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A型塞内卡病毒VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 林铱婷 姬康 +8 位作者 谭姗姗 晋怡 宋若琪 马瑞一 王颖 牛胜 赵宇军 田文霞 任建乐 《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期96-102,共7页
为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物... 为制备A型塞内卡病毒(SVA)VP3蛋白多克隆抗体,采用同源重组技术将SVA VP3基因连接至原核表达载体pET-28a中,构建了重组表达质粒pET-SVA-VP3。将重组质粒转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),以1 mmol/L的IPTG进行诱导表达并纯化表达产物,随后将纯化的VP3重组蛋白皮下多点注射新西兰白兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot分别对抗体效价、反应性和特异性进行鉴定。结果显示:重组VP3蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约36 kDa;制备的VP3蛋白多克隆抗体能与VP3重组蛋白和SVA发生特异性反应,其ELISA效价达1:10000以上,Western blot和IFA效价达1:5000。综上,本研究成功制备了SVA VP3多克隆抗体,其具有较高的效价和特异性,可为后续SVA致病机制及检测方法等研究奠定基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 VP3蛋白 原核表达 多克隆抗体 效价 特异性
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猴痘病毒B20R蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 杨领弟 李小梅 +3 位作者 芦晓鸥 彭棋 孔令保 王宇 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期217-225,共9页
【目的】构建猴痘病毒B20R蛋白原核表达系统,并评价原核表达获得的融合蛋白免疫原性,为后续的猴痘病毒检测及新型治疗方法开发提供技术支撑。【方法】参照GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列,按照大肠杆菌密码子偏好性对B20R基因DNA序... 【目的】构建猴痘病毒B20R蛋白原核表达系统,并评价原核表达获得的融合蛋白免疫原性,为后续的猴痘病毒检测及新型治疗方法开发提供技术支撑。【方法】参照GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列,按照大肠杆菌密码子偏好性对B20R基因DNA序列进行优化,人工合成B20R基因并将其分别克隆至表达载体pET-28a和pET-32a以构建原核表达载体;以构建的2种原核表达载体分别转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经IPTG诱导表达后使用SDSPAGE和Western blotting检测融合蛋白B20R的表达情况。通过控制变量法优化融合蛋白B20R的诱导表达条件,使用Ni柱亲和层析进行纯化;以纯化的融合蛋白B20R经腹腔注射免疫昆明小鼠,定期采集昆明小鼠血样,采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】将B20R基因克隆至表达载体pET-32a能成功构建原核表达载体pET-32a-B20R,经IPTG诱导后,可在大肠杆菌BL21感受态细胞中表达出融合蛋白B20R,且主要以不可溶的包涵体形式进行表达。融合蛋白B20R最佳诱导表达条件为37℃下以0.6 mmol/L IPTG诱导12 h,Ni柱亲和层析纯化的最佳咪唑洗脱浓度为40 mmol/L。以纯化的融合蛋白B20R接种免疫昆明小鼠,可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫,且至免疫第42 d仍然维持较高的抗体水平,抗体效价高达1∶409600。【结论】构建的猴痘病毒B20R蛋白原核表达载体可在大肠杆菌BL21细胞中以包涵体形式成功表达出融合蛋白B20R,且融合蛋白B20R具有良好的免疫原性,可在短时间内引起昆明小鼠产生强烈的体液免疫。 展开更多
关键词 猴痘病毒 B20R蛋白 原核表达 免疫原性 抗体效价
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鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用
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作者 魏蔷 李青梅 +3 位作者 金前跃 宋亚鹏 白怡霖 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期128-135,共8页
为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iE... 为了制备针对鸡减蛋综合征病毒(EDSV)的中和性单克隆抗体,首先纯化得到重组EDSV纤维蛋白,经血凝试验(HA)鉴定纤维蛋白的血凝活性,HA效价为1∶2~7。之后将纤维蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,免疫4次后,小鼠血清的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)效价最高达到1∶409 600,间接免疫荧光试验(IFA)效价最高达到1∶12 800。取效价最高免疫小鼠脾细胞进行细胞融合制备杂交瘤细胞,结合iELISA和IFA检测,经过多轮亚克隆,最终成功获得了2株稳定分泌中和性单克隆抗体的杂交瘤细胞株9G12和10E11。iELISA结果显示,单克隆抗体9G12和10E11的腹水效价分别为1∶128 000和1∶1 020 000;IFA效价分别为1∶2 000和1∶8 000。Western blot检测结果显示,单克隆抗体9G12和10E11均不能识别变性的EDSV纤维蛋白,表明二者识别纤维蛋白的构象型表位。病毒中和试验结果表明,单克隆抗体9G12和10E11均具有中和活性,中和效价分别为1∶2~7和1∶2~4。亚型鉴定表明,这2种单克隆抗体的轻链均为Kappa型,重链均为IgG1亚型。将基于单克隆抗体9G12和10E11建立的双抗体夹心ELISA方法应用于临床检测EDSV抗原,与荧光定量PCR检测结果的符合率为91.7%。综上,成功筛选出9G12和10E11杂交瘤细胞株,二者分泌抗EDSV特异性抗体,且这2种抗体具有中和EDSV感染活性,可应用于EDSV的临床检测。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 纤维蛋白 中和性单克隆抗体 抗体中和效价 双抗体夹心ELISA
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Prokaryotic Expression and Immunogenicity of Dominant Epitope Region of Goose Parvovirus Structural Protein VP3
4
作者 Li Shuguang Cheng Likun +4 位作者 Li Feng Zhang Na Zhao Jialei Yang Lifang Shen Zhiqiang 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2018年第1期68-71,共4页
[Objective] The paper was to develop a subunit vaccine candidate for prevention and control of goose parvovirus infection. [Method]Based on the prokaryotic expression system, the antigenic epitopes and locations of th... [Objective] The paper was to develop a subunit vaccine candidate for prevention and control of goose parvovirus infection. [Method]Based on the prokaryotic expression system, the antigenic epitopes and locations of the structural protein VP3 were predicted by software analysis,and the region displaying a large portion of antigenic epitopes was amplified by PCR. The target VP3 DNA fragment was inserted into pET-30 a-VP3 vector, was transformed into Escherichia coli BL21 competent cells for protein expression and animal test. The SPF chickens were immunized with the recombinant protein and the antisera were collected for neutralization test by using a goose embryo fibroblast. [Result] The recombinant plasmid was constructed, and the target region of VP3 protein was expressed efficiently in a soluble form. The neutralizing titers of antisera could reach up to-2.608. [Conclusion] The target region displaying a large portion of antigenic epitopes of the structural protein VP3 could be expressed efficiently in soluble form, and the expressed protein could induce neutralizing antibodies in SFP chicken. 展开更多
关键词 Goose parvovirus Structural protein VP3 Dominant epitope region Neutralization titer
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重组新冠病毒S蛋白三聚体免疫原性研究
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作者 何倩 徐一艳 +2 位作者 许雁 刘滨磊 高卉 《湖北科技学院学报(医学版)》 2023年第1期26-29,共4页
目的检测重组新冠病毒S蛋白三聚体是否具有免疫原性。方法将不同剂量的重组新冠病毒S蛋白三聚体搭配同剂量铝盐+CpG1080混合佐剂制成候选疫苗,免疫C57BL/6小鼠。采用ELISA和ELISpot的方法,分别检测小鼠血清中抗S蛋白三聚体的IgG抗体水... 目的检测重组新冠病毒S蛋白三聚体是否具有免疫原性。方法将不同剂量的重组新冠病毒S蛋白三聚体搭配同剂量铝盐+CpG1080混合佐剂制成候选疫苗,免疫C57BL/6小鼠。采用ELISA和ELISpot的方法,分别检测小鼠血清中抗S蛋白三聚体的IgG抗体水平和脾细胞中分泌特异性IFN-γ的T细胞水平。结果在免疫后的小鼠血清中检测到了较高水平的抗S蛋白三聚体的IgG抗体滴度,同时在脾细胞中也检测到了分泌特异性IFN-γ的T细胞数量增加。结论重组新冠病毒S蛋白三聚体具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 重组新冠病毒S蛋白三聚体 免疫原性 抗体滴度
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脑脊液梅毒加热甲苯胺红试验滴度转阴的麻痹性痴呆患者预后的影响因素 被引量:1
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作者 张依 许东梅 《中国实用神经疾病杂志》 2023年第7期815-818,共4页
目的 分析脑脊液梅毒加热甲苯胺红试验(TRUST)滴度转阴的麻痹性痴呆患者预后的影响因素。方法 纳入38例脑脊液TRUST滴度经治疗后转阴的麻痹性痴呆患者,根据日常生活能力量表(ADL)和简易精神状态量表(MMSE)进行分组,比较2组患者的性别、... 目的 分析脑脊液梅毒加热甲苯胺红试验(TRUST)滴度转阴的麻痹性痴呆患者预后的影响因素。方法 纳入38例脑脊液TRUST滴度经治疗后转阴的麻痹性痴呆患者,根据日常生活能力量表(ADL)和简易精神状态量表(MMSE)进行分组,比较2组患者的性别、年龄、文化程度、脑脊液TRUST滴度转阴时的血清TRUST滴度、脑脊液白细胞计数和蛋白定量以及头颅磁共振情况,分析上述指标与患者预后有无相关性。结果 患者预后与年龄、性别相关性不大,而与其文化程度存在一定相关性,预后良好组文化程度较高。2组血清TRUST滴度比较,差异无统计学意义(P=0.506)。2组白细胞计数、蛋白比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。预后良好组头磁共振显示责任病灶的患者约占27.8%,预后不良组占40.0%,预后不良组高于预后良好组,但差异无统计学意义(P=0.833)。结论 麻痹性痴呆患者脑脊液TRUST滴度转阴并不代表预后良好,患者的预后还受文化程度、脑脊液白细胞计数、蛋白定量的影响。 展开更多
关键词 麻痹性痴呆 预后 TRUST滴度 白细胞计数 蛋白定量 脑脊液 血清
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基于近红外光谱法对蚓激酶干粉的快速测定
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作者 黄利欣 钟志坚 +4 位作者 邓攀 孙萍 肖志强 陈菲 刘旭海 《中国处方药》 2023年第8期42-45,共4页
目的 建立蚓激酶干粉水分、蛋白质和效价的快速测定方法。方法 将蚓激酶效价的琼脂糖-纤维蛋白平板法、测定水分的烘干法和测定蛋白质的凯氏定氮法测得的实验数据与近红外光谱结合化学计量学方法,建立快速定量分析模型,使用Micro NIR 1... 目的 建立蚓激酶干粉水分、蛋白质和效价的快速测定方法。方法 将蚓激酶效价的琼脂糖-纤维蛋白平板法、测定水分的烘干法和测定蛋白质的凯氏定氮法测得的实验数据与近红外光谱结合化学计量学方法,建立快速定量分析模型,使用Micro NIR 1700光谱仪收集908~1 650 nm范围内的蚓激酶干粉光谱,每个光谱的13.6 ms积分时间对应于100次扫描的累积。结果 偏最小二乘回归(PLS)定量模型结果为,干燥失重中含水量的校正决定系数(R_(c)^(2))、预测决定系数(R_(p)^(2))、校正均方根误差(RMSEC)和预测均方根误差(RMSEP)分别为0.924 0、0.917 3、0.121 3%、0.127 5%;蛋白质含量的R_(c)^(2)、R_(p)^(2)、RMSEC和RMSEP分别为0.961 5、0.955 3、0.002 0、0.002 2;效价的R_(c)^(2)、R_(p)^(2)、RMSEC和RMSEP分别为0.963 2、0.959 1、26.971 3 IU/mg、28.587 6 IU/mg。结论 本方法操作简单,准确度高,结果可信,近红外分析技术是一种快速测定蚓激酶干粉中效价、水分及蛋白质的潜在工具。 展开更多
关键词 近红外光谱法 蚓激酶干粉 效价 水分 蛋白质
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空降兵跳伞后热应激蛋白70抗体滴度分析 被引量:8
8
作者 邬堂春 陈胜 +6 位作者 海涛 肖成峰 王瑞波 熊朝东 熊一力 冷顺堂 刘培生 《劳动医学》 1998年第2期73-76,共4页
目的:探讨HSP70抗体滴度在评价跳伞对空降兵健康效应中的影响。方法:利用cDNA和pET载体系统纯化的HSP70,建立检测HSP70抗体滴度的酶联免疫吸附鉴定方法,并调查了40名近半年来未跳伞的对照组空降兵和42名... 目的:探讨HSP70抗体滴度在评价跳伞对空降兵健康效应中的影响。方法:利用cDNA和pET载体系统纯化的HSP70,建立检测HSP70抗体滴度的酶联免疫吸附鉴定方法,并调查了40名近半年来未跳伞的对照组空降兵和42名跳伞后的跳伞组空降兵血浆中HSP70抗体滴度。结果:对照组40人中有2人出现1∶10阳性,占5%,而跳伞组42人中4人出现1∶10阳性,占9.6%,其中2人1∶40阳性,占4.8%。 展开更多
关键词 空降兵 跳伞 热应激蛋白 抗体滴度 ELISA
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逆转录病毒表达系统及其在外源蛋白高效表达中的应用 被引量:7
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作者 许建 李世崇 陈昭烈 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期116-121,共6页
逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成,在基因治疗和生物制药领域有很大的应用潜力。逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区;口炎疱疹病毒-G蛋白(vesi... 逆转录病毒表达系统是一种新的重组蛋白高效表达系统,它由逆转录病毒载体,包膜蛋白载体和包装细胞系构成,在基因治疗和生物制药领域有很大的应用潜力。逆转录病毒和宿主细胞基因组的重组倾向于发生在转录活性区;口炎疱疹病毒-G蛋白(vesicular stomatitis virus G,VSV-G)能有效扩大逆转录病毒感染宿主细胞的范围、提高逆转录病毒的感染效率;用高滴度的重组病毒感染细胞,经过简单的筛选即可获得高表达细胞株。就逆转录病毒表达系统的组成、感染的特点和机制及其应用前景作了概述。 展开更多
关键词 逆转录病毒表达系统 口炎疱疹病毒-G蛋白 病毒滴度重组蛋白 高效表达
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新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:3
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作者 韦栋平 徐忠林 +1 位作者 张如宽 刘秀梵 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第4期3-8,共6页
用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+... 用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(lnET)的线性回归分析,获得了回归方程lnET=0.201×P/N+4.632。应用该ELISA方法对表达NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检测,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关。攻毒保护试验的结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白 抗体 间接ELISA 抗体效价 鸡痘病毒 栽体 基因工程疫苗
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腺病毒滴度不同测定方法比较 被引量:20
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作者 孙鹏宇 张艳玲 +6 位作者 荆玉明 张信基 张哲欢 黎诚耀 陈白虹 谭万龙 李红卫 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期234-238,共5页
目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CB... 目的将目前测定腺病毒滴度常用的OD260法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法、细胞病变(CPE)法进行比较研究,分析和讨论各种方法的优缺点。方法 4种重组腺病毒(Ad-G-AT2R-EGFP、Ad–CMV-EGFP、Ad-mif-shRNA-EGFP和Ad-CBA-GFP)扩增、纯化后,同时分别用OD260值法、荧光定量PCR法、绿色荧光蛋白标记法、壳蛋白免疫法及CPE法测定病毒滴度,并以壳蛋白免疫法测定结果作为标准,对各种方法所得结果进行比较研究。结果绿色荧光蛋白标记法、CPE法与壳蛋白免疫法同时测定4种腺病毒滴度,其结果无统计学差异(P>0.1)。荧光定量PCR法测定值明显高于壳蛋白免疫法(P<0.05),但与该法测定结果间存在良好的相关性(r=0.965),约为壳蛋白免疫法所测得结果的10倍。OD260法测得结果与壳蛋白免疫法测得结果间则无相关性。结论绿色荧光蛋白标记法与壳蛋白免疫法是测定腺病毒感染性滴度最为快速有效的方法,其结果客观可靠,能真实地反映病毒的实际感染力。荧光定量PCR法测定结果反映的是完整的病毒颗粒数,能够间接反映病毒的感染力,且该方法操作简单,耗时短,同样有较高的实用性。 展开更多
关键词 腺病毒 病毒滴度测定 壳蛋白免疫法 绿色荧光蛋白 荧光定量PCR 细胞病变法
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支原体抗体、CRP、ESR在诊断儿童重症支原体肺炎中的研究 被引量:11
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作者 徐雷 王冲 +3 位作者 李美香 孔令朋 李荣香 曲政海 《检验医学与临床》 CAS 2018年第17期2532-2535,共4页
目的探讨儿童重症支原体肺炎的表现特征和判断指标。方法收集青岛大学附属医院儿童医学中心2013年1―10月入院的107例确诊为社区获得性肺炎支原体肺炎(CA-MPP)患儿。根据临床症状分为支原体肺炎普通组和重症组。比较2组患儿的支原体抗... 目的探讨儿童重症支原体肺炎的表现特征和判断指标。方法收集青岛大学附属医院儿童医学中心2013年1―10月入院的107例确诊为社区获得性肺炎支原体肺炎(CA-MPP)患儿。根据临床症状分为支原体肺炎普通组和重症组。比较2组患儿的支原体抗体滴度、外周血白细胞(WBC)总数、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)等。结果重症组和普通组在病程的第7、10、14天血清支原体抗体滴度比较,差异无统计学意义(P>0.05),重症组与普通组的血清滴度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。重症组与普通组的急性期WBC、CRP升高率比较,差异无统计学意义(P>0.05),但ESR升高率比较差异有统计学意义(P<0.05)。肺炎支原体(MP)感染急性期重症组CRP及ESR水平明显高于普通组(P<0.05)。结论 CAMPP患儿病情程度与血清抗体水平无相关性。CA-MPP患儿急性期检测CRP、ESR可作为病情判断的指标,且CRP、ESR越升高,提示病情越严重。 展开更多
关键词 支原体抗体滴度 C反应蛋白 红细胞沉降率 儿童重症支原体肺炎
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利用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体 被引量:1
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作者 田曙光 高红伟 +2 位作者 李素波 章扬培 宫锋 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期460-462,共3页
目的:采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法:使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果:获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论:应用重组A蛋... 目的:采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法:使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果:获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论:应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。 展开更多
关键词 Α-半乳糖苷酶 单克隆抗体 重组A蛋白 琼脂糖凝胶 纯度 效价
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荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶抗血清的制备及抗体效价检测 被引量:1
14
作者 陆雪莹 李洁琼 +2 位作者 庄淑珍 刘小宁 马纪 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第5期659-664,共6页
目的几丁质酶是昆虫重要的防御物质,本研究采用DNA-蛋白质联合免疫策略制备荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶(MpCHI786)的抗血清,用于检测小胸鳖甲在外界不良条件下几丁质酶的变化。方法从小胸鳖甲成虫中提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增Mpchi786 ... 目的几丁质酶是昆虫重要的防御物质,本研究采用DNA-蛋白质联合免疫策略制备荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶(MpCHI786)的抗血清,用于检测小胸鳖甲在外界不良条件下几丁质酶的变化。方法从小胸鳖甲成虫中提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增Mpchi786 cDNA,构建原核表达载体pET30a-Mpchi786,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达获得融合蛋白His-MpCHI786。对融合蛋白切胶纯化后与弗氏佐剂混合作为抗原。另外,构建真核表达质粒pcDNA3.0-Mpchi786,对小鼠尾静脉高压注射,8 h后RT-PCR检测其在肝脏的瞬时表达。以pcDNA3.0-Mpchi786肌肉注射免疫小鼠3次后,再用His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次,DNA免疫和免疫结束后收集免疫小鼠的血清,ELISA和Western blot法检测抗血清效价和特异性。结果 RT-PCR结果显示尾静脉高压注射8 h后,pcDNA3.0-Mpchi786质粒在小鼠肝脏有特异性表达。Western blot检测表明,用His-MpCHI786融合蛋白作为抗原,pcDNA3.0-Mpchi786DNA质粒免疫3次的抗血清和His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次后的抗血清都显示了特异性反应条带。ELISA检测结果显示抗血清效价高达1∶204 800以上。结论利用DNA-蛋白质联合免疫法能够获得效价高、特异性的小胸鳖甲几丁质酶MpCHI786的抗血清。 展开更多
关键词 小胸鳖甲 几丁质酶 DNA-蛋白质联合免疫 抗血清 抗体效价
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嗜水气单胞菌3种疫苗免疫的青鱼外周血免疫指标的变化 被引量:14
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作者 张波 曾令兵 +3 位作者 罗晓松 高正勇 周勇 安伟 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期100-105,共6页
将福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、菌体外膜蛋白(OMP)和菌体脂多糖(LPS)作为免疫原,分别免疫健康青鱼。在免疫1、2、4、7、14、21、28d后进行外周血的血细胞计数和白细胞分类计数,测定细胞吞噬活性和抗体效价,结果... 将福尔马林灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、菌体外膜蛋白(OMP)和菌体脂多糖(LPS)作为免疫原,分别免疫健康青鱼。在免疫1、2、4、7、14、21、28d后进行外周血的血细胞计数和白细胞分类计数,测定细胞吞噬活性和抗体效价,结果表明:3种免疫原均可诱导红细胞和白细胞数量增加,并引起各种白细胞分类百分比变化,提高吞噬活性和抗体效价;免疫应答早期(第1周)主要是红细胞、单核细胞和中性粒细胞数量明显增加,吞噬细胞的吞噬活性迅速提高,吞噬百分比(PP)和吞噬指数(PI)第4天达峰值,F-AH组、OMP组和LPS组的PP、PI值依次分别为39.84%、46.53%、41.59%及3.94、4.26、3.77;随后则是淋巴细胞大量增殖,第21天淋巴细胞数量和抗体效价达峰值,F-AH组、OMP组和LPS组的抗体效价分别为1∶426.67、1∶341.33和1∶213.33。免疫28d后活菌攻毒的结果表明,OMP组的免疫保护率为75%;LPS组为67.8%,均明显优于F-AH组(50%)。可见3种免疫原均能通过促进青鱼血细胞增殖、提高吞噬细胞的吞噬活性、产生特异性抗体等方式增强机体的免疫保护力。 展开更多
关键词 青鱼 嗜水气单胞菌 外膜蛋白 脂多糖 凝集抗体效价 吞噬活性
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流式细胞术快速测定逆转录病毒滴度的研究 被引量:4
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作者 傅建新 白霞 +3 位作者 王玮 奚晓东 陈子兴 阮长耿 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 2002年第1期30-33,共4页
目的 建立一种快速测定逆转录病毒滴度的方法。方法 用通过乒乓转导获得的逆转录病毒 (G1FP ,LGSN ,CD87)分别感染NIH 3T3受体细胞 ,以流式细胞术 (FCM )定量分析受体细胞中绿色荧光蛋白 (EGFP)或CD87的表达 ,并与常规的耐药集落形成... 目的 建立一种快速测定逆转录病毒滴度的方法。方法 用通过乒乓转导获得的逆转录病毒 (G1FP ,LGSN ,CD87)分别感染NIH 3T3受体细胞 ,以流式细胞术 (FCM )定量分析受体细胞中绿色荧光蛋白 (EGFP)或CD87的表达 ,并与常规的耐药集落形成法进行比较。结果 PT6 7/G1FP细胞高度表达EGFP ,荧光强度较对照细胞提高 10 5 1倍 ;G1FP - 8,Am12 /G1FP ,PT6 7/G1FP ,Am12 /LGSN和Am12 /CD87细胞上清中病毒滴度分别为 2 .9× 10 6,1.1× 10 5,2 .0× 10 6,1.5× 10 5和 4.3× 10 5感染性颗粒 /ml,比集落形成法测得的滴度低 3~ 6倍。结论 FCM分析抗原表达是测定逆转录病毒滴度的有效方法 ,特别适宜于缺乏选择性基因的载体。 展开更多
关键词 基因治疗 临床实验载体 逆转录病毒滴度 分析 流式细胞术 绿色荧光蛋白 CD87抗原
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土霉素药渣去除残留效价的方法
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作者 闫正 任士明 刘炜 《粮食与饲料工业》 CAS 2015年第10期48-50,共3页
研究了将土霉素药渣作为饲料蛋白添加剂的方法,采用微波联合铁粉去除土霉素药渣中残留效价,确定了最佳的工艺条件:土霉素药渣与铁粉投加质量之比为10︰1、微波压力为100kPa、消解30min后土霉素药渣残留效价消除率达到93.20%,干基中粗蛋... 研究了将土霉素药渣作为饲料蛋白添加剂的方法,采用微波联合铁粉去除土霉素药渣中残留效价,确定了最佳的工艺条件:土霉素药渣与铁粉投加质量之比为10︰1、微波压力为100kPa、消解30min后土霉素药渣残留效价消除率达到93.20%,干基中粗蛋白质质量分数为37.53%。 展开更多
关键词 微波 铁粉 土霉素药渣 粗蛋白质 残留效价
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猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果研究
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作者 陆辉 朱善元 +2 位作者 左伟勇 洪伟鸣 吴双 《安徽农业科学》 CAS 2012年第3期1509-1510,1522,共3页
[目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN... [目的]探索猪α干扰素表达蛋白ab的抗病毒效果。[方法]通过测定猪α干扰素(PoIFN-α)表达的融合蛋白ab对接种水泡性口炎病毒(VSV)的牛肾细胞(MDBK)保护作用的效价,来研究其抗病毒效果。通过中和试验,测定保护50%细胞不产生病变所需PoIFN-α表达的融合蛋白ab的稀释度。[结果]PoIFN-α表达的融合蛋白ab具有显著的抗病毒作用,稀释度1∶4.9的2.0μg/ml ab蛋白溶液即可保护50%细胞不产生细胞病变。[结论]猪重组α干扰素具有高活性、纯度高、无毒副作用、无药物残留等特点,其研制与开发对猪生产实践和疾病防治具有重要意义。 展开更多
关键词 PoIFN-α 水泡性口炎病毒 牛肾细胞 融合蛋白ab 中和试验 效价
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自制与商业化抗人精液蛋白P_(30)金标试剂条的法医学应用比较 被引量:2
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作者 李兆隆 张英兰 +1 位作者 常彩琴 王俭 《刑事技术》 2004年第2期19-21,共3页
目的 检测比较自制和商业销售的抗人精液蛋白P30 金标试剂条 ,探讨它们法医学应用的可靠性。方法 以人精液和人前列腺特异蛋白检测效价及灵敏度 ,以人阴道分泌物、人血清、人唾液和人初乳检测特异性 ,以保存不同年限的陈旧人精斑和斑... 目的 检测比较自制和商业销售的抗人精液蛋白P30 金标试剂条 ,探讨它们法医学应用的可靠性。方法 以人精液和人前列腺特异蛋白检测效价及灵敏度 ,以人阴道分泌物、人血清、人唾液和人初乳检测特异性 ,以保存不同年限的陈旧人精斑和斑痕类检材测定检验实际检材的能力。结果 自制抗人精液蛋白P30 金标试剂条效价及灵敏度与商业销售的试剂条中较好的基本相当 ,特异性则相当或好于商业试剂条 ,对非特异性测定均为阴性 ,而商业化试剂条则多有非特异性反应。结论 使用商业金标试剂条 ,要确定其是否合乎法医学检验标准与要求。 展开更多
关键词 抗人精液蛋白P30 金标试剂条 法医学检测 灵敏度 特异性
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中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库的构建 被引量:2
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作者 孙莉 岳金金 +3 位作者 费东亮 李明 马鸣潇 宋铭忻 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期572-577,共6页
【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶... 【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶的作用下合成幼虫膜蛋白cDNA第1链,并合成双链cDNA。在双链cDNA的5′端加上带有重组序列的接头后,通过FullCoV技术与载体pPR3-N进行连接,然后将连接产物电转化到DH10B感受态细胞,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并对该文库插入片段大小和文库滴度进行检测。【结果】通过FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,经检测,中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库的总库容量为1.5×10^7 cfu,文库滴度为3×10^6 cfu/mL,重组率达到100%。【结论】本研究利用FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库,为进一步探究感染中华蜜蜂的病原微生物与宿主蛋白互作研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 cDNA 文库 滴度 酵母双杂交 FullCoV技术 蛋白质相互作用
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