犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。

副猪嗜血杆菌蜂胶苗的制备及免疫效果试验

目的:以原场副猪嗜血杆菌为制苗菌株,制成自家细菌苗,预防本场猪格拉泽氏病。方法:用从河南济源一自繁自养大型养猪场发病猪分离到的副猪嗜血杆菌进行培养,经甲醛灭活,以蜂胶为佐剂,制成原场副猪嗜血杆菌灭活苗,含菌量为200亿/ml。母猪分别于产前30d和15d各注射4ml/头。仔猪出生后,分别在15、30日龄肌肉注射,1.5ml/头。结果:应用试验证明,该灭活苗保护率达98%。结论:该蜂胶苗安全、可靠,对猪格拉泽氏病有较好的预防作用。

仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗的研制 II免疫保护期和疫苗保存期试验

对仔猪水肿病蜂胶佐剂多价灭活苗进行了免疫产生期、免疫持续期和疫苗保存期试验。研究表明 :仔猪接种该疫苗 5～ 7d后便产生免疫力 ,到第 9天时抗体产生水平已经很高 ;以免疫仔猪攻毒后的存活率不低于 95%为标准 ,疫苗的免疫持续期可达 9个月以上 ;以物理性状合格和免疫仔猪攻毒后的存活率不低于95%为标准 ,疫苗置 4℃时保存期为 1 8个月 ,2 5℃保存

原场猪链球菌蜂胶苗的制备及免疫效果试验

用从豫北一自繁自养大型养猪场发病猪分离到的链球菌进行培养,经甲醛灭活,以蜂胶为佐剂,制成原场猪链球菌多价灭活苗,含菌量为200亿/ml。分别于产前40和15 d各注射3-4 ml/头。仔猪出生后,分别在7日龄、25日龄肌肉注射,1.5 ml/头,使仔猪对链球菌病具有一定的抵抗力。试验证明,该灭活苗对同型菌株攻毒保护率达90%以上,对猪链球菌病有较好的预防作用。

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及蜂胶灭活疫苗的制备

鸭传染性浆膜炎是由鸭疫里默氏杆菌引起的危害雏鸭的一种急性或慢性败血性传染病。为预防鸭传染性浆膜炎,从疑似鸭传染性浆膜炎的病鸭分离鉴定了鸭疫里默氏杆菌,并制备了蜂胶灭活疫苗,结果表明该灭活疫苗用于鸭场免疫,具有显著的效果。

鸡IBD蜂胶囊毒灭活苗的制备及其最佳用量的筛选

以典型发病鸡群的法氏囊为组织源,以蜂胶为佐剂,按病毒性动物组织灭活疫苗制造基本程序制备灭活苗;以不同的剂量皮下接种无IBD母源抗体的10日龄AA肉鸡,按常规方法检测其不同免疫期的AGP抗体阳性率、AGP效价和对强毒攻击的保护率。结果显示:0.5mL/只剂量组的受试鸡AGP抗体的阳性率在免疫后10d达到60%,20d上升到100%,90d仍有80%的阳性率。在免疫后第20、50d的攻毒试验中,保护率均为100%。

雏鸭病毒性肝炎蜂胶灭活苗研究初报

用上海地区的雏鸭病毒性肝炎病毒 型株 ,以蜂胶为佐剂 ,制备雏鸭病毒性肝炎蜂胶灭活苗。经实验室和现场初步试验 ,显示对雏鸭具有良好的安全性和免疫原性。每羽接种 0 .5ml,7d后攻毒的总保护率为 85.70 % ,保护指数为 82 .1 0 %。

荣昌部分地区鸭致病性大肠杆菌灭活疫苗的研制

试验选取从荣昌部分地区鸭致病性大肠杆菌筛选的O76、O78、O92和O142四种优势血清型细菌制作灭活疫苗,并应用该疫苗进行鸭大肠杆菌免疫。经物理性状检查、安全性检查、凝集效价测定、免疫产生期测定、最小免疫剂量测定、攻毒保护试验和田间试验,证明该灭活疫苗各项指标均符合标准,能有效地免疫鸭大肠杆菌病。

犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原对山羊的免疫效果研究

应用犬细小病毒(CPV)细胞毒,F81细胞系传代培养增殖病毒,以该细胞毒液经甲醛灭活后制备成蜂胶佐剂灭活抗原,用以免疫山羊,观察其免疫效果。结果显示,以5mL/只恒定剂量接种山羊,经4次连续免疫后CPV抗体水平整体较低,第28天测定HI效价在27(1:128),而以5mL/只递增剂量4次连续免疫山羊后,抗体水平整体较高,第28天测定,抗体HI效价在29(1:512),较恒定剂量免疫组高2个滴度水平。结果表明,采用犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原高免山羊可获得高效价的特异性抗血清。

鸡大肠杆菌病多价蜂胶灭活疫苗研究(I报)——疫苗制备及免疫效力试验

要研究以鸡大肠杆菌常见致病性血清型O_1、O_2、O_(78)3个血清型菌株制备成鸡大肠杆菌多价蜂胶灭活疫苗,以1ml/只免疫1月龄鸡,3周后攻毒保护车100%;每ml含10^(10)菌,10mg蜂胶佐剂的疫苗外观呈深褐,颗粒微小均匀,流动性好,使用方便;固体培养可获得大量抗原,简化浓缩工艺,其免疫效果明显好于液体培养菌疫苗.

兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制

应用兔出血症病毒(RHDV)和巴氏杆菌(Pm)联合研制而成的蜂胶佐剂灭活苗,用 1 mL 免疫试验兔,免疫后第 5d,对 RHDV 保护率达 100%(5/5);免疫后第 14d,对巴氏杆菌的保护率达 100%(4/4),第 7d 即产生较强的免疫力。T 细胞总玫瑰花环形成率(Et率)、活性玫瑰花环形成率(Ea率)的测定结果表明:蜂胶具有提高机体细胞免疫功能的作用;通过 HI 法监测兔病毒性出血症抗体水平,结果表明:蜂胶苗产生抗体时间较早,第 7d 抗体效价可达到较高水平(26.8),第 21 d 达到高峰(28.8)。

粤北地区鸡致病性大肠杆菌蜂胶佐剂疫苗的免疫试验

从粤北地区分离到的鸡致病性大肠杆菌中选择6株优势致病性大肠杆菌菌株做为制苗菌种,制备制苗菌液,按相同比例混合灭活,加蜂胶乙醇浸液为佐剂制备多价菌苗.安全试验结果证实,该灭活菌苗对20日龄肉仔鸡安全,试验鸡无不良反应;在5～10℃保存12个月,疫苗物理性状稳定.免疫效力试验结果:疫苗保护率为100%;接种20日龄雏鸡0.5 ml/只,血凝试验检测结果为接种多价蜂胶灭活疫苗的试验鸡在免疫后第二周可检测出抗体,抗体滴度均数为3.10 log2;免疫后第四周达到最高峰,抗体滴度均数为3.60 log2;免疫后第五周抗体滴度开始下降,抗体滴度均数为2.10 log2,但抗体滴度仍高于对照组(1.25 log2).在大肠杆菌感染鸡场进行的多批区域试验结果表明,该多价灭活疫苗安全,具有良好的保护作用.

兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联灭活苗与二种单苗的免疫比较

对研制的兔出血症、巴氏杆菌二联灭活苗分别与二种单苗进行了免疫力、免疫产生期、免疫持续保护效果、保存期的比较。结果表明：二联灭活苗对兔出血症RHD、巴氏杆菌病（Pm）的保护率分别100％（15／15），86．7％（13／15）。而二种单苗的免疫效果分别是100％（12／12）和88．8％（8／9），经统计学检验差异不显著（P〉0．05）。二联苗和单苗对RHD均100％保护，对于Pm二联苗和单苗第7天都能产生保护力，第10天可产生较坚强的免疫效果。疫苗免疫持续6个月后免疫对RHD、Pm的保护率分别为100％（8／8）、83．3％（10／12），单苗免疫后对RHD、Pm的保护率分别为100％（6／6），85．7％（12／14），免疫效果无显著性差异（P〉0．05）。二联苗和二种单苗在4～8℃和室温条件下保存6个月，对兔病毒性出血症的保护率达100％，对巴氏杆菌病也具有良好的免疫效果。二种组分制苗无干扰现象发生。

兔出血症-巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制及免疫效果的观察

采用对本地区具有良好免疫原性的兔病毒性出血症强毒株和巴氏杆菌菌株,研制出常规二联灭活苗和蜂胶二联灭活苗。用血清学方法对常规二联灭活苗和蜂胶二联灭活苗免疫后兔病毒性出血症抗体的检测。结果表明:常规二联灭活苗免疫后7 d HI抗体可达5.0log2,15 d明显上升,达5.5log2,30 d达到高峰,可达8.0log2,;而蜂胶二联灭活苗在免疫后7 d HI抗体可达5.0log,15d明显上升,达5.5log2以上,20 d显著上升9.25log2以上,30 d达到高峰,可达11.0log2。说明蜂胶提高抗体效价作用明显,可显著增强免疫效果。

兔瘟蜂胶组织灭活苗的研制及免疫效果观察

采用人工感染兔瘟 (兔出血热 )病毒致死兔的肝组织 ,制成 1 0 %的兔瘟组织灭活苗和1 0 %的兔瘟蜂胶组织灭活苗 ,研究蜂胶对兔瘟组织灭活苗免疫效果的影响。用常规血凝抑制试验检测比较了注射兔瘟组织灭活苗和兔瘟蜂胶组织灭活苗后 ,兔体内抗体水平的消长情况 ;结果表明组织灭活苗免疫后第 1 0d效价为 2 .75log2 ,2 0d抗体水平达到 6.2 5log2 ,30d又降为5 .2 5log2。而兔瘟蜂胶组织灭活疫苗第 1 0d效价为 4.0 0log2 ,2 0d抗体水平已达 8.2 5log2 ,30d抗体水平高达 1 1 .0 0log2。说明兔瘟蜂胶组织灭活苗能明显提高抗体效价 ,增强免疫效果。

DVH蜂胶灭活苗免疫雏鸭比较病理学研究

应用自行研制的雏鸭病毒性肝炎 (DVH)蜂胶灭活苗 ,以 0 .5ml/羽剂量免疫 1日龄雏鸭。结果显示 ,免疫 7d后攻毒 ,具有保护力。免疫组和对照组死亡雏鸭肝脏的病理变化相似 。

鸽新城疫(ND)蜂胶佐剂灭活疫苗免疫效果对比试验

采用鸽新城疫ND-GS 01株毒为种毒,分别研制出了尿囊液毒蜂胶佐剂灭活疫苗和四元材料(鸡胚尿囊液、羊水、尿囊膜、羊膜)混合病毒蜂胶佐剂灭活苗。对研制的两种灭活疫苗经安全性检验、急性毒性试验,免疫抗体消长水平与免疫持续期对比试验,结果表明,四元材料的疫苗与尿囊液疫苗性能一致。

兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制

用兔出血症毒（RHDV）和巴氏杆菌研制成蜂胶佐剂灭活苗,用1.0mL免疫试验兔,免疫后第5天,对RHDV保护率达100%;免疫后第7天对巴氏杆菌的保护率为72.5%,通过HI法监测兔病毒性出血症抗体水平,结果表明：蜂胶苗产生抗体时间较早,第7天后HI效价25.0,第20天效价显著上升达29.25以上,第30天达到最高峰,可达211.0,60-120 d均可维持在27.0-25.5水平,到第180天时抗体水平面略有下降为25.25,蜂胶苗分别在免疫后4个月、6个月用兔出血症强毒攻击均产生100%保护,在6个月用2个MLD的兔巴氏杆菌攻击保护率可达70%以上,二联苗4-8℃条件下保存期暂定为1年,25℃条件下暂定为半年。

鸡新城疫蜂胶灭活疫苗制苗工艺、疫苗安全性和免疫原性的研究

用NDVColon_30株病毒接种非免疫鸡胚 ,制备抗原液 ,经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化 ,研制成功鸡新城疫蜂胶灭活疫苗 ,对制品的安全性和免疫原性进行了测定 ,对 3～ 6周龄易感雏鸡以 2倍使用剂量肌肉注射 ,安全性良好 ,对 1日龄雏鸡接种 1个使用剂量 ,进行急性毒性试验观测 ,15天生长曲线表明 ,对雏鸡无影响 ,对 3～ 6周龄雏鸡注射 1个使用剂量 ,每批疫苗免疫 10只鸡 ,免疫 5～ 32天鸡血清中ND血凝抑制 (HI)抗体的几何平均滴度 (GMT)分别为 4.8～ 9.8log2 ,对鸡新城疫免疫攻毒试验表明 ,3批疫苗 ,每羽份含有的半数保护量 (PD50 )分别为≥ 131和≥ 12 7。

鸭疫里默氏杆菌贵州流行株蜂胶灭活疫苗制备

【目的】制备鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)贵州流行株蜂胶灭活疫苗。【方法】选取RA血清2型贵州流行株(RA-SS-8株)为基础菌株,依次利用分光光度法和平板计数法测定细菌生长曲线,再进行灭活条件筛选,以蜂胶为佐剂制备RA贵州流行株蜂胶灭活疫苗,并进行无菌检验、安全性检验及免疫鸭攻毒保护性试验。【结果】分光光度法测定RA-SS-8株菌液D_(600 nm)值随培养时间变化显示,细菌在0~3 h时增殖缓慢,在3~10 h时增殖趋势明显加快,在10 h以后增殖逐渐趋于平缓,随着培养时间的延长,细菌最终进入衰亡期;平板计数法结果显示,RA-SS-8株D_(600 nm)值为0.1~0.8时,该菌处于对数生长期,且D_(600 nm)值与活菌数呈现良好的线性关系;RA-SS-8株最佳灭活条件为0.2%甲醛溶液、37℃灭活12 h;蜂胶灭活疫苗含菌量为3.810^(9)CFU/mL,蜂胶干物质含量为10 mg/mL;无菌检验巧克力琼脂培养基上未见菌落生长;安全性检验以2倍免疫剂量接种雏鸭在观察期内未表现出不良反应,大体病变观察未见明显病变;免疫鸭攻毒保护性试验显示,蜂胶灭活疫苗免疫组鸭对RA-SS-8株的攻击后保护率为70%,蜂胶灭活疫苗对试验鸭心脏、肝脏组织均具有良好的保护效果。【结论】本研究成功制备了RA贵州流行株蜂胶灭活疫苗,为蜂胶灭活疫苗制备和动物免疫试验奠定基础。