侧耳蛋白质和氨基酸含量测定与分析

对5种侧耳的子实体和菌丝进行蛋白质和氨基酸含量测定表明,侧耳蛋白质和氨基酸含量丰富,必需氨基酸种类齐全。但不同品种,不同部位差异较大。

CC10在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的探讨Clara细胞分泌蛋白10-kDa(CC10)在苦参碱诱导的肺腺癌细胞凋亡中的表达。方法肺腺癌A549细胞进行传代培养72 h后,分别加入30、60、120、2404、80 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot及RT-PCR检测CC10蛋白及mRNA的表达。结果不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,并呈浓度依赖性。实验组细胞凋亡率和CC10基因表达率高于对照组,也呈浓度依赖性。结论CC10基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用。

ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。

弓形虫表面抗原P35重组蛋白的表达、纯化及鉴定

目的 构建弓形虫RH株表面抗原P3 5基因重组表达质粒P3 5 /pGEX 2T ,并在大肠杆菌JM10 9中进行表达、纯化及鉴定。 方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术从弓形虫cDNA文库中扩增出编码P3 5抗原的基因片段 ,克隆入表达载体pGEX 2T ,并在大肠杆菌JM10 9中融合表达 ,经GSTrapTM亲和层析柱纯化出P3 5重组融合蛋白 ,以SDS PAGE电泳鉴定纯度、Western blot鉴定抗原性。 结果 成功构建了重组表达质粒P3 5 /pGEX 2T ,融合表达产物的分子质量约为 70kDa ;该蛋白抗原能为谷胱甘肽S转移酶 (GST)单克隆抗体及弓形虫感染的兔血清所识别。 结论 弓形虫表面抗原P3 5在大肠杆菌中有效表达 。

高原肺水肿患者体液免疫功能的初步观察

本文对海拔3658米(拉萨)处的14例健康人(对照组)和11例高原肺水肿患者治疗前后的免疫球蛋白、补体C_3、C_4和C-反应性蛋白进行了单向免疫扩散定量测定对比观察。发现高原肺水肿患者免疫球蛋白含量显著高于对照组,补体系统无显著变化,C-反应性蛋白治疗前显著高于治疗后和对照组。提示本病的发生和急性炎症的形成中,体液免疫是一个重要的促发因素。表明该病确为非感染性炎症。

鹌鹑口服氯化镉后,镉在主要器官中的分布及临床变化

54只26日龄雄性鹌鹑等分为9组,分别喂给含相当于采食量的0……100mg/kg镉的氯化镉小面丸,上、下午各一次。连续28天。发现除高剂量组(75、100rag/kg)部分动物死亡外。各饲镉组动物均有采食量减少,体增重减慢、消瘦、贫血、睾丸缩小、骨质疏松等临床症状。镉主要蓄积在肝、肾中。各器官内镉积累量与饲料中供镉量间呈明显的正相关(r>0.93),在肝、肾细胞浆液中,90％以上的镉与金属硫蛋白(MT)结合,仅少量镉与大分子量蛋白质(HP)结合。

氯胺酮鞘内注射对慢性坐骨神经损伤大鼠脊髓NMDA-2B蛋白表达的影响

目的探讨氯胺酮(KET)连续鞘内注射对慢性坐骨神经挤压损伤大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸亚基(NMDA-2B,即NR2B)蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠18只,随机分为假手术组、坐骨神经损伤组(CCI组)和CCI+KET组。按Bennett等法制作CCI模型,分别以von-Frey纤维丝和冷水测定痛阈及冷刺激反应,采用免疫组化技术测定各组脊髓背角NR2B蛋白表达的变化。结果CCI组痛阈显著下降,冷刺激反应显著升高,脊髓背角有大量NR2B免疫阳性蛋白表达(P<0.01);CCI+KET组出现轻度痛敏症状,NR2B阳性蛋白表达受到明显抑制(P<0.01)。结论NR2B蛋白表达上调可能是神经损伤后出现慢性疼痛的发病机制之一,KET通过抑制其表达从而发挥一定程度镇痛作用。

表达红色荧光蛋白重组柯萨奇病毒B组3型基因组稳定性分析

本文旨在分析含红色荧光蛋白mCherry基因的重组柯萨奇病毒B组3型(CVB3)基因组的稳定性。用重组质粒pCVB3-mCherry转染HeLa细胞,观察细胞病变和mCherry的表达。收获病毒后,用噬斑形成实验纯化病毒并测定病毒毒力。将重组病毒CVB3-mCherry在HeLa细胞中连续传代,提取第2～6代重组病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出报告基因mCherry及CVB3部分序列,进行测序分析。结果表明,pCVB3-mCherry转染的HeLa细胞出现细胞病变并表达红色荧光蛋白mCherry;从第2代开始,CVB3-mCherry出现报告基因mCherry及部分CVBVP4基因序列丢失,基因序列丢失导致病毒开放读码框架移位。本研究表明,mCherry基因序列的插入导致CVB3基因组不稳定。随着病毒的传代逐渐丢失插入的报告基因mCherry及CVB3基因组的部分序列,病毒读码框架移位,产生致死性突变株。因此,应用CVB3-mCherry时,病毒的传代次数不超过2代,否则应重新从重组质粒中收获病毒,并对每代重组病毒进行纯化和毒力测定。

一种新型抗肿瘤蛋白的氨基酸组成分析

本文介绍的一种新型抗肿瘤蛋白质因子是本室从牛骨髓细胞中分离得到的一种具有明显抑制肿瘤细胞生长作用的新型蛋白质￣［１］，经测定，该蛋白质为一种分子量约为６５ＫＤ的糖蛋白，我们在此基础上进行了该蛋白质的氨基酸组成分析，测得其含有十六种氨基酸残基，井富含丝氨酸残基。

14-3-3γ蛋白与雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡机制的相关性研究

目的研究雷公藤甲素(triptolid,TPL)对人胰腺癌细胞中14-3-3γ蛋白表达的影响,探讨雷公藤甲素诱导胰腺癌细胞凋亡与14-3-3γ蛋白的相关性。方法 (1)分别给予6.25、12.5、25、50、100、150、200ng/mL雷公藤甲素诱导24、48、72h后,采用MTT法检测胰腺癌AsPC-1细胞生长率;(2)给予雷公藤甲素诱导48h后,采用流式细胞术(FCM)检测胰腺癌AsPC-1细胞凋亡比例;(3)分别以12.5、25、50ng/mL雷公藤甲素诱导12、24、48、72h后,采用Western blot检测人胰腺癌AsPC-1细胞14-3-3γ蛋白表达。结果 (1)6.25~200ng/mL雷公藤甲素诱导24、48、72h后,胰腺癌细胞生长率均不同程度地受到抑制(24h:F=28.21,P<0.01;48h:F=136.00,P<0.01;72h:F=282.28,P<0.01);予12.5ng/mL雷公藤甲素诱导24、48、72h后测得细胞生长率分别为(88.22±4.73)%、(43.94±2.58)%、(20.84±2.63)%,差异具有统计学意义(F=293.54,P<0.01)。(2)以0、6.25、12.5、25ng/mL雷公藤甲素作用胰腺癌细胞48h后,凋亡细胞比例分别为(2.40±0.48)%、(15.14±2.56)%、(29.56±2.73)%、(58.27±2.84)%,差异具有统计学意义(F=309.657,P<0.01);(3)Western blot检测显示,雷公藤甲素可显著抑制胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白表达(χ2=10.769,P<0.05);随着作用时间的延长,胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白表达逐渐减少(χ2=11.205,P<0.05)。结论雷公藤甲素可显著抑制胰腺癌细胞14-3-3γ蛋白的表达,14-3-3γ蛋白可能在雷公藤甲素诱导人胰腺癌细胞发生凋亡的分子机制中发挥重要作用。

猪圆环病毒2型Cap基因原核表达载体的构建及表达

根据GenBank上已发表的PCV2的衣壳蛋白(Cap蛋白)基因设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到l条DNA片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体上获得稳定质粒,酶切及测序鉴定后,获得大小为578 bp的Cap基因序列,将该基因插入表达载体pET-30a质粒中,获得重组质粒pET-30a-PCV2-Cap,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。重组质粒pET-30a-PCV2-Cap经IPTG诱导后表达的重组蛋白分子量为28.0kD,经破碎后SDS-PAGE电泳分析表明该蛋白具有可溶性。Western blot分析表明,该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。

氨基酸残基的空间效应对蛋白质α-螺旋中氢键(HHB)稳定性的影响

本文计算了α-螺旋中氨基酸残基原子的空间坐标,求出侧链原子的位置,分析侧链对水分子的空间屏蔽作用以及对螺旋氢键(HHB)的稳定作用。结果表明:在α-螺旋中,Gly以及β-碳原子上直接接有极性基团的氨基酸残基对水分子的屏蔽作用小,因而降低HHB的稳定性,由这些氨基酸形成的肽链就不利于α-螺旋的稳定;非极性氨基酸以及极性基团不直接接在β-碳原子上的氨基酸残基对水分子的屏蔽作用较大,因而增强HHB的稳定性,由这些氨基酸形成的肽链有利于α-螺旋的稳定。

视网膜脱离患者视网膜下液的蛋白质含量及分子量测定

用LKB-2001立式电泳装置,以标志蛋白(Marker protein)为标准对照,分析了视网膜脱离和视网膜脱离伴高度近视患者血清和视网膜下液(SRF)的蛋白质分子量,发现视网膜脱离患者血清的蛋白质含量及种类与正常人血清的基本相同,分子量均在20 000D～94 000D之间,而SRF中蛋白质含量及其分子量则随病程延长而增加。病程在2个月以上者,其SRF的蛋白质含量及分子最与其本身血清的大致相同。

蛋白质在化妆品中的应用

主要阐述了不同种类蛋白质的结构、特性及其在化妆品行业中的功能,使在开发不同功能的化妆品上,不同种类蛋白质的使用有较明确的指引。蛋白质是一类最重要的生物大分子,其在生物体内占有特殊地位,充分利用生物活性成分已成为化妆品和个人护理行业的发展趋势,在自然状态下发挥生物活性成分对身体具有生长、保养和呵护的作用。

棉花黄萎病菌毒素的分离提纯及致萎活性测定

经超滤,Con.A—Scpharosc 4B亲和层析,从棉花黄萎病菌的Czapck′s培养液中,分离纯化致萎毒素。成分分析和致萎活性测定结果表明:棉花黄萎病菌产生的毒素是一种致萎力极强的糖蛋白。其含糖量为14.74％,蛋白质量为85.26％,其致萎活力是半纯化液的10～15倍,活力回收为76％。

BMP2/Smads通路介导富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞成骨分化的作用研究

目的:基于骨形态发生蛋白2(BMP2)/母亲信号蛋白同源物通路(Smads)通路,分析富血小板纤维蛋白(PRF)对人牙髓干细胞成骨分化的作用。方法:分离纯化牙髓干细胞,流式细胞仪检测并鉴定牙髓干细胞表面抗原标记物,随机分为对照组、PRF组、BMP激活剂组和BMP抑制剂组(简称激活剂组和抑制剂组),检测培养7d、14d后的碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-qPCR检测牙髓干细胞胶原蛋白(I COL-I)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)mRNA相对表达水平;茜素红染色观察矿化结节形成;Western-Blot检测牙髓干细胞BMP2、Smad1、Smad5、p-Smad1/5、RUNX2蛋白相对表达水平。结果:STRO-1、CD29、CD90表达阳性,符合牙髓干细胞的表型。各组ALP活性随时间延长而升高(P<0.05),从对照组到抑制剂组、PRF组、激活剂组,牙髓干细胞ALP活性及COL-Ⅰ、RUNX2、OCNmRNA相对表达水平依次升高,红色矿化结节数目、A值依次增加(P<0.05)。从抑制剂组到对照组、PRF组、激活剂组,牙髓干细胞BMP2、p-Smad1/5、RUNX2蛋白相对表达水平依次升高(P<0.05)。结论:PRF可能通过激活BMP2/Smads信号通路促进人牙髓干细胞成骨分化。

血清胱抑素C和视黄醇结合蛋白检测在肿瘤诊断的价值

目的通过对肿瘤患者血清中胱抑素C(Cys C)和视黄醇结合蛋白的浓度检测,探讨Cys C和视黄醇结合蛋白在肿瘤患者肾功能损害诊断中的临床意义。方法采用胶乳增强免疫比浊法在奥林巴斯AU480全自动生化分析仪上分别检测血清样本中Cys C和视黄醇结合蛋白的浓度。结果肿瘤患者血清样本中Cys C和视黄醇结合蛋白的浓度明显高于对照组,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤患者血清Cys C和视黄醇结合蛋白的阳性检测率均在65.0%左右。结论血清Cys C和视黄醇结合蛋白的浓度检测可优先作为诊断肿瘤患者肾功能损害程度的检测指标,其浓度变化对肿瘤患者肾损害病情监测的具有重要意义。

烟草资源综合利用初探

烟草是一种富含蛋白质及烟草碱的经济作物,其成分复杂,用途广泛。根据国内外对烟草资源的利用情况,我们对我国烟草资源的综合利用进行了初步地探索,获得了用烟草蛋白、尼古丁、烟酸及均质烟生产药用、饲用,食用和吸用等许多新型产品。

健脾化瘀解毒方调控PKA/NLRP3通路治疗胃癌前病变的机制

目的:探讨健脾化瘀解毒方(JPHYJD)调控蛋白激酶A(PKA)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路治疗胃癌前病变(GPL)的作用机制。方法:动物实验一:将60只小鼠随机分为空白组,模型组,JPHYJD高、低剂量组,维酶素组,分别进行处理后,HE染色观察胃黏膜病理改变,免疫荧光染色观察NLRP3、GSDMD表达。动物实验二:将60只小鼠随机分为空白组、模型组、H89组、模型+H89组、JPHYJD组、模型+H89+JPHYJD组,Western Blot检测GSDMD-N、Caspase-1、IL-1β表达。细胞实验一:THP-1细胞分为空白组、模型组和JPHYJD组,使用LPS+ATP造模后,JPHYJD组予含药血清处理。细胞实验二:分组同动物实验二,分别予以H89及JPHYJD含药血清处理。检测焦亡相关分子表达和PI染色。结果:动物实验中,与空白组比较,模型组出现GPL病变,NLRP3、GSDMD表达显著升高(P<0.01),JPHYJD可改善胃黏膜病变,显著抑制NLRP3、GSDMD表达(P<0.01,P<0.05);与空白组比较,模型组GSDMD-N、Caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.01),JPHYJD可抑制其表达(P<0.01),模型+H89+JPHYJD组表达水平显著高于JPHYJD组(P<0.05)。细胞实验中,与空白组比较,模型组NLRP3、GSDMD-N、Caspase-1、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高,焦亡水平显著升高(P<0.01,P<0.05),JPHYJD可显著抑制上述分子表达,减少细胞焦亡(P<0.01);与空白组比较,模型组PKA降低,NLRP3、GSDMD-N、IL-1β升高,焦亡水平升高(P<0.01),JPHYJD可上调PKA,抑制NLRP3、GSDMD-N、IL-1β,减少细胞焦亡(P<0.01,P<0.05);与JPHYJD组比较,模型+H89+JPHYJD组PKA降低,NLRP3、GSDMD-N、IL-1β表达升高,焦亡水平升高(P<0.01)。结论:JPHYJD可通过调控PKA/NLRP3通路抑制细胞焦亡从而治疗GPL。

田鼠巴贝虫棒状体相关蛋白基因的筛选及生物信息学分析

目的通过对专业数据库的搜索,筛选出田鼠巴贝虫棒状体相关蛋白的基因,并进行生物信息学分析预测。方法搜索NCBI、EMBL-EBI、Uniprot及PiroplasmaDB数据库,筛选田鼠巴贝虫棒状体蛋白基因。通过生物信息学方法,利用多种数据库及生物信息学分析软件分析其对应氨基酸序列的疏水区、跨膜区、信号肽及结构域,预测该蛋白二级结构、三级结构及其抗原表位;利用Clustal-X软件对其氨基酸序列进行同源性比对;利用PAUP软件构建系统发育树,对氨基酸序列进行多重序列比对(mutiple sequence alignment)。结果在EMBL-EBI和PiroplasmaDB中各筛选出1条田鼠巴贝虫棒状体蛋白基因,登录号分别为XP_012649548和BBM_III04695。通过软件APE进行序列比对,两个基因序列完全一致,证明为同一条基因序列。该基因共含有4 443bp,可编码1 480个氨基酸。编码蛋白分子质量为165.307ku,为分泌蛋白,含一个信号肽,4个跨膜区,并含有较多抗原表位。结论采用生物信息学方法预测田鼠巴贝虫棒状体相关蛋白含有较多的抗原表位,可作为疫苗和诊断抗原的候选分子。