满天星茎腐病中一种新病原菌的分离与鉴定

满天星是当今世界最流行的鲜切花配花之一,茎腐病是满天星的一种常见病害,严重时导致植株枯萎死亡,影响鲜花的观赏性和利用价值,造成一定的经济损失。2021年3月,笔者在云南省昆明市海口镇发现满天星茎腐病,该病主要为害茎基部,表现为茎基部腐烂和萎蔫。为明确其病原,本研究对满天星茎腐病病原菌进行分离与鉴定。柯赫氏法则证明该分离物可造成满天星组培苗和盆栽苗表现出与田间病株相似的症状,经接种后获得的分离物与田间自然发病的分离物一致。通过形态学鉴定,分离物能产生大量致密的气生菌丝,颜色从白色到淡橙色或黄色不等,菌落背面有暗红色色素沉积。显微镜观察发现其分离物的分生孢子呈镰刀形,腹面较平直,背侧呈拱形,具有3~6个隔膜,分生孢子大小为(21.1~57.9)μm×(2.7~5.1)μm(n=100),未见小型分生孢子,形态学上与镰刀菌属病原真菌相似。通过对其ITS基因序列与形态学鉴定,将分离物初步确定为禾谷镰孢复合种(Fusarium graminearum species complex,FGSC),为进一步确定亚种,使用翻译延伸因子(TEF-1α)序列进行测序,发现该分离物与南方镰孢菌(F.meridionale)的同源性达100%。因此结合形态学和分子生物学特征,满天星茎腐病的病原确定为南方镰孢菌。目前国内尚未发现由南方镰孢菌侵染为害满天星茎部的相关研究报道,本研究结果将为防治满天星病害提供重要理论依据。

满天星组织培养快速繁殖

满天星可以通过组织培养进行大量快速繁殖．其茎段在ＭＳ＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ培养基上可产生大量健壮的不定芽，繁殖系数可达１０以上；切下的不定芽在ＭＳ＋ＩＡＡ５．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ培养基上１周内８０％外植体分化出良好的根系；在定植基质中加入杀菌剂并保持一定的湿度，可以明显减少烂苗，提高试管苗的移栽成活率．

生物反应器在满天星快繁中的应用

利用2.5L柱状气升式生物反应器采用接触法进行了满天星(Gypsophila paniculata)增殖培养。结果表明:外植体接种密度(每个反应器接种外植体个数)为35比密度为25和45更有利于满天星的增殖生长,平均每个生物反应器内可获得252株生长健壮的不定苗;光强为90μmol.m-2.s-1对满天星增殖培养最有利,过高的光强对不定芽和株高有抑制作用;通过小孔隙(15μm)的多孔喷头注入0.1vvm空气有利于满天星增殖培养。

满天星生根培养的研究

以满天星小花型品种‘仙女’作为试验材料 ,在MS培养基上加不同浓度的PP333和NAA组合 ,将不定芽平放或直立于培养基上进行培养 ,研究其生根情况。结果表明 :在所有NAA和PP333组合的培养基上 ,平放的不定芽生根速度、生根量和生根率均高于直立的不定芽 ;外源激素浓度以NAA 0 .0 1mg·L- 1+PP3330 .10mg·L- 1为最佳。

培养基组成对满天星试管苗增殖的影响

为确立满天星组培快速繁殖和抑制玻璃化苗发生的体系,研究了培养基中氨态氮和硝态氮的比率、总氮含量及MS浓度对满天星增殖生长的影响和培养基中糖的种类及蔗糖浓度对满天星增殖和玻璃化苗发生的影响,结果表明:NH4+/NO3-为20/40mM的MS固有培养基适合满天星大量增殖,且苗的生长状态良好.培养基中氮含量提高至90mM或将MS浓度提高2倍时,能得到大量且健壮的满天星增殖苗.浓度为30g/L的蔗糖对满天星的增殖生长有促进作用,同时抑制玻璃苗的发生.

满天星茎尖试管苗的继代培养基研究

探讨了满天星试管苗继代培养过程中,不同生长调节剂、碳源、水质、活性碳对芽增殖效果的影响.结果表明,NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L的生长调节剂组合下,试管苗增殖效果最好,芽的长势好,增殖倍数达5.0;用40 g/L的市售白糖代替30 g/L的化学纯蔗糖作为培养基的碳源,既可降低配制培养基的成本,又不影响苗的增殖和质量,可用于满天星试管苗的商业化生产;但以自来水代替蒸馏水对试管苗进行继代培养,则不利于苗的生长和增殖;在培养基中加入0.2%的活性碳有利于试管苗株高的增加,但不利于芽的增殖.

重瓣丝石竹试管苗玻璃化发生原因初探

本文研究了引发重瓣丝石竹（ＧｙｐｓｏｐｈｉｌａｐａｎｉｃｕｌａｔａＬ．）试管苗玻璃化现象发生的若干因素．结果表明，外植体取材部位显著影响玻璃苗发生频率，重瓣丝石竹玻璃苗发生频率以中部茎段最高，远高于顶芽和基部茎段．培养基内较高浓度的细胞分裂素，尤为高浓度ＢＡ５ｍｇＬ－１，是影响玻璃苗发生的主要原因．琼脂浓度，蔗糖及培养温度等对玻璃苗发生率的影响．依培养基中激素的状况而异．添加适量硝酸钾，可以完全抑制玻璃苗的发生．

营养液的pH和EC对满天星试管苗水培生根的影响

以满天星试管苗的茎段为外植体,采用MS基本培养基,附加1.0mg/L的6-BA,建立满天星的无菌植株,以继代增殖培养后的单株为材料,研究营养液中pH和EC对试管苗水培生根的影响。结果表明:对满天星幼苗生长和生根的营养液以pH 6处理的幼苗生长及根系发育最佳;高EC浓度较适合满天星的瓶外生根,EC值应调节为2.5mS/cm。

满天星不同外植体离体培养芽形成的研究

本试验研究了满天星不同外植体,不同取材时间及生长调节剂,对芽分化形成的影响。结果表明:以茎尖为外植体,芽诱导率最高可达95 0%,茎段次之,叶片的芽诱导率很低。取材应在5月至6月间,此时芽的诱导效果最好。6-BA和KT分别在(0 1-0 5)mg L及(0 1-1 0)mg L浓度范围内,对芽的产生起促进作用,且以6-BA0 5mg L的效果为好;当6-BA或KT与生长素NAA或IBA配合使用时,可提高芽的诱导率,以NAA0 5mg L+6-BA1 0mg L的效果最优。

满天星试管玻璃化苗与正常苗的比较研究

以满天星组培正常苗和玻璃苗为材料,通过生理生化特性、同工酶分析,探讨了满天星试管苗玻璃化发生原因。结果表明:玻璃苗组织含水量较高,为95.8%,而正常苗为91.7%。玻璃苗的各种叶绿素平均含量及可溶性糖和还原糖含量分别为正常苗的14.0%,63.8%和86.9%;而玻璃苗的过氧化物酶(POD)的活性增加,是正常苗的2.6倍。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对酯酶同工酶进行分析结果表明,玻璃苗的酯酶同工酶电泳谱带出现缺失的异常现象,同时其谱带颜色较浅;过氧化物同工酶电泳结果表明玻璃苗与正常苗相比活性增加且谱带增多。

满天星试管苗与玻璃化苗RAPD标记向SCAR标记的转化

以满天星组培所获得的正常苗和玻璃苗为试验材料,将RAPD标记转换为SCAR标记。结果表明,将随机引物在满天星试管苗与玻璃化苗的DNA中扩增得到的特异性片段OPG17-1455,经过回收、克隆、测序、重新设计1对引物将RAPD标记转化为SCAR标记,该SCAR标记只有在玻璃苗个体中出现。

满天星试管苗的生根培养

本实验研究了适于满天星试管苗生根的基本培养基和生长素的种类,浓度.结果表明:1/2MS培养基为生根的最适基本培养基,在培养基中加入0 5mg/L的NAA最有利于根的分化和生长.

满天星切花保鲜液的筛选及其生理效应研究

以蔗糖、8-羟基喹啉柠檬酸盐和硫酸铝钾配制保鲜液,通过正交试验筛选满天星(Gypsophila pan-iculata L.)切花最佳保鲜液配方,并研究其生理效应。结果表明,满天星切花保鲜液的最佳配方为蔗糖5g/L+8-羟基喹啉柠檬酸盐500 mg/L+硫酸铝钾150 mg/L;该保鲜液能有效延长满天星切花的瓶插寿命,有利于保持切花水分平衡,减轻水分胁迫,减少膜脂过氧化,保持细胞膜的完整性。

满天星育种和栽培技术研究进展

综述了满天星栽培管理、引种育种的最新研究进展,并对其研究前景进行了展望。

重瓣丝石竹莲座苗与健苗花期内源激素的变化

通过小区试验 ,比较了重瓣丝石竹各品种莲座化状况 ,结果表明 ,生育期超过 10 0d的重瓣丝石竹中晚熟品种 ,抽苔率为8%～ 45 % ,开花率为 6%～ 40 % ,秋冬季易产生莲座化现象。重瓣丝石竹开花率和抽枝率呈显著相关 (y =1 0 0 1x 3 862 7,r2 =0 9968 )。在营养期 ,正常苗内源生长素IAA、内源细胞分裂素DHZ +DHZR、iPA含量分别为 2 1 5 2 1μg/gFW ,3 5 2 14 μg/gFW和 4 5 46μg/gFW ,比莲座苗分别提高 5 0 2 %、2 1 3 %和 48 5 %。正常开花株中IAA及iPA含量比营养期显著提高 ,含量达3 0 43 7μg/gFW和 8 5 76μg/gFW ,而莲座苗仍保持营养期水平。营养期和开花期内源GA3含量为 0 0 62～ 0 0 85 μg/gFW ,莲座苗与正常苗GA3含量无显著差别。正常植株在营养生长期间植株茎顶端IAA、Z +ZR、DHZ +DHZR和iPA含量分别是基部的3 2、2 8、1 5和 6 4倍 ,而莲座态植株顶端和基部内源激素含量无明显差异。花期植株体内的内源IAA含量以花梗部最高(4 1 2 5 6μg/gFW) ,iPA和DHZ +DHZR含量的梯度分布比营养生长明显增加 。

多效唑在重瓣丝石竹组织培养中的作用

多效唑能增加重瓣丝石竹组织培养苗的节数 ,缩短节间距 ,使试管苗健壮 ,其最适浓度为 1 0mg/L。经多效唑 ( 0 0 5ml/L～ 0 2ml/L)壮苗培养 ,显著地促进了组织培养苗生根。较高浓度的多效唑 ( 0 2 0mg/L～ 1 0mg/L)对茎尖外植体不定芽分化有明显的增殖作用 ,同时抑制了试管苗玻璃化。