豆粉与乳清蛋白复配增强免疫功能的研究

目的:通过小鼠免疫功能试验评估豆粉、乳清蛋白粉、复配蛋白粉3种受试物是否具有增强免疫力的功效。方法:利用随机分组法进行实验,将200只昆明种小鼠分为对照组、豆粉组、乳清蛋白粉组和复配蛋白粉组,分别评估不同受试物的免疫功能。结果:豆粉、乳清蛋白粉、复配蛋白粉均能有效增强小鼠免疫功能,豆粉有效剂量为600 mg·kg^(-1)bw·d^(-1),乳清蛋白粉有效剂量为400 mg·kg^(-1)bw·d^(-1),复配蛋白粉有效剂量为1 g·kg^(-1)bw·d^(-1)。结论:3种受试物均能有效增强小鼠免疫功能,其中复配蛋白粉的效果最好。

结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性

目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到E.coli BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层析法纯化获得PhoP重组蛋白。用ELISA分析Mtb感染小鼠和TB患者血清中PhoP特异性抗体水平。PhoP重组蛋白经肌肉注射途径免疫小鼠,分离小鼠多抗血清,用ELISA和Western blot分别检测抗体效价和抗体特异性。分离小鼠脾细胞,用ELISpot和ELISA法分别检测分泌IFN-γ细胞频数及其分泌水平。结果经生物信息学预测发现PhoP含有24个B细胞抗原表位和11个优势T细胞表位。成功构建PhoP原核表达载体并获得纯化的PhoP蛋白。Mtb感染小鼠和TB患者血清中的PhoP特异性抗体显著升高,查准率分别为99.9%和82.5%,特异度均为100%。PhoP免疫小鼠诱导产生高水平特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经抗原体外刺激后,IFN-γ的分泌水平和细胞频数均显著增加,IL-2和IL-10分泌水平上调。结论PhoP蛋白可诱导体液免疫应答和Th1型为主的细胞免疫。PhoP蛋白有良好的免疫原性,且具有一定的TB诊断效能。本研究为阐明PhoP在Mtb感染中的作用及其用于TB诊断奠定了一定的基础。

血浆蛋白与骨质疏松症的关系及潜在治疗靶点:基于国际UK Biobank数据库信息

背景:骨质疏松症是全球范围内增加疾病负担和致残率的重要因素。血浆蛋白参与体内复杂的生物过程,在揭示疾病机制和发现潜在治疗靶点方面起着关键作用。尽管已有研究显示血浆蛋白与骨质疏松症之间存在关联,但这些关联的因果性质尚未得到充分阐明。因此,利用大规模的血浆蛋白数据探究与骨质疏松症相关的因果蛋白并识别潜在的药物靶点,对于骨质疏松症的防治至关重要。目的:运用两样本孟德尔随机化分析,以国际UK Biobank数据库为来源信息,评估血浆蛋白与骨质疏松症之间的因果关联。方法:从UK Biobank数据库获取1001种血浆蛋白相关的全基因组显著性水平(P<5×10-8)的蛋白质数量性状位点作为工具变量,并排除连锁不平衡。骨质疏松症的汇总数据来自FinnGen数据库,共涉及438872名欧洲血统个体。研究采用逆方差加权、MR-Egger回归、加权中位数等方法进行分析,并进行多项敏感性分析以确保结果的稳健性。进一步构建蛋白-蛋白互作网络,结合基因本体富集分析和京都基因与基因组百科全书通路分析,探索血浆蛋白的功能相关性及潜在作用机制。结果与结论:①孟德尔随机化逆方差加权法结果显示有50种血浆蛋白与骨质疏松症存在因果关系(P<0.05),包括染色体19开放阅读框12(chromosome 19 open reading frame 12,C19orf12;OR=0.610,95%CI:0.483-0.769,P=2.967×10-5)、表皮生长因子(OR=0.877,95%CI:0.770-0.999,P=0.049)等20种血浆蛋白可能与骨质疏松症的风险降低相关,有CCL18(OR=1.091,95%CI:1.037-1.147,P=0.001)、CD209(OR=1.036,95%CI:1.003-1.070,P=0.034)等30种血浆蛋白可能增加骨质疏松症的风险,经Bonferroni校正后,只有C19orf12与骨质疏松症存在显著的因果关联。②多项敏感性分析显示研究不存在多效性和异质性,说明结果具有稳健性。③通过构建蛋白-蛋白互作网络明确了表皮生长因子、CCL5、CXCL13、CXCL5、血管内皮生长因子C、CCL18、CCL17、TEK受体酪氨酸激酶、含免疫球蛋白样和表皮生长因子样结构域的酪氨酸激酶1(TIE1)和CCL23为核心蛋白。④基因本体富集分析和京都基因与基因组百科全书通路分析表明这些血浆蛋白在免疫系统中具有重要作用,通过参与信号传导、细胞迁移和趋化等过程影响骨质疏松症。⑤文章结果揭示了1001种血浆蛋白与骨质疏松症的潜在因果关联,这种基于大规模数据驱动的分析方法有助于在中国人群中识别新的生物标志物和药物靶点;其次,文章结果表明,免疫系统信号传导、细胞迁移和趋化等过程在骨质疏松症发病机制中发挥重要作用,这为特定遗传背景和环境因素下的骨质疏松症研究提供了新的方向;最后,研究中识别的核心蛋白(如表皮生长因子、CCL5及CXCL13等)有望成为新的生物标志物或药物靶点,为骨质疏松症的精准防治提供新的依据。

炎症、代谢物与骨质疏松症

背景:多项研究表明炎症、代谢物与骨质疏松症之间存在密切关系,但炎症相关蛋白与骨质疏松症之间是否存在遗传因果效应以及代谢物是否在其中发挥中介效应尚不清楚。目的:采用孟德尔随机化方法研究了炎症相关蛋白和骨质疏松症的因果关系以及血浆代谢物在该关系中的中介作用。方法:利用全基因组关联研究(GWAS)的汇总数据,骨质疏松症数据来Fengenn数据库,炎症相关蛋白和血浆代谢物的数据来自己发表的研究。评估暴露与结局之间的关联性主要是反方差加权方法,通过双向孟德尔随机化分析探索炎症相关蛋白与骨质疏松症之间的因果关系,并通过两步孟德尔随机化分析发现潜在的发挥中介作用的血浆代谢物。随后进行敏感性分析以进一步验证结果的稳健性。采用Cochran’s Q检验评估研究结果的异质性。通过MR-Egger截距法和MR-PRESSO法进行水平多效性评估。结果与结论:(1)通过初步双向孟德尔随机化分析,鉴定出5种与骨质疏松症有正向因果关系且没有反向因果关系的炎症相关蛋白;其中神经鞘胚素(OR=0.895,95%CI:0.819-0.979,P=0.015)与骨质疏松症呈负相关,而趋化因子(C-X-C基序)配体1(OR=1.100,95%CI:1.002-1.209,P=0.046)。趋化因子(C-X-C基序)配体11(OR=1.150,95%CI:1.043-1.268,P=0.005)、白细胞介素17 C(OR=1.087,95%CI:1.004-1.176,P=0.040)、肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导因子(OR=1.108,95%CI:1.002-1.226,P=0.046)与骨质疏松症呈正相关;敏感性分析显示,这些因果效应都没有异质性和多效性。(2)文章还进行了两步孟德尔随机化分析发现潜在的中介血浆代谢物:1-棕榈酰gpc(16∶0)增加了神经鞘胚素对骨质疏松症的负向作用,5α-雄甾烷-3α,17β-单硫酸二醇会增加趋化因子(C-X-C基序)配体1、趋化因子(C-X-C基序)配体11介导的骨质疏松症风险性;Α-酮戊二酸与琥珀酸比值会导致趋化因子(C-X-C基序)配体11、白细胞介素17 C介导的骨质疏松症风险性增加;亚精胺、脯氨酸与反式-4-羟脯氨酸比值导致趋化因子(C-X-C基序)配体11介导的骨质疏松症风险性增加;12,13-二羟基十八碳烯酸会导致白细胞介素17 C介导的骨质疏松症风险性增加;胡椒碱代谢物C_(16)H_(19)NO_(3)(3)的硫酸盐水平、腺苷3′,5′-环单磷酸腺苷会导致肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导因子介导的骨质疏松症风险性增加。(3)上述数据证实,部分炎症相关蛋白可以影响骨质疏松症的风险,这种作用是正向和负向的,并且其中一部分作用由血浆代谢物介导,这为未来探究骨质疏松症的发生发展机制提供了新的认知。

支气管扩张急性加重期患者细胞免疫与炎症指标的相关性研究

目的通过检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞,同时与中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、血小板/淋巴细胞比值(PLR)、C反应蛋白(CRP)炎症指标做相关性分析。方法选取2022年10月至2023年4月牡丹江医学院附属红旗医院呼吸与危重症医学科收治的支气管扩张急性加重期患者50例纳入支扩组,选取同期健康体检人员50例纳入对照组,所有患者均需完成T淋巴细胞亚群、血常规、CRP等相关检查。两组患者均进行CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞检测,比较两组患者的T淋巴细胞以及NLR、PLR、CRP等炎症指标的水平;同时将细胞免疫指标与炎症指标做相关性分析。结果CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞在支扩组的水平低于对照组(P<0.05)。PLR、NLR、CRP在支扩组中的水平高于对照组(P<0.05)。在支扩组患者中,PLR、NLR与CD3^(+)T淋巴细胞呈负相关(P<0.05);CRP与CD4^(+)T淋巴细胞呈负相关(P<0.05)。结论支气管扩张急性加重期患者CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞降低,推测CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞在支气管扩张急性加重期中发挥一定作用。支气管扩张急性加重期患者的NLR、PLR、CRP越高,炎症反应越重,机体的T淋巴细胞水平越低。

妊娠期糖尿病母亲新生儿血清蛋白质、血脂、免疫功能的变化及临床意义

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)母亲新生儿血清蛋白质、血脂、免疫功能的变化及临床意义。方法选择2020年7月至2021年12月收治的108例诊断为GDM母亲新生儿作为研究对象,另选择同期80例正常母亲新生儿作为对照组。所有新生儿均于出生后24 h时采集空腹外周静脉血5 mL,检测两组新生儿的血清蛋白质[总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、前白蛋白(PA)],血脂水平{脂蛋白a[Lp(a)]、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)}和血清免疫球蛋白(Ig)G、IgM、IgA、补体C3、补体C4水平,以及外周血自然杀伤(NK)细胞比例和T淋巴细胞亚群(包括CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T细胞比例),并计算CD4^(+)T细胞与CD8^(+)T细胞比值(CD4^(+)/CD8^(+))。结果观察组新生儿血清TP、ALB、GLB和PA水平均显著低于对照组新生儿(P<0.05)。观察组新生儿血清Lp(a)、TG、TC和LDL-C水平均显著高于对照组新生儿(P<0.05),血清HDL-C浓度显著低于对照组新生儿(P<0.05)。观察组新生儿血清IgG、补体C3水平均显著低于对照组新生儿(P<0.05),两组新生儿血清IgM、IgA和补体C4水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组新生儿外周血NK细胞及CD3^(+)、CD4^(+)T细胞比例和CD4^(+)/CD8^(+)均显著低于对照组新生儿(P<0.05),外周血CD8^(+)T细胞比例则显著高于对照组新生儿(P<0.05)。结论GDM可导致新生儿血清蛋白质水平降低,血脂代谢紊乱,体液免疫与细胞免疫功能下降,从而不利于其生长发育。

温阳活血法治疗早期浆细胞性乳腺炎疗效及对免疫功能的影响

目的:观察温阳活血法治疗早期浆细胞性乳腺炎疗效及对免疫功能的影响。方法:选择2021年4月—2022年12月于我院治疗的80例浆细胞性乳腺炎患者,随机数字表法均分为两组。对照组40例,给予患者常规西医治疗,观察组40例,在常规西医治疗同时给予温阳活血法治疗。比较两组的临床疗效,治疗前、后评价患者各项中医证候评分,以及乳房红肿部位温度评分,通过疼痛视觉模拟评分(VAS)评价患者乳房疼痛情况,比较治疗前、后检测患者高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、C反应蛋白(CRP)、中性粒细胞计数(NEUT)、白细胞计数(WBC)、泌乳素(PRL)、补体C4、免疫球蛋白IgM水平,记录两组患者6个月内复发率。结果:治疗后,观察组总有效率为95.00%,高于对照组的75.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组复发率为2.50%,低于对照组的20.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组各项中医证候评分、乳房疼痛评分、肤温评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组HMGB1、CRP、NEUT、WBC水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组补体C4、免疫球蛋白IgM、PRL水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:温阳活血法治疗早期浆细胞性乳腺炎患者,可降低患者HMGB1、CRP、NEUT、WBC水平,抑制机体炎症,调节机体免疫功能,降低PRL水平,减轻患者乳房疼痛,缓解患者病情,提升临床疗效,减少复发率。

Rho 1 participates in parasitoid wasp eggs maturation and host cellular immunity inhibition

Endoparasitoid wasps introduce venom into their host insects during the egglaying stage.Venom proteins play various roles in the host physiology,development,immunity,and behavior manipulation and regulation.In this study,we identified a venom protein,MmRhol,a small guanine nucleotide-binding protein derived from ovary in the endoparasitoid wasp Microplitis mediator and found that knockdown of its expression by RNA interference caused down-regulation of vitellogenin and juvenile hormone,egg production,and cocoons formation in the female wasps.We demonstrated that MmRho1 entered the cotton bollworm's(host)hemocytes and suppressed cellular immune responses after parasitism using immunofluorescence staining.Furthermore,wasp MmRhol interacted with the cotton bollworm's actin cytoskeleton rearrangement regulator diaphanous by yeast 2-hybrid and glutathione s-transferase pull-down.In conclusion,this study indicates that MmRho1 plays dual roles in wasp development and the suppression of the host insect cellular immune responses.

嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究

【目的】评价嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的免疫学功能,为探索嗜水气单胞菌渔用疫苗候选抗原提供理论依据。【方法】通过生物信息学分析AHA2991氨基酸序列,揭示不同菌株间的亲缘关系;分子克隆构建AHA2991表达菌株并确定最佳诱导条件;包涵体洗涤及SDS-PAGE切胶纯化获得AHA2991并免疫红鲫;Western blotting检测AHA2991红鲫血清的特异性与效价;ELISA模拟AHA2991红鲫血浆与嗜水气单胞菌的体外相互识别作用;酸性、碱性磷酸酶(ACP、AKP)测定与细胞吞噬作用评价AHA2991非特异性免疫功能;组织病理学切片探究AHA2991免疫对红鲫内脏的影响情况。【结果】AHA2991蛋白家族在不同菌株间具有同源性,不同菌株间亲缘关系较近,尤其在气单胞菌间亲缘关系更近;AHA2991的最佳诱导条件为:菌液浓度OD600=1.0,IPTG终浓度0.1 mmol/L,在28℃下诱导8 h。红鲫AHA2991抗血清具有良好的特异性,其效价为1∶800;体外AHA2991血浆对嗜水气单胞菌具有识别作用,滴度可达1∶3200;ACP、AKP指标及细胞吞噬作用均显示AHA2991激活红鲫非特异性免疫;组织病理学切片表明AHA2991免疫对红鲫内脏结构无影响。【结论】嗜水气单胞菌AHA2991具有良好的免疫原性,有望成为嗜水气单胞菌渔用疫苗的候选抗原成分。

蛋白质营养不良大鼠血浆蛋白水平与细胞免疫功能的动态变化

大鼠喂以５％酪蛋白饲料造成蛋白质营养不良，与喂以２０％酪蛋白饲料大鼠比较，观察了血浆蛋白水平，外周血Ｔ淋巴细胞亚群及转化反应的动态变化。实验结果表明，血浆前白蛋白、Ｔ淋已细胞ＣＤ＿４亚群及Ｔ淋巴细胞转化反应对蛋白质营养不良较为敏感，５％蛋白水平饲料喂养三天后就显著下降，Ｔ淋巴细胞转化反应早期下降后尚有反弹现象；改喂２０％蛋白水平饲料一周后，血浆蛋白均恢复至正常水平，Ｔ淋巴细胞ＣＤ＿４亚群及转化反应恢复缓慢。

富硒蛋白对小鼠免疫功能影响

目的观察富硒蛋白对正常小鼠免疫功能的影响作用。方法选用48只健康的ICR小鼠,随机分成4组,在饲料中分别加入贫硒蛋白、贫硒蛋白与亚硒酸钠混合物、富硒牛奶、富硒蛋白,进行30 d的喂饲后测定小鼠淋巴器官指数、迟发型变态反应、溶血空斑形成数。结果富硒蛋白能够促进小鼠溶血空斑的形成,刺激迟发型变态反应,作用优于相同硒含量的富硒牛奶或者贫硒蛋白与无机硒的混合饲料(P<0.05)。结论该富硒蛋白产品有提高小鼠体液免疫、细胞免疫功能的作用。

L-精氨酸对二度烧伤治疗作用的临床研究

目的通过观察烧伤后胃肠途径给予Ｌ－精氨酸对二度烧伤免疫功能和营养代谢的影响，探讨Ｌ－精氨酸对二度烧伤的治疗作用。方法采用随机双盲实验方案，实验组每日给予Ｌ－精氨酸１５ｇ，对照组每日给予甘氨酸２５ｇ，实验共持续１４天，两组定期进行Ｔ细胞计数，ＣＤ４／ＣＤ８比值，自然杀伤细胞（ＮＫ）活性和白介素－２（ＩＬ－２）测定，血浆转铁蛋白（ＴＲＦ）和前白蛋白（ＰＡＢ）含量，氮平衡的测定。结果①Ｌ－精氨酸对Ｔ细胞总量、ＣＤ４／ＣＤ８无影响，但增加了ＮＫ细胞的活性和ＩＬ－２产生量；②Ｌ－精氨酸减轻了伤后ＴＲＦ、ＰＡＢ的下降，加快其恢复，并改善了氮平衡状态。结论二度烧伤患者补充外源性Ｌ－精氨酸可增强细胞免疫水平，促进蛋白质合成代谢，具有积极的治疗作用。

结核亚单位疫苗AEC/BC-C02诱导小鼠长期的抗原特异性细胞应答

目的动态评价结核亚单位候选疫苗AEC/BC-C02在小鼠中的细胞免疫应答水平。方法6～8周龄SPF级BALB/c雌鼠48只,按数字表法随机分成两组,一组免疫AEC/BC-C02,另一组免疫PBS。末次免疫后第1、2、4、8周分别取两组小鼠(6只/组)分离脾淋巴细胞,ELISPOT检测分泌抗原特异性IFN-γ的T细胞频率;在第2、4、8周ELISA检测抗原特异性IFN-γ的分泌量;在第4、8周,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测脾淋巴细胞增殖。结果 (1)末次免疫后第1、2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B特异性的IFN-γ斑点形成细胞(spot forming cells,SFC)分别为168.8±103.5、205.2±51.0、206.8±65.3和160.0±67.9,与PBS对照组的8.9±6.0、16.1±18.8、9.3±4.9和7.7±6.6比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为3.779、8.525、7.424、5.473;P值均<0.01);EC特异性的IFN-γSFC分别为45.1±18.6、75.6±39.3、86.2±50.4和54.3±26.3,与PBS对照组的4.5±3.5、11.7±10.5、3.8±5.8和5.2±4.3比较,差异均有统计学意义(成组t检验,t值分别为5.258、3.850、3.977、4.521;P值均<0.01)。(2)末次免疫后第2、4、8周,对疫苗组小鼠脾淋巴细胞,Ag85B多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(1.27±0.13)ng/ml,(1.76±0.55)ng/ml和(1.44±0.44)ng/ml;EC多肽刺激的IFN-γ分泌量分别是(0.81±0.33)ng/ml,(0.81±0.69)ng/ml和(0.54±0.29)ng/ml,两者间差异有统计学意义(配对t检验,分别为:t=3.008,P<0.05;t=2.631,P<0.05;t=10.02,P<0.01)。(3)末次免疫后第4、8周,Ag85B多肽对疫苗组小鼠脾淋巴细胞的刺激指数(SI)分别为1.756±0.339和1.936±0.287,均分别高于PBS组的1.287±0.0581和1.382±0.114,差异有统计学意义(成组t检验,分别为:t=3.030,P<0.05;t=4.387,P<0.01);EC多肽对疫苗组SI分别为1.599±0.154和1.581±0.156,均分别高于PBS组的1.380±0.126和1.314±0.170,差异有统计学意义(成组t检验,t值分别为2.540、2.844;P值均<0.05)。结论新型结核亚单位疫苗AEC/BC-C02免疫小鼠可诱导长期稳定存在的抗原特异性记忆T细胞,为后期抗Mtb保护力研究提供药理学基础。

比较腹腔镜辅助与开腹胃癌根治术对患者急性期反应及细胞免疫功能的影响

目的比较腹腔镜辅助胃癌根治术与开腹胃癌根治术对机体急性期反应及细胞免疫功能的影响。方法回顾性分析2014年9月-2015年9月于本院普通外科住院手术治疗的179例胃癌患者临床病理资料。腹腔镜组82例,开腹组97例,两组资料具有可比性(P>0.05)。比较两组术前1 d,术后1 d、2 d、3 d、7 d外周血C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度及淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数水平。结果与开腹组相比,腹腔镜组术中出血量少[(152.32±98.18)ml vs(238.97±138.03)ml,P<0.05],手术时间略长[(211.44±54.58)min vs(191.32±50.15)min,P<0.05],淋巴结清扫数目相近[(25.26±1.44)vs(24.97±1.94),P>0.05]。两组CRP、IL-6水平及中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数均在正常范围内,无统计学差异(P均>0.05)。两组CRP、IL-6术后1 d、2 d、3 d、7 d均较术前明显升高(P<0.05);CRP在术后第2天达到峰值,IL-6在术后第1天达到峰值;术后同一时点,腹腔镜组CRP,IL-6水平均低于开腹组(P<0.05)。两组中性粒细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值术后第1、2、3、7天均较术前明显升高(P<0.05),淋巴细胞计数较术前明显下降(P<0.05);中性粒细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数在术后第1天达到峰值,淋巴细胞计数在术后第1天降到最小值;术后同一时点,腹腔镜组中性粒细胞计数、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数低于开腹组,淋巴细胞计数则高于开腹组(P<0.05)。结论腹腔镜手术与开腹手术相比,术中出血量少,手术效果相近,手术时间稍长,引起的急性期反应及细胞免疫抑制程度轻。

川崎病患儿细胞免疫功能状况及转录因子T-bet和GATA3的调控作用

目的:研究川崎病患儿细胞免疫功能状况及转录因子T-bet和GATA3的调控作用。方法:选取41例川崎病患儿为研究对象,同时选取年龄和性别相匹配的因急性上呼吸道感染发热儿童40例为对照组,分别采用三色荧光流式细胞术和半定量逆转录-聚合酶链反应检测2组患儿外周血Th1、Th2细胞数量及单个核细胞中T-bet和GATA3 mRNA水平。结果:川崎病患儿外周血Th1、Th2细胞比率及单个核细胞转录因子T-bet mRNA、GATA3 mRNA转录水平分别为(10.36±3.69)%、(6.46±2.28)%、0.51±0.16和0.38±0.13,均显著低于对照组[(25.26±5.22)%、(16.87±4.35)%、0.62±0.21和0.46±0.12,P<0.05]。Spearman相关分析显示Th1和Th2细胞比率分别与T-bet mRNA和GATA3 mRNA水平呈正相关。结论:川崎病患儿急性期T细胞并非活化而是处于抑制状态,T-bet和GATA3分别对Th1和Th2细胞增殖具有调控作用。

定位表达的新城疫病毒HN蛋白对荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫作用

背景与目的新城疫病毒HN蛋白是新城疫病毒产生溶瘤作用的重要免疫原。在前期体外实验基础上,比较定位表达细胞不同部位的HN蛋白体内抗肿瘤免疫作用。方法通过构建荷瘤小鼠,瘤内注射定位表达于细胞不同部位的新城疫病毒HN蛋白,即胞浆型(Cy-HN)、跨膜型(M-HN)、分泌型(Sc-HN)重组真核表达质粒,比较荷瘤小鼠的肿瘤生长速度,脾淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性。结果瘤内注射跨膜型重组真核表达质粒的荷瘤小鼠肿瘤生长缓慢,与瘤内注射胞浆型和分泌型重组真核表达质粒的荷瘤小鼠相比有统计学差异(第18天:P=0.022;第21天:P<0.01),同时,该组荷瘤小鼠的淋巴细胞增殖反应和细胞毒T细胞活性也较高[M-HNvsCy-HN,P=0.019;M-HNvsSc-HN,P=0.043;M-HNvspcDNA3.1(+),P<0.01]。结论定位表达于细胞不同部位的HN蛋白体内抗肿瘤免疫作用存在差异,跨膜型HN蛋白的重组DNA质粒能够提高荷瘤小鼠的特异性细胞免疫应答。

芪杞参颗粒对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能的影响

目的研究芪杞参颗粒对小鼠的细胞免疫和体液免疫功能的影响。方法 6周龄昆明种小鼠分空白对照组、芪杞参颗粒高、中、低剂量组,小鼠腹腔注射鸡红细胞混悬液,观察芪杞参颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;制备绵羊红细胞(SRBC),观察血球凝集程度,测定血清溶血素;以靶细胞(YAC-1细胞)与脾细胞(效应细胞)的反应检测芪杞参颗粒对小鼠自然杀伤(NK)细胞活性的影响;采用淋巴细胞转化法观察芪杞参颗粒对细胞免疫的影响;计算小鼠胸腺质量/体质量及脾脏质量/体质量为脏器系数观察芪杞参颗粒对小鼠脏器的影响。结果与对照组比较,芪杞参颗粒显著增加小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能;对小鼠体液免疫功能有一定的增强作用;可增强小鼠NK细胞活性;对刀豆蛋白(Con)A诱导下的小鼠淋巴细胞转化有增强作用;对脏器系数没有显著的影响。结论芪杞参颗粒具有明显的免疫调节作用,预示其有良好的应用前景。

肾康注射液联合缬沙坦对慢性肾小球肾炎肾功能、细胞免疫功能及尿蛋白的影响

目的探讨肾康注射液联合缬沙坦治疗慢性肾小球肾炎的临床效果。方法将2016年11月—2018年7月收治的96例慢性肾小球肾炎患者以随机数字表法分为对照组48例,观察组48例,对照组给予缬沙坦治疗,观察组在对照组基础上加用肾康注射液。观察两组治疗效果,治疗前、治疗8周后肾功能、尿蛋白、细胞免疫功能变化及不良反应发生情况。结果治疗总有效率观察组为95.83%(46/48),与对照组81.25%(39/48)对比,明显较高(P<0.05);治疗前,两组肾功能、尿蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗8周后,观察组血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)及24 h尿定量(24 hUPQ)与同期对照组对比,明显较低(P<0.05);治疗前,两组细胞免疫功能无统计学意义(P>0.05),治疗8周后,观察组血清CD4^+、CD4^+/CD8^+与同期对照组对比,明显较高,CD8^+与同期对照组对比,明显较低(P<0.05);不良反应发生率观察组为14.58%(7/48),与对照组12.50%(6/48)对比,无统计学意义(P>0.05)。结论肾康注射液联合缬沙坦治疗慢性肾小球肾炎,效果确切,可显著改善肾功能,降低尿蛋白水平,增强细胞免疫功能,且安全性良好,值得推广。

结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白的表达和纯化及其诱导的免疫应答特征

目的:随着卡介苗的保护效应日趋减弱,以及结核分枝杆菌耐药株的广泛存在,全球尚缺乏控制结核病的有效疫苗,全球结核病发病率和病死率仍然较高。本研究旨在分析结核分枝杆菌抗原Rv2654重组蛋白在诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答中的作用,评价其作为抗结核病候选疫苗的潜力。方法:在细菌的对数生长期加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactoside,IPTG)诱导细菌表达Rv2654重组蛋白,用亲和层析纯化,蛋白质印迹法鉴定Rv2654重组蛋白。采用ELISA方法检测不同人群血清与Rv2654重组蛋白的免疫反应性。以Rv2654重组蛋白免疫昆明小鼠,采用细胞因子磁珠阵列法检测小鼠外周血Th1/Th2类细胞因子水平,并以流式细胞术分析小鼠脾T、B淋巴细胞亚群分布。结果:成功表达Rv2654重组蛋白,以Rv2654重组蛋白作为抗原的ELISA结果显示其与卡介苗接种者或活动期结核患者血清均有反应性。Rv2654重组蛋白免疫小鼠可促进小鼠外周血IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10等多种细胞因子表达(均P<0.05),流式细胞术结果显示Rv2654重组蛋白可显著刺激CD4+T细胞和CD8+T细胞分化为效应T细胞,这种作用在联合卡介苗应用时更为明显,Rv2654重组蛋白也能刺激小鼠B细胞活化增殖并向记忆细胞分化。结论:Rv2654重组蛋白可诱导小鼠的细胞免疫应答,而且与卡介苗接种者和活动性肺结核患者血清有较好的结合能力,有望作为结核病免疫学预防和诊断类疫苗的候选抗原。

基于血浆免疫及炎症相关蛋白的阿尔茨海默病筛查标志物的研究

目的·探索可作为阿尔茨海默病(AD)潜在筛查标志物的血浆免疫及炎症相关蛋白。方法·纳入对照组19例,AD组19例,收集血浆样本并检测70种免疫及炎症相关蛋白。运用Mann-Whitney U检验、偏相关分析筛选与AD强相关的免疫炎症蛋白。采用Wilks'lambda逐步分析法建立多蛋白联合判别算法,建立受试者工作特征(ROC)曲线评价判别算法的诊断效能。结果·70种蛋白中,23种在AD患者血浆中表达显著升高(P<0.05),其中19种与AD强相关(P<0.05)。用Wilks'lambda逐步分析法建立的多蛋白联合判别算法显示,由11种血浆免疫及炎症蛋白(EGF、GRO、MDC、MCP-1、MCP-2、MCP-4、TARC、SCF、TRAIL、CTACK、GCP-2)联合建立的判别方程具有最优的诊断效能(AUC=0.994),其最佳截断值为-0.609。取最佳截断值时,方程诊断敏感度可达100%,特异度可达94.7%。结论·由上述11种血浆免疫炎症相关蛋白组成的判别方程具有辅助AD筛查的潜力。