＤＮＡ克隆在表达质粒ｐＥＴ１１ｄ中，在Ｔ７启动子的作用下，经０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ中获得表达。其表达量占菌体总蛋白的１５％，表达产物以无活性的包涵体形式存在。经体外变复性，Ｚｎ２＋选择性沉淀，抗体亲和柱层析，及Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ亲和吸附，所表达的人尿激酶原被纯化为单一条带，其比活约１１００００ＩＵ／ｍｇ。

不含信号肽序列人尿激酶原全长cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

从pro-UK全长cDNA中切下包括信号肽序列的N端371bp片段;经Fnu4HI不完全酶切将信号肽序列去掉,回收304bp片段;该片段再与人工合成的含Hind Ⅲ、EcoRV内切酶位点和起始密码ATG的寡核苷酸片段连接、转化得一重组质粒,该中间质粒经酶切和序列分析证明构建正确后再与pro-UK cDNA其余片段相连接,得到全长pro-UK cDNA。我们将所得不含信号肽序列的pro-UK cDNA重组到带有P_RPL启动子的原核表达载体pBV220中,转化大肠杆菌JM101,42℃诱导6h,菌体超声破碎后其上清及不溶性成份均可测出尿激酶活性。用ELISA法检测尿激酶抗原性表现为强阳性;纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定活性可达500—1000IU/L,经复性活性可达60000IU/L,且表达产物可被抗尿激酶血清特异中和,经相差显微镜及电镜观察均证明表达蛋白绝大部分以包涵体形式存在。Western blot分析证明表达产物为单链pro-UK,分子量约为47kDa,与国外文献报导一致。

重组人尿激酶原对ST段抬高型心肌梗死患者的疗效与安全性观察

目的评价重组人尿激酶原对ST段抬高型心肌梗死患者的疗效与安全性。方法选取2016年3月—2017年6月治疗的ST段抬高型心肌梗死患者88例。按照治疗方法不同分为对照组43例和观察组45例,对照组应用尿激酶溶栓,观察组应用重组人尿激酶原溶栓。比较两组间的疗效与安全性。结果观察组临床判定和冠状动脉造影评价的冠状动脉再通率均显著高于对照组(P <0. 05)。观察组肌酸激酶同工酶的达峰时间、平均再通时间以及出血发生率均显著低于对照组(P <0. 05)。观察组发生心力衰竭及梗死后心绞痛的例数较少,且无缺血性卒中和死亡发生。结论重组人尿激酶原对ST段抬高型心肌梗死患者冠状动脉的再通率高,出血风险也较低,是安全有效的溶栓药物。

重组人尿激酶原对恒河猴的长期毒性研究

目的:研究重组人尿激酶原(rhpro-UK)对恒河猴的长期毒性。方法:健康恒河猴分别按体质量随机分为低、中、高剂量组(3,10和30mg·kg-1)和空白对照组,每组6只,雌雄各半。iv给药,qd,连续14d,末次给药后处死一半动物做病理解剖,另一半停药后继续观察7d。观察症状和检测指标包括:①一般症状。②心电图。③凝血时间(CT)等血液学指标。④凝血酶时间(TT)等血液生化指标。⑤尿液检查。⑥抗体测定。⑦骨髓检查。⑧病理检查。结果:d14给药后采集的血样中,与d0或空白对照组相比,给药组的CT、TT、部分凝血活酶时间(aPTT)、凝血酶原时间(PT)明显延长、血浆纤维蛋白原含量(Fig)明显降低,且存在量效关系。d21采集的血样中,上述指标恢复正常。d14及d21病理组织学检查发现每组均有部分动物出现肝、肾淤血,轻度细胞水肿,可能系动物的隐性感染而非药物所致。d14高、中剂量组可见部分动物肺泡大片或灶性出血,注射部位静脉内膜增生或坏死、软组织出血、静脉炎及血管周围炎,d21给药组肺组织基本正常,注射部位皮肤的出血和炎症反应基本消失。结论:rhpro-UK对猴血液系统有一定的药理毒理作用,主要表现为使猴CT,TT,aPTT,PT时间延长,Fig含量降低,但这些毒性作用均是可逆的。rhpro-UK对猴的安全剂量为3mg·kg-1。

人尿激酶原突变体的构建及其特性的研究

由于人尿激酶原(pro_UK)存在凝血酶和纤溶酶原激活剂抑制剂(PAI_1)的作用位点,在生产和治疗过程中容易失去活性。采用PCR介导的定点突变技术对pro_UK基因进行了突变,构建了3种人pro_UK突变体,分别将蛋白序列中的凝血酶作用位点Arg156突变成His156,构建成pro_UKM1;将PAI_1的作用位点Arg178、Arg179、Arg181突变为Lys178、Lys179、His181构建成pro_UKM2;同时将凝血酶和PAI_1的作用位点突变构建成pro_UKM3。分别在CHO细胞中获得稳定表达。并对3种突变体进行了SDS_PAGE纤维蛋白自显影和Westernblot分析,证明3种细胞表达的pro_UKM与天然尿激酶原带型一致,绝大多数为单链。体外溶栓试验表明,pro_UKM1对凝血酶有抵抗性,pro_UKM2对PAI有抵抗性,pro_Ukm3能有效抵抗凝血酶和PAI的活性抑制特别是pro_UKM3具有开发成新型溶血栓药物的潜力。

重组人尿激酶原对ST段抬高型急性心肌梗死患者血浆纤溶因子及血管再通的影响

目的研究重组人尿激酶原对ST段抬高型急性心肌梗死患者血浆纤溶因子及血管再通的影响。方法选取北京市监狱管理局中心医院2011年5月—2015年4月收治的急性ST段抬高型心肌梗死76例,按照入院顺序分为观察组(38例)和对照组(38例)。观察组予以重组人尿激酶原治疗,对照组予以尿激酶治疗,观察对比两组血管再通情况、ST段回落情况、人组织纤溶酶原激活物(t-PA)、人纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的水平与出血程度。结果观察组血管再通率(81.57%)明显高于对照组(60.53%)(P<0.05);观察组ST段完全回落和无回落与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后t-PA升高,PAI-1降低,与治疗前对比差异均有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后t-PA高于对照组(P<0.05)、PAI-1低于对照组(P<0.05);观察组心脏事件发生率及中度出血比率明显低于对照组(P<0.05)。结论重组人尿激酶原能够有效治疗ST段抬高型心肌梗死,提高血管再通率,促进ST段回落,可在临床推广应用。

人尿激酶原乳腺定位转基因小鼠的建立

应用大鼠β乳酪蛋白基因的上游调控序列和人尿激酶原ｃＤＮＡ构建成功了乳腺定位表达载体．用显微注射的手段导入到受精卵的雄前核，从注射的３００枚受精卵中，１４０枚被移植到９只假孕的受体小鼠．结果从获得的子一代小鼠中，经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，有３只转基因阳性的小鼠．

重组人尿激酶原联合经皮冠状动脉介入术对急性ST段抬高型心肌梗死患者近期预后的影响

目的探讨重组人尿激酶原(rhPro-UK)联合经皮冠状动脉介入术(PCI)对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者近期预后的影响。方法将90例STEMI患者采用随机数字表法分为rhPro-UK+PCI组45例和PCI组45例,两组患者均行冠状动脉造影和PCI术,rhPro-UK+PCI组在PCI术前单次或反复多次向冠脉内注射rhPro-UK,然后进行血栓抽吸,rhPro-UK用量根据动脉造影血流情况,5～10万U/次,总剂量≤50万U。两组患者随访30 d,记录两组患者心肌灌注、心功能及主要心脏不良事件(MACE),并检测患者血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果 rhPro-UK+PCI组TIMIⅢ级比例和术后90 min ST段回落> 70%比例显著高于PCI组,CTFC显著低于PCI组,组间比较差异有统计学意义(P <0. 05)。围术期两组患者CK-MB逐渐上升,至术后12 h达峰值,此后逐渐降低; hs-CRP逐渐上升,至术后3 d达峰值,此后逐渐降低。术后12、24、36、48 h rhPro-UK+PCI组CK-MB水平显著低于PCI组,术后3、5 d rhPro-UK+PCI组hs-CRP水平显著低于PCI组(P <0. 05)。rhPro-UK+PCI组LVEF显著高于PCI组,LVEDV、LVESV显著低于PCI组(P <0. 05);术后rhPro-UK+PCI组MACE发生率低于PCI组。结论 STEMI患者PCI术前冠脉内给予rhPro-UK能够显著改善心肌再灌注,提高心功能,并且具有较高的安全性。

人力资本与亲贫式增长——基于省际面板数据实证研究

通过面板数据模型,对2001—2009年我国人力资本与亲贫式增长论题进行实证研究,结果表明:在总体上,人力资本具有较强的减贫效应,但存在区域差异。具体而言,东部地区的人力资本减贫效应大于中西部地区。因此,基于区域视角,通过发展教育促进贫困人口的人力资本积累,增加其就业机会,提高其收入水平,达到脱贫的目的。

基于Pro/E Manikin的旋耕施肥播种一体机人机评价与造型设计

为提高旋耕施肥播种一体机的易用性、舒适性及美观性,在运用行为分析法构建用户行为模型的基础上,利用Pro/E Manikin对一体机进行人机交互评价与造型设计。在导入初步方案三维模型的基础上,构建Pro/E Manikin人机交互环境,利用RULA姿态分析和可触及包络模块对旋耕施肥播种一体机的舒适性进行评价与验证,并完成产品的造型设计。将Pro/E Manikin人机交互模块应用于一体机造型设计,有利于从用户行为指导设计,改善产品的人机关系,为相关农机产品设计提供参考。

表达人尿激酶原突变体的重组山羊乳腺特异性表达慢病毒载体的构建

目的:构建山羊乳腺特异性表达尿激酶原突变体的重组慢病毒载体,证明其表达的有效性。方法:将劳氏肉瘤病毒增强子/启动子、复制缺陷型人免疫缺陷病毒(HIV-1)的5'端长重复序列(LTR)、HIV-1ψ包装信号、HIV Rev反应元件、山羊β-酪蛋白调控序列、尿激酶原M13cDNA、ΔU3/3'LTR、牛生长激素(BGH)基因poly(A)依次连接,构建乳腺特异性表达的慢病毒载体,通过体外转染人乳腺癌细胞系MCF-7、中国仓鼠卵巢细胞及泌乳山羊乳腺注射证明其表达有效性。结果:酶切鉴定证实山羊乳腺特异性表达载体构建正确;将该载体转染细胞,采用溶圈法和Western印迹检测证实了其表达的有效性;慢病毒载体注射到泌乳山羊的乳腺,在乳汁中也检测到了尿激酶原的表达。结论:为在转基因动物乳腺中表达尿激酶原突变体奠定了基础。

法治反腐视域下国家监察体制改革的新路径

由政策反腐向法治反腐进阶,是建立长效、稳定反腐机制,消除政策反腐弱效能问题的必然选择。实施法治反腐、推进国家监察体制改革的关键在于形成内外互补的异体监察权,明确国家监察权与行政监督权、司法监督权、纪检监督权三者之间的关系,优化国家监察权的内部权力结构,构建多职能一体的反腐败专门机构。目前,国家监察体制雏形已然形成,但其体制定位等问题仍需探讨。正确定位国家监察体制,前提是要理清纪检权、行政权、司法权"三权"之间的关系,重点在于制定成熟的反腐败《监察法》以及恪守人权保障的底线要求,以确保反腐法治阶段的顺利推进。

人N端脑钠肽前体(NT-ProBNP)单抗制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的获得人脑钠肽前体N端(NT-pro BNP)的高亲和力、高特异性的抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测人血浆中NT-pro BNP。方法通过Discovery Studio4.0软件预测抗原表位,合成其表位肽偶联载体蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术获得分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗。通过SDS-PAGE、ELISA等方法对获得的抗体性质进行鉴定,建立了双抗体夹心ELISA检测方法,并对120例临床血液样本中NT-pro BNP进行快速检测。结果获得6株能稳定分泌抗人NT-Pro BNP抗体的杂交瘤细胞株,其中4株单抗的腹水型效价高于1×10^(-6)。共筛选出4对能双抗夹心ELISA配对的抗体,其中Ab1与Ab5具有较高的灵敏度和较大的线性范围,其亲和力分别为1.0×10^(10)L/mol与5.9×109L/mol,检测线性范围:300~9 600 pg/ml。样本检测结果显示,自制试剂盒的阳性检出率为97.5%(78/80),阴性检出率为100%(40/40)。结论筛选获得1对高亲和力、高特异性的配对抗体,建立了双抗体夹心ELISA的检测方法,亦为新的快速免疫学检测方法的建立奠定了基础。

重组人前尿激酶溶栓治疗的血浆纤溶参数监测

目的观察重组人前尿激酶(rhPro-UK)对心肌梗死患者纤溶系统的影响,建立纤溶指标的临床参考标准。方法将127例符合溶栓标准的急性心肌梗死患者随机给予不同剂量的rhPro-UK进行溶栓。观察溶栓前和溶栓后2h血浆纤溶酶原(PLG)、抗纤溶酶(α2-AP)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的变化以及出血并发症。结果各用药组溶栓开始后2h的PLG及α2-AP活性较溶栓前显著降低(P<0.001),rhPro-Uk组与UK组相比溶栓前后未见显著性差异。结论动态监测心机梗死患者rhPro-UK溶栓后血浆中PLG、AP和PAI有助于疗效判定和调节药物剂量。