丹蒌片对同型半胱氨酸诱导的兔主动脉内皮细胞CHOP、BIP蛋白表达和凋亡的影响

目的:观察丹蒌片对同型半胱氨酸(HCY)诱导的兔主动脉内皮细胞凋亡及内质网应激相关蛋白C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)表达的影响。方法:以HCY诱导建立兔主动脉内皮细胞损伤模型,分别用瑞舒伐他汀(他汀)、丹蒌片含药血清或二者联合共同培养48 h后,Annexin V-PI法检测细胞凋亡率,Western blot法检测CHOP、BIP蛋白表达情况。以未诱导细胞作空白对照。结果:模型细胞凋亡率及BIP、CHOP蛋白表达水平均高于空白对照(P<0.05)。丹蒌片和他汀可明显降低模型细胞的凋亡率,二者具有协同作用(F丹蒌片=475.288,F他汀=235.248,F交互=121.377,P<0.05);丹蒌片可显著下调模型细胞BIP、CHOP蛋白的表达水平,与他汀无协同作用(F丹蒌片=7.017,8.147,P均<0.05;F交互=0.590,1.406,P均>0.05)。结论:丹蒌片可通过下调CHOP、BIP的表达抑制血管内皮细胞凋亡。

IGHG1对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)对急性髓系白血病(AML)细胞系THP-1细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养人AML THP-1细胞,分为对照(正常培养的THP-1细胞)、pcDNA3.1[转染IGHG1过表达(pcDNA3.1-IGHG1)阴性对照质粒的THP-1细胞]、pcDNA3.1-IGHG1(转染pcDNA3.1-IGHG1的THP-1细胞)、LY364947[转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)抑制剂LY36494720μmol/L处理THP-1细胞)]、si-NC[转染IGHG1小干扰RNA(IGHG1-siRNA)阴性对照的THP-1细胞]、si-IGHG1(转染IGHG1-siRNA的THP-1细胞)和si-IGHG1+LY364947(IGHG1-siRNA和LY364947共同处理THP-1细胞)共7组。荧光定量PCR法检测各组THP-1细胞中IGHG1和免疫球蛋白G(IgG)mRNA的表达;CCK-8法检测各组THP-1细胞增殖活力;流式细胞术检测各组THP-1细胞凋亡率和细胞周期变化;蛋白印迹法检测各组THP-1细胞增殖、凋亡及TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,过表达IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、IgG、TGF-β1、磷酸化Smad3(p-Smad3)/Smad3蛋白表达均显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达均显著降低(P<0.05)。抑制TGF-β/Smad信号通路或沉默IGHG1后THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05);且与沉默IGHG1相比,IGHG1基因沉默和TGF-β/Smad通路抑制共同处理的THP-1细胞中IGHG1和IgG mRNA表达、细胞增殖活力、S期的细胞比例、Cyclin D1、Bcl-2、IgG、TGF-β1、p-Smad3/Smad3蛋白表达均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G_(0)/G_(1)期的细胞比例、p21、Bax、Caspase-3蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:沉默IGHG1基因可下调IgG的表达,抑制人AML THP-1细胞增殖,阻滞细胞周期进程,并诱导细胞凋亡;其作用机制可能与抑制TGF-β/Smad通路的激活有关。

外源重组蛋白制备鹅免疫球蛋白轻链特异性多克隆抗体

采用RT-PCR方法扩增鹅免疫球蛋白轻链恒定区编码序列(GoIgCL),构建原核表达载体pET30a-IgCL,在RosettaTM(DE3)pLysS宿主菌中表达鹅免疫球蛋白轻链恒定区重组蛋白rGoCL,以纯化后rGoCL作为免疫原制备兔抗GoIgL多克隆抗体,对多抗进行鉴定分析。结果表明,rGoCL在大肠杆菌中获得可溶性表达,可代替天然分离的轻链作为免疫原制备轻链特异性抗体,多抗效价为1 204 800。研究为鹅免疫球蛋白的蛋白结构、功能分析以及鹅免疫诊断试剂研发奠定基础。

免疫结核球蛋白、血管内皮生长因子-C在肝癌组织中的表达及意义

目的检测免疫结核球蛋白（Bip）、血管内皮生长因子（VEGF）-C在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌生长中的作用机制。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测术中所取新鲜的42例肝癌标本、15例同个体癌旁1．0cm肝组织和15例正常肝组织中Bip、VEGF—C的mRNA表达，应用Westernblot方法验证57例肝癌组织和正常肝组织标本中Bip及VEGF．C在蛋白水平的表达。结果肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中BipmRNA相对表达量分别为0．4772±0．0401、0．4332±0．0488、0．4301±0．0398，BipmRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）。肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF．CmRNA相对表达量分别为0．4447±0．0335、0．4195±0．0334、0．4019±0．0259，VEGF—CmRNA在3组之间的表达呈下降趋势（P〈0．05）；实验对肝癌组织和正常肝组织中Bip和VEGF—C的蛋白表达进行定性验证：在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达，但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织。结论在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应（UPR）的激活。在肝癌组织中Bip、VEGF—CmRNA和蛋白的表达一致，均呈高表达。这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移密切相关。

α-细辛醚对食管癌Eca-109细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α-细辛醚调控内质网应激对食管癌Eca-109细胞增殖及凋亡的影响。方法实验分为空白组和低、中、高剂量实验组。空白组给予不含药物的RPMI-1640培养基进行培养;低、中、高剂量实验组分别给予含25,50和100 mg·L^(-1)α-细辛醚溶液的RPMI-1640培养基进行培养。用噻唑蓝法检测细胞增殖率,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、C/BEP环腺苷酸反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA的表达水平。结果低、高剂量实验组和空白组的细胞增殖能力(OD值)分别为0.78±0.14,0.50±0.09和0.92±0.12,BIP mRNA相对表达量分别为7.68±2.08,3.27±0.94和13.07±2.35,CHOP mRNA相对表达量分别为1.22±0.33,2.39±0.63和0.91±0.30,GRP78 mRNA相对表达量分别为2.11±0.59,5.86±1.47和0.84±0.31。低、高剂量实验组的上述指标与空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论α-细辛醚能通过调节内质网应激相关蛋白BIP、CHOP及GRP78表达,达到促进食管癌细胞凋亡、抑制增殖的作用。

内质网应激在Ⅰ型糖尿病小鼠骨质疏松发生中的作用及其机制

目的探讨内质网应激(ERS)在Ⅰ型糖尿病小鼠骨质疏松发病中的作用和意义方法选取8周龄雄性BALB/c小鼠20只随机分为瓯组,造模组(14只)毎大腹腔注射链豚佐菌素(STZ)60 mg/kg,正常对照组(6只)注射等体积的柠檬酸盐缓冲液,连续注射5 d,诱导建立Ⅰ型糖尿病小鼠模型。糖尿病造模成功2个月后处死动物.取新鲜股骨测量骨重骨长度,甲醛固定右侧股骨行micro-CT扫描和免疫组织化学(IHC)染色,左侧股骨及仅侧胫骨行蛋白印记Western blot或实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测内质网应激相关指标,如葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)或免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、C/EBP同源蛋白(CHOP)结果与对照组[(5. 9 ±1.6)、(6.3 ±1.2) mmol/L、( 1. 664 ± 0. 051)、( 1.692 ± 0. 042) cm、(4.8 ±0.5)个/mm、( 33 ± 1 )μm ]比较,实验组[(7 ±2. 9)、( 26. 7 ± 3. 2) mmol/L、( 1. 393 ± 0. 049)、( 1.416 ± 0. 038) cm .( 3. 1 ± 0. 7 )个/mm、(21 ±4)μm]的血糖、骨长度及micro-CT结果证实成功制备Ⅰ型糖尿病骨质疏松小鼠模型(P <0. 05)。免疫组织化学结果证实:糖尿病骨质疏松组的GRP78/Bip、CHOP阳性区域面积比值[(6.4±0.8)%、(7.1 ±0.6)%]相对于对照组[(4.1 ±0.7)%、(3.2 ±0.6)%]显著升高(P<0.05)。Western blot结果证实,GRP78/Bip、CHOP的表达量在糖尿病小鼠[0.73 ±0.11、0. 80±0.21]中相对于对照组[0.14 ±0.06、0.22 ±0.04]显著升高(P<0.05) Real-time PCR 结果证实,GRP78/Bip、CHOP的rnRNA相对表达量在糖尿病小鼠(2.17 ± 0.76,3.07 ± 0.45 )中显著高丁对照组(均设为1,P<0.05)。结论糖尿病骨质疏松组小鼠的骨组织及骨髓中内质网应激及由具介导的凋亡途径被激活,可能导致骨形成及骨破坏平衡被打破,在骨质疏松的发病过程中起了重要作用。