硫代磷酸反义寡核苷酸prop5对流感病毒进入细胞的抑制作用

目的研究硫代磷酸反义寡核苷酸prop5对流感病毒感染进入细胞的影响。方法采用流感病毒感染A549细胞模型,设立随机序列(prop5R)和正义序列(prop5S)作为阴性对照,收集细胞培养液,采用实时荧光定量PCR检测病毒RNA拷贝数,评价反义寡核苷酸对病毒吸附和进入的影响;进一步通过血凝抑制实验检测prop5对流感病毒吸附细胞的影响,溶血抑制实验检测prop5对流感病毒进入细胞的影响。结果 prop5能够抑制流感病毒A/Jingfang/1/86(H1N1)感染A549细胞,对流感病毒吸附细胞过程没有影响,prop5能够抑制A/Jingfang/1/86(H1N1)、A/Lufang/9/93(H3N2)、A/FM/1/47(H1N1)和A/PR/8/34(H1N1)介导的膜融合。结论 prop5能抑制流感病毒进入细胞,这种额外的活性增强了prop5的抗病毒能力。

反义寡核苷酸prop5在A549细胞内具有抗流感病毒活性

目的:研究硫代反义寡核苷酸prop5在细胞水平的抗流感活性及其作用机制。方法:cy3标记prop5用于考查人肺腺癌细胞A549对硫代反义寡核酸的摄取;利用实时荧光定量PCR检测流感病毒RNA拷贝数,Western印迹检测prop5对PDCD5蛋白表达和caspase-3蛋白剪切的抑制;利用间接免疫荧光和Western印迹检测prop5对病毒核糖核蛋白复合体(RNP)出核的影响;利用TUNEL检测prop5对流感病毒引起细胞凋亡的抑制作用。结果:流感病毒感染促进A549细胞摄取prop5;prop5下调感染病毒的A549细胞中PDCD5蛋白的表达,并能抑制流感病毒的复制;prop5抑制流感病毒引起的A549细胞的凋亡;prop5抑制病毒RNP出核。结论:prop5在细胞水平具有抗流感病毒活性,其作用机制可能同抑制RNP出核有关;本研究为进一步探讨宿主-病毒相互作用和抗流感药物开发奠定了基础。