Expression of Prolactin Gene in Rat Prolactinoma Induced by 17-β-Estradiol

Rats were implanted subcutaneously with silastic capsules containing 10 mg 17-β-estradiol. After 30, 60 and 120 days, their pituitary weights and plasma PRL levels were found to increase significantly. The administration of β-estradiol also produced a marked rise of PRL mRNA concentrations in the rat total RNA, but the sharper rise of serum PRL levels indicates that estradiol not only promotes transcription of prolactin gene, but also improves the efficiency of translation of the transcription product.

催乳素通过酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5信号通路促进奶牛乳腺上皮细胞乳铁蛋白合成和分泌

本试验旨在研究催乳素(PRL)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)中酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活蛋白5(JAK2/STAT5)信号通路介导的乳铁蛋白(LF)合成和分泌的影响。添加不同浓度的PRL[0(对照)、10、100、1000 ng/mL]处理BMECs 24 h,分析PRL对LF含量和LF、催乳素受体(PRLR)以及JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达的影响。为了验证STAT5在PRL促进BMECs LF合成和分泌的关键作用,添加STAT5抑制剂匹莫齐特(Pimozide)[未添加Pimozide(对照)、10μmol/L Pimozide、100 ng/mL PRL、10μmol/L Pimo⁃zide+100 ng/mL PRL]处理BMECs 24 h,测定PRL和Pimozide对LF含量和LF、JAK2/STAT5信号通路基因表达量和相关蛋白表达以及相对荧光强度的影响。结果表明:1)与对照组相比,10、100、1000 ng/mL PRL能够显著或极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组能够极显著降低BMECs上清液中的LF含量(P<0.01);PRL组能够极显著提高BMECs上清液中的LF含量(P<0.01)。2)与对照组相比,10 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2及STAT5基因相对表达量显著升高(P<0.05);100 ng/mL PRL组LF、PRLR、JAK2和STAT5基因相对表达量极显著升高(P<0.01);1000 ng/mL PRL组PRLR和STAT5基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);Pimozide组LF基因相对表达量显著降低(P<0.05);PRL组BMECs中LF基因相对表达量显著升高(P<0.05)。3)100、1000 ng/mL PRL组BMECs中LF蛋白表达量极显著升高(P<0.01);10、100、1000 ng/mL PRL显著或极显著提高BMECs中p⁃JAK2/JAK2和p⁃STAT5/STAT5表达量(P<0.05或P<0.01);Pimozide组和Pimo⁃zide+PRL组极显著降低BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF蛋白表达量(P<0.01)。4)Pimozide组和Pimozide+PRL组显著或极显著降低BMECs中LF或p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.05或P<0.01);PRL组极显著升高BMECs中LF和p⁃STAT5的相对荧光强度(P<0.01)。综上所述,PRL通过JAK2/STAT5信号通路促进BMECs中LF合成和分泌。

七彩神仙鱼催乳素基因的克隆、定位及表达分析

【目的】七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具有特殊的亲代抚育行为,克隆并定位七彩神仙鱼催乳素基因,分析其在亲代抚育中的表达模式,为理解催乳素在七彩神仙鱼亲代抚育中的作用提供依据。【方法】通过BLASTP对七彩神仙鱼全基因组进行分析,鉴定出1个催乳素基因,命名为dfprl。基于dfprl基因的CDS区,设计克隆和PCR引物,通过RACE技术克隆获得dfprl基因全长,并利用生物信息学对dfprl基因进行结构分析,对其氨基酸序列进行理化性质和进化分析。对不同抚育阶段七彩神仙鱼的脑、性腺和皮肤进行转录组分析,探究dfprl基因在亲代抚育中的表达特征,并利用原位杂交技术对dfprl基因在七彩神仙鱼皮肤中的表达进行定位。【结果】dfprl全长为1282 bp,cDNA序列开放阅读框长度为639 bp,共编码212个氨基酸,5'-UTR为309 bp,3'-UTR为334 bp。dfprl蛋白存在PRL家族的典型结构域Hormone_1,dfprl蛋白与慈鲷科其他鱼类PRL蛋白相似性较高,与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应的氨基酸序列同源性最高、为96.70%。亲鱼进入抚育阶段后,dfprl在性腺和皮肤中的表达水平逐渐上升,抚育结束时表达水平下降。原位杂交结果显示,dfprl在皮肤粘液细胞中表达,且与七彩神仙鱼催乳素受体(dfprlr)表达位点重叠,在抚育早期阶段高表达。【结论】七彩神仙鱼dfprl基因高度保守,存在稳定的Hormone_1结构域。七彩神仙鱼dfprl基因在亲代抚育阶段的皮肤中高表达,且在亲代抚育阶段的皮肤粘液细胞中与dfprlr表达位点重合,表明dfprl可能通过作用于dfprlr进而促进七彩神仙鱼独特抚育行为的发生。

五个鸡群中催乳素基因密码子使用频率与产蛋量的关系分析

通过鸡催乳素基因编码区基因扫描,发现3个SNP位点,分别是外显子2的C1607T、外显子5的C5749T和T5821C,3个SNP均没有改变氨基酸的编码.同时发现不同的单倍型间存在不同的密码子使用频率.对5个鸡群共370只鸡进行SSCP的基因型检测,共发现7种单倍型,结合44周龄产蛋量分析,发现不同单倍型的平均产蛋量存在显著性差异.结合密码子使用频率分析,发现使用高频密码子的单倍型个体产蛋量相对高.通过酶联免疫方法检测催乳素表达量,结果显示,使用高频密码子的个体,激素水平较高,其中使用2个高频密码子的单倍型个体和使用1.5个密码子的单倍型个体之间存在极显著差异.研究结果表明,密码子使用频率与产蛋量在一定的范围内呈现正相关趋势.

奶牛催乳素基因多态性与产奶性状的关系

通过PCR-RFLP的方法,分析催乳素基因exon3在543头北京荷斯坦母牛中的多态性,得到3种基因型:AA、AB和BB,基因型频率分别为0.734,0.257,0.009,并对不同基因型间产奶性能进行了最小二乘法拟合线性模型分析。结果表明:在泌乳Ⅰ期,AA和AB基因型奶牛的奶、乳脂和乳蛋白产量高于BB基因型(P<0.01),在泌乳Ⅱ期,AB基因型奶牛的的奶、乳脂和乳蛋白产量高于AA基因型(P<0.01);在泌乳Ⅱ和Ⅲ期,AA基因型奶牛的乳蛋白率高于AB基因型(P<0.05)。

催乳素受体基因外显子10多态性及其与济宁青山羊高繁殖力关系的研究

设计5对引物,采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因外显子10及部分3′非翻译区在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊、波尔山羊和安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:首次拼接出的山羊PRLR基因外显子10及部分3′非翻译区的核苷酸序列长度为1,118bp,与已公布的绵羊、牛、人PRLR基因mRNA相应序列的同源性分别为98.33%、93.92%、74.52%,与已公布的羊驼PRLR基因部分序列的同源性为78.29%。引物P1、P2与P4扩增片段具有多态性,其余2对引物的扩增片段不存在多态性。对于P1扩增片段,在济宁青山羊和辽宁绒山羊中检测到AA型和AB型,在安哥拉山羊中检测到AA型和AC型,在波尔山羊中只检测到AA型;克隆测序表明AB型与AA型相比有两处突变(186G→A和220T→C),分别导致氨基酸由天冬氨酸变为天冬酰胺、亮氨酸变为脯氨酸;AC型与AA型相比有1处突变(140A→G),该突变没有导致氨基酸变化;济宁青山羊AA和AB基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P2扩增片段,在济宁青山羊、辽宁绒山羊和波尔山羊中都检测到DD型和DE型,而在安哥拉山羊中只检测到DD型;克隆测序表明DE型和DD型相比有两处突变(52G→A和122G→A),其中122bp处的突变导致氨基酸由精氨酸变为甘氨酸;济宁青山羊DD和DE基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。对于P4扩增片段,在济宁青山羊中检测到FF型和FG型,在辽宁绒山羊中检测到FF型和GG型,在波尔山羊中只检测到FF型,在安哥拉山羊中检测到FF型、FG型和GG型;克隆测序表明GG型和FF型相比在扩增片段的143bp处发生1处碱基突变(A→G),并导致氨基酸由蛋氨酸变为缬氨酸;FG基因型济宁青山羊产羔数最小二乘均值比FF基因型的多0.76只(P<0.05)。研究结果初步表明:PRLR基因可能是控制济宁青山羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密遗传连锁的一个标记。

褪黑素抑制促甲状腺释放激素刺激乳鼠垂体前叶细胞催乳素基因的表达

褪黑素（melatonin，MEL）主要由松果腺分泌，它是一种吲哚类激素，其功能之一能抑制下丘脑的促性腺释放激素和垂体前叶的促性腺激素。本工作利用原位杂交方法，观察了MEL对促甲状腺释放激素（thyrotropinreleasinghormone，TRH）兴奋垂体前叶激素-催乳素（prolactin，PRL）表达的影响。结果表明，在一定浓度范围内，MEL不但可抑制TRH刺激PRL基因表达的效应，还可直接抑制垂体前叶细胞PRL基因的表达。这为进一步探讨在体条件下MEL对PRL合成与分泌的调节，提供了实验依据。

浙东白鹅催乳素基因表达特点

克隆了浙东白鹅催乳素基因(Prolactin,PRL)的全序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时催乳素基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点。结果表明,浙东白鹅催乳素基因在就巢期、产蛋期和恢复期的表达量差异显著(P<0.05),在就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRL的表达量分析,发现在垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异(P<0.01),但在垂体与下丘脑中的表达量差异不显著(P>0.05),在垂体表达量最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低。因此,浙东白鹅PRL基因在不同繁殖时期体内表达差异较大。

催乳素基因5′-调控区24-bp插入/缺失变异与非就巢鸡血浆催乳素水平及产蛋性能的关系

以笼养绿壳蛋鸡和农大3号矮小型蛋鸡为试验材料,探索蛋鸡在非就巢状态下催乳素基因5′-调控区24-bp插入/缺失(-377^-354 bp)变异与血浆PRL水平和产蛋性能的关系。结果表明,该位点不同基因型(PRL+/+、+/-和-/-型)对非就巢蛋鸡300日龄前的血浆PRL水平和300日龄(40周龄)产蛋性能均无显著影响(P>0.05),表明鸡在非就巢状态下,PRL调控区的24-bp插入/缺失变异与早期血浆PRL水平和产蛋性能无直接关系。

绵羊催乳素受体基因PCR-SSCP分析

采用PCR-SSCP技术分析了催乳素受体基因(PRLR)在小尾寒羊、萨福克羊、多赛特羊、多赛特公羊×小尾寒羊母羊F1代杂种羊4个绵羊群体中的多态性。结果表明:PRLR基因在3对引物扩增片段中均存在PCR-SS-CP多态性。对于引物1,4个绵羊群体均检测到AA基因型,AB基因型只出现在小尾寒羊、多赛特羊和萨福克羊中,仅在多赛特羊中检测到BB基因型。对于引物2,4个绵羊群体均检测到AA和AB基因型,只有萨福克羊没有BB型。对于引物3,4个绵羊群体均检测到AA、AB和BB基因型。在4个绵羊群体中,A等位基因频率均明显高于B等位基因频率。

绦虫催乳素基因cDNA克隆及序列分析

根据文献报道的脊椎动物催乳素基因 c DNA序列的保守区 ,设计 1对引物。提取绦虫总 RNA,采用 RT- PCR扩增绦虫催乳素基因 ,琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物 ,将回收产物连接到 p MD- 18T克隆载体 ,对待选克隆进行 PCR和酶切鉴定。阳性克隆进行序列测定 ,获得全长 893bp的 c DNA序列 ,共编码 2 2 2个氨基酸 ,其中前 2 2个氨基酸为信号肽 ,成熟蛋白共编码 2 0 0个氨基酸。将测序结果与 Gen Bank中已知序列比较 ,推导氨基酸序列并进行活性位点分析 ,所得序列与脊椎动物催乳素同源性最高 ,含有催乳素的 2个活性区域 ,证明所得到的序列就是催乳素序列。

奶牛PRL基因CRS-PCR多态性与产奶性状的关联分析

采用CRS-RFLP技术对中国荷斯坦牛PRL基因第4外显子C8377G位点及第4内含子T8510C位点进行单核苷酸多态性分析。最小二乘分析表明:在8377位点GG基因型个体产奶量最小二乘均值显著高于CC基因型(P<0.05),GC基因型个体乳蛋白率最小二乘均值显著高于CC基因型(P<0.05);在8510位点CC基因型个体产奶量最小二乘均值显著高于TT基因型(P<0.05)。

母猪哺乳初期的母性行为与催乳素受体基因多态性关系的初探

应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对民猪和长白猪的催乳素受体(Prolactinreceptor,简称PRLR)基因进行了单核苷酸多态性分析,以研究PRLR基因影响母猪母性行为性状的可能性。结果发现在PRLR基因的cDNA第1620位点处存在NaeⅠ多态性。测序表明,该点存在一个T→C的单碱基突变,属沉默突变。对3种基因型与部分行为性状进行最小二乘分析,结果表明,AB型母猪与其他两种基因型母猪相比,表现出较低的侧卧转为其他姿势的频率以及由母猪结束哺乳的频率(P<0.05),其他行为性状在基因型间不显著。因此,推测等位基因A可能是影响母猪母性行为的不良基因。

鸡催乳素基因序列多态及生物信息学分析

选择繁殖性能具有明显差异的4 个鸡品种(莱航鸡、阳山鸡、丝羽乌骨鸡和隐性白洛克鸡)构建品种 DNA池,采用测序的方法快速筛查鸡催乳素基因(chicken prolactin,cPRL)5′侧翼调控区、外显子区和部分内含子区约4500 bp范围内可能与产蛋性能相关的序列多态,共检测到13个SNPs和两个短片段(24 bp和15 bp)插入/缺失多态,其中在5′侧翼序列筛查到9个SNPs及两个短片段插入/缺失多态,在第2外显子筛查到1个SNP,在第5 外显子筛查到两个SNPs,在第2内含子筛查到1个SNP;进一步利用生物信息学分析cPRL 基因的5′侧翼调控序列,发现24 bp短片段的插入使莱航鸡比阳山鸡多出了1个Evi 1可能的结合位点(93分),C 2402T的变异则使阳山鸡比莱航鸡多出了1个C/EBPbeta可能的结合位点(94分),这两个结合位点是否影响 cPRL 基因的表达,影响鸡的就巢性和产蛋性能,还需要进一步研究。

雪山草鸡PRL基因的表达差异及其对繁殖性能的影响

从880只250日龄雪山草鸡中选取处于产蛋期、就巢期和恢复期的鸡各20只,屠宰采集下丘脑、垂体、输卵管和卵巢,用荧光实时定量PCR法检测其中催乳素基因mRNA的表达水平,并与繁殖性能进行相关分析,结果表明:PRL基因在4个组织中都有表达,但在垂体中的表达极显著高于其他组织(P<0.01),而且在其他3个组织之间PRL的表达差异并不显著(P>0.05);就巢期鸡PRL基因在垂体中的表达量显著高于产蛋期鸡和恢复期鸡(P<0.05),而在下丘脑、输卵管和卵巢3个组织中3组个体PRL基因的表达量差异不显著(P>0.05);PRL在垂体的表达与种鸡的繁殖性能呈负相关,相关系数为-0.328(P<0.05)。

大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究

７３５ｂｐ的ＰＲＬｃＤＮＡ片段从质粒ＰＲＬ－ＳＰ６５＃１中回收后，用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３上，筛选出正向连接重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ和反向连接重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＡＳ。将重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬｓ和空载体ｐｃＤＮＡ３分别转入ＮＩＨ３Ｔ３细胞系，用Ｇ４１８筛选出阳性细胞后与未转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞在加Ｅ２和不加Ｅ２的情况下，用原位杂交的方法，分别用ＰＲＬｃＤＮＡ探针和原癌基因ｃ－Ｈ－ｒａｓｃＤＮＡ探针进行检测，未转染的ＮＩＨ３Ｔ３细胞在加Ｅ２和不加Ｅ２时都几乎无催乳素基因的表达，同样，转入空载体的ＮＩＨ３Ｔ３细胞也无ＰＲＬ的表达，而转入重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ的ＮＩＨ３Ｔ３细胞则有大量的ＰＲＬ基因的表达，与对照组相比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。正常和转入空载体的ＮＩＨ３Ｔ３细胞有一定程度的原癌基因ｃ－Ｈ－ｒａｓ的表达，当分别加入Ｅ２和转入重组体ｐｃＤＮＡ３－ＰＲＬＳ后，ＮＩＨ３Ｔ３细胞中的ｃ－Ｈ－ｒａｓ基因表达水平都显著升高（Ｐ＜０．０５）。

猪PRLR基因多态性及其与产仔性能的关联分析

旨在检测猪PRLR基因第10外显子的多态性及其对产仔性能的影响。采用PCR-RFLP技术检测大白猪、马身猪、山西黑猪和山西白猪4个品种（系）221个个体PRLR基因第10外显子的多态性,并采用单变量动物模型分析多态位点对母猪产仔性能的影响。结果表明,PRLR基因第10外显子存在NaeⅠ多态位点。在4个猪种中均检测到A、B 2个等位基因和AA、AB 2种基因型,等位基因A为优势等位基因,频率在0.86~0.93之间。该位点对母猪产仔性能有显著影响,AA型母猪的头胎产仔数和产活仔数分别比AB型高1.797和1.293头,达显著水平（P〈0.05）。因此,将该位点作为遗传标记应用于种猪选择中,可能会有利于猪繁殖性能的提高。

催乳素基因的研究进展

催乳素是主要由垂体前叶腺体分泌的一种蛋白激素,它可通过进入循环系统或局部地通过近旁分泌、旁分泌和自分泌活动形式,起经典的内分泌调节器作用。作者主要介绍催乳素的结构、功能和调控,催乳素基因的克隆及结构、发育性表达、定位和多态性。还阐述了催乳素基因与生产性能的关系。

石歧杂鸡催乳素基因外显子2的SNP检测与产蛋就巢性状的关联分析

利用PCR-SSCP技术对石歧杂鸡的催乳素(prolactin,PRL)基因外显子2进行SNP检测和测序分析,并对该基因与石歧杂鸡产蛋、就巢性状的相关性进行了研究。结果表明,PRL基因外显子2存在多态性位点,该位点由于在3838位点发生C→T的碱基突变,产生了AA、AB和BB3种基因型,并导致氨基酸的改变,由亮氨酸变为苯丙氨酸。基因型AA和等位基因A的频率最高;BB基因型个体首次就巢时间显著晚于AA和AB基因型(P<0.01);BB基因型的就巢次数显著多于AA和AB基因型(P<0.05);3种基因型与产蛋性状相关性不显著。

催乳素受体基因的研究进展

本文介绍催乳素受体的结构 ,催乳素受体基因的发育性表达及作用 ,催乳素受体基因的作用机理与分子调控 ,催乳素受体基因的定位以及其与繁殖性状的关系等。提示催乳素受体基因可作为繁殖性状的一个候选基因。