抗HSV糖蛋白单克隆抗体可变区基因的克隆和序列测定

选用具有动物体内高保护作用的抗ＨＳＶ－１／ＨＳＶ－２型共同性箱蛋白Ｃ（ｇＣ）单克隆抗体１Ａ１２，从其杂交瘤细胞中提取出总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５为引物反转录合成ｃＤＮＡ，用一对鼠抗体通用Ｖ＿Ｈ引物和一对Ｖ＿Ｌ引物进行ＰＣＲ，扩增出１Ａ１２Ｖ＿Ｈ和１Ａ１２Ｖ＿Ｌ基因，并分别克隆入ｐＵＣ１８质粒中，序列分析结果表明，１Ａ１２Ｖ＿Ｈ基因由３３６ｂｐ组成，编码１１２个氨基酸，隶属于小鼠重链第３组亚组（Ｄ）；１Ａ１２Ｖ＿Ｌ基因由３３０ｂｐ组成，编码１１０个氨基酸，隶属于小鼠轻链ｋ链４组。

抗人精浆蛋白单克隆抗体轻、重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗人精浆蛋白（γ－Sm）单抗可变区基因，为单链抗体的构建及表达奠定基础．方法：从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体（γ-Sm－McAb）的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，经反转录、PCR分离获得了γ－Sm－McAb轻链可变区（VL）基因和重链可变区（VH）基因，分别克隆人pUC19质粒中，用全自动荧光DNA序列分析仪对VH，VL基因序列进行了分析．结果：E4B7VH基因由358bp组成，编码119个氨基酸，E4B7VL基因由326bp组成，编码108个氨基酸；从推导出的氨基酸序列分析证实E4B7VH，VL序列均符合小鼠Ig可变区的氨基酸序列特征．结论：所克隆基因与Internet中基因文库的所有已知基因比较，未查到相同基因，与小鼠免疫球蛋白可变区基因同源性最高．

抗二氟沙星单克隆抗体可变区基因的克隆及序列分析

采用RT-PCR技术,从抗二氟沙星单克隆抗体X1杂交瘤细胞株总RNA中扩增VH和VL基因片段,克隆入pUC18载体,测序进行(X1)可变区基因的克隆及序列分析。通过互联网检索发现VH和VL基因与Ig同源,分别符合小鼠IgVH和Igκ基因特征。VH基因全长363bp,编码121个氨基酸;VL基因全长为348bp,编码116个氨基酸。氨基酸序列分析结果显示,可变区含有明确的4个骨架区和3个抗原决定簇互补区。本试验成功获得X1株单抗的重、轻链可变区基因,为基因工程抗体的构建奠定了基础。

抗HSV－糖蛋白（gp30）单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

目的：获得鼠抗ＨＳＶ－２型特异性糖蛋白（ｇｐ３０）单抗重链可变区基因，为基因工程改建及表达奠定基础。方法：从分泌高中和活性的鼠抗ＨＳＶ－２型特异性单抗杂交瘤细胞系中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用ＰＣＲ法扩增出抗体重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑选阳性克隆进行核酸序列分析．结果：基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，含有维持抗体结构的半胱氨酸，序列内无终止码．结论：所克隆基因具备小鼠抗体重链可变区基因结构特征，与已确认的小鼠抗体ＶＨ基因有较高的同源性，隶属于Ｋａｂａｔ分类体系中的小鼠抗体重链（Ａ）亚组．