蛋白酶体抑制剂PS-341对多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞多种细胞因子表达的影响

为了探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(bortezomib,velcade)对多发性骨髓瘤(MM)患者间充质干细胞(MSC)细胞因子分泌的影响,用含10%FBS的RPMI1640培养液培养11例MM患者MSC,细胞数达5-10×105时以终浓度50nmol/L的PS-341作用4小时,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达。结果表明:PS-341作用后MM病人MSC细胞因子的表达有显著下降,IL-6、IL-1β、SCF的表达与对照组比较,其显著性检验结果分别为P<0.05、P<0.01、P<0.05,其中IL-1β尤为明显;难治复发组与缓解组比较,IL-1β的表达有显著差异,完全缓解(CR)组IL-1β表达受抑制更明显,IL-6、SCF两组间表达无明显差异;PS-341治疗的1例患者MSC在PS-341作用后IL-1β未见表达;IL-1β的表达与否对IL-6、SCF的表达无影响。结论:蛋白酶体抑制剂PS-341下调MM患者MSC IL-6、IL-1β、SCF细胞因子的表达。

蛋白酶体抑制剂PS-341对多发性骨髓瘤间充质干细胞IL-1β表达的影响

目的初步探讨蛋白酶体抑制剂PS341在治疗多发性骨髓瘤(MM)时对间充质干细胞(MSC)细胞因子白介素(IL1β)分泌的影响。方法10%胎牛血清(FBS)的1640培养液培养MSC,细胞数达0.5～1.0×106时以终浓度50nmol/L的PS341作用4h,RTPCR检测细胞因子IL1β表达。结果PS341作用后MSC分泌的IL1β表达有显著下降,完全缓解及经PS341治疗后患者的IL1β未见表达;与难治复发组比较,PS341对完全缓解患者MSCIL1β的表达抑制更明显。结论PS341抑制MM患者MSC细胞因子IL1β的表达。

蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡与胞浆内[Ca^(2+)]变化的关系

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341(Bortezomib)诱导骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对其胞浆内[Ca2+]([Ca2+]i)的影响。方法以浓度梯度的PS-341干预U266细胞4h后收集,荧光显微镜观察细胞凋亡,AnnexinV-FITC/PI双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,Fluo-3/AM荧光素标记FCM检测[Ca2+]i。结果(1)PS-341作用U266细胞4h后荧光显微镜观察到凋亡细胞数随浓度增加而增多;(2)FCM检测凋亡细胞的比例分别为0.56%、7.71%、19.84%、31.10%、40.72%,与PS-341浓度成正比;(3)PS-341作用后U266细胞[Ca2+]i均值分别为403.65nmol/L、418.20nmol/L、378.65nmol/L、356.36nmol/L、349.21nmol/L;(4)PS-341诱导U266细胞凋亡时伴随[Ca2+]i的改变,浓度>50nmol/L时诱导的细胞凋亡伴随[Ca2+]i下降。结论蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡呈浓度依赖性;PS-341浓度>50nmol/L时下调[Ca2+]i,并由此发挥抗骨髓瘤细胞作用。

蛋白酶体抑制剂PS-341对U266细胞凋亡和多种细胞因子表达影响的研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂PS-341（bortezomib）诱导多发性骨髓瘤细胞株U266细胞凋亡时对IL-6、IL-1β和SCF细胞因子表达的影响。方法：用含15％FBS的RPM11640培养液体外培养U266细胞，分别用0、50、100、150、200nmol／L的PS-341干预U266细胞4h后收集，荧光显微镜观察细胞凋亡，Annexin V-FITC／PI双染法流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率的变化，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析U266细胞IL-6、IL-1β和SCF三种细胞因子表达的改变。结果：荧光显微镜和FCM发现PS-341以浓度依赖方式诱导U266细胞凋亡；PS-341明显抑制U266细胞IL-6、IL-1β和SCF的表达（P〈0．05）；对IL-6和SCF的抑制与PS-341浓度成正相关，对IL-1β的抑制在PS341浓度为0～150nmol／L时成正比关系，当浓度大于150nmol／L时差异无显著性。结论：蛋白酶体抑制剂PS-341诱导U266细胞凋亡时明显抑制其IL6、IL-1β和SCF的表达，是有效治疗MM的机制之一。

蛋白酶体抑制剂PS-341对白血病细胞株SHI-1的生长抑制作用研究

目的探讨蛋白酶体抑制剂PS-341对膜连蛋白急性单核细胞白血病细胞株SHI-1的抑制作用。方法台盼蓝拒染法观察不同浓度PS-341对SHI-1细胞活力的影响,用异硫氰酸荧光黄(Annexin-V-FITC)、碘化丙啶(PI)检测60nmol/L浓度PS-341处理0、6、12、24h时的SHI-1细胞凋亡率,并用流式细胞仪检测细胞周期。结果PS-341呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞活力;60nmol/L浓度PS-341在0、6、12、24h诱导SHI-1细胞凋亡率分别为4.2%、8.5%、13.7%和30.1%;流式细胞仪检测显示,60nmol/L浓度PS-341处理SHI-1细胞0、6、12、24h,G1期的细胞比例分别为46.0%、30.0%、14.3%和0.8%,G2/M期的细胞比例分别为16.0%、25.5%、49.4%和69.0%。结论PS-341可以抑制SHI-1细胞生长,并能诱导其凋亡,使SHI-1细胞停留在G2/M期。

PS-341对人类宫颈癌SiHa细胞凋亡作用的研究

目的研究PS-341对宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响。方法对宫颈癌SiHa细胞进行常规体外培养,将处于对数生长期的细胞,按照24、48、72 h随机分为3个作用时间相,用不同浓度PS-341作用。荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)测定细胞凋亡率;FCM法测定细胞周期变化。结果荧光显微镜下观察Hoechst染色的细胞核形态,可见对照组细胞核稀疏淡染,随着PS-341的作用时间延长及作用浓度的增高,各组细胞胞核形态发生变化,染色质固缩,细胞核致密深染,且数量逐渐增加,60 nmol/L PS-341作用72 h时,细胞核呈碎块状致密浓染。FCM法检测细胞凋亡率结果显示:随着PS-341作用时间延长及作用浓度的增高,细胞凋亡率显著增高(P<0.01)。FCM分析结果显示:各组细胞与对照组比较,G0/G1期细胞比例明显增高(P<0.01),S期细胞比例明显下降(P<0.01)。细胞生长阻滞于G0/G1期,各组间差异显著(P<0.01)。结论 20 nmol/L PS-341可诱导人类宫颈癌SiHa细胞凋亡,并随着作用时间的延长和浓度增加,治疗效果逐渐加强,其中60 nmol/L PS-341作用72 h效果最强。

蛋白酶体抑制剂逆转肿瘤多药耐药的研究进展

肿瘤多药耐药是肿瘤治愈的主要障碍之一。肿瘤细胞对抗癌药物诱导的凋亡的耐受是多药耐药形成的重要原因。蛋白酶体抑制剂可选择性地促进肿瘤细胞凋亡,逆转多药耐药。蛋白酶体被认为是肿瘤治疗的新靶点。

18F标记脱氧葡萄糖-正电子发射扫描成像在小鼠重症急性胰腺炎早期诊断和疗效评价中的应用

目的评价18F标记脱氧葡萄糖-正电子发射扫描成像（18F-FDG-PET）在小鼠重症急性胰腺炎早期诊断和疗效评价中的应用价值。方法采用连续7次腹内注射雨蛙素（每次间隔1h）及脂多糖制作小鼠重症急性胰腺炎模型，57只雌性ICR小鼠随机分为硼替佐米（PS-341）治疗组（注射脂多糖前0．5h腹内注射0．5mg／kgPS-341），模型对照组[注射脂多糖前0．5h腹内注射50％二甲基亚砜（DMSO）]，空白对照组（生理盐水制模）。首次注射雨蛙素后8h将小鼠处死，每组3只行PET胰腺扫描，8只取胰腺组织测髓过氧化物酶（MPO），另外8只光学显微镜下观察小鼠胰腺的病理形态。结果正常对照组PET扫描时胰腺不显影，与模型对照组比较，治疗组小鼠胰腺18F-FDG的吸收率（5．27±0．35，3．48±0．49）、胰腺MPO活性（3．46±0．28、1．82±0．54）均显著降低，两者之间差异有统计学意义（P〈0．05）；胰腺组织的病理学也得到明显改善，进一步验证了18F-FDG—PET在重症急性胰腺炎诊断和疗效评价中的应用价值。结论18F．FDG-PET能够动态监测重症急性胰腺炎的发展和转归，评价治疗效果。