脑立体定位斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维投射研究中的应用

目的 探讨脑立体定位斜插法靶向注射小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶的可行性,并观察该方法对小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维的神经投射。方法 利用脑立体定位直插法(进针方向与水平方向垂直)或斜插法(进针方向与水平方向的垂直线呈30°夹角)标记Pcp2-Cre小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶,对比两种手术方式对小鼠颈部上方肌肉组织的影响;选择梯度剂量(500、300、150 nL)的顺行示踪病毒,探索适宜的病毒注射剂量;通过斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶注射重组酶依赖性顺行示踪病毒,观察该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。结果 相较于脑立体定位直插法,斜插法中小鼠头部皮肤切口更小,且不易破坏小鼠颈部上方肌肉;在前囟后6.00 mm、中线旁开0.00 mm、深4.08 mm坐标处,采用斜插法能靶向定位到小脑蚓部第Ⅸ小叶;同时,150 nL低剂量的病毒可较好的标记小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞,且不发生泄漏;通过病毒顺行示踪,在小鼠小脑顶核中间部、前庭小脑核、前庭内侧核巨细胞部以及前庭下核均检测到来自第Ⅸ小叶浦肯野细胞的神经投射纤维。结论 脑立体定位斜插法能在一定程度上减轻手术对小鼠颈部上方肌肉的破坏,通过该方法注射顺行示踪病毒能精确靶向小脑蚓部第Ⅸ小叶,并观察到该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。

碳酸酐酶Ⅸ在肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAIX)的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法应用GEPIA数据库分析HCC组织及其配对肝组织中CAIX mRNA表达水平及其对HCC患者预后的影响;收集2021年1月至2023年12月河南中医药大学第一附属医院经病理诊断为HCC的肝脏穿刺及手术标本45例、癌旁正常肝组织37例,用免疫组化法检测标本中CAIX蛋白表达情况,并分析CAIX蛋白表达与HCC患者临床病理特征的关系。结果GEPIA数据库分析发现,HCC组织中CAIX mRNA表达水平明显高于正常肝组织(肿瘤369例,正常肝组织160例;t=8.532,P<0.001),CAIX mRNA高表达组HCC患者总生存期短于CAIX mRNA低表达组(Log-rank P=0.002)。HCC组织中CAIX蛋白阳性率55.56%(25/45),高于正常肝组织的0.00%(0/37)(χ^(2)=29.571,P<0.001)。CAIX蛋白表达与肿瘤分级、肿瘤大小、Ki-67表达、磷脂酰肌醇蛋白多糖-3表达有关(χ^(2)=4.549,P=0.033;χ^(2)=6.790,P=0.009;χ^(2)=4.664,P=0.031;χ^(2)=6.461,P=0.011)。结论CAⅨ蛋白在HCC组织中高表达,可能与HCC的进展及预后差有关,并有望成为潜在的诊断指标和治疗靶点。

凝血因子Ⅷ和凝血因子Ⅸ活性检测影响因素的分析

目的 验证离心力对凝血因子FⅧ(FⅧ)活性和凝血因子FⅨ(FⅨ)活性检测的影响。方法 用全自动血凝分析仪测定室温700 g、1500 g、396 g和4℃1000 g、1500 g离心15 min以及4℃2700 g离心10 min,不同离心力条件下即刻和冷冻后48 h FⅧ和FⅨ的活性并进行数据统计分析。结果 6种不同离心方法得到的血浆,不管是立即检测还是冻存后检测,FⅧ和FⅨ的活性水平在不同离心力条件下没有显著性差异(P>0.05),同一离心力条件下冷冻后FⅧ活性水平跟即刻检测结果有统计学差异(P<0.05),同一离心条件下FⅨ活性在即刻和冷冻后检测结果无统计学差异(P>0.05)。结论 从离心机类型、离心力转速到离心时间和离心温度多方面分析,在一定离心力范围内不同离心力对FⅧ活性和FⅨ活性检测的影响不大,冻融会影响凝血因子Ⅷ活性水平检测,凝血因子Ⅸ活性检测不受冻融影响。

3例糖原累积症Ⅸa型患儿护理体会

糖原累积症(glycogen storage diseases,GSD)是一类由于先天性酶缺乏所造成的糖原代谢障碍疾病,其特征是糖原分解中断和/或有害糖原积累。根据不同的缺陷酶及发现的年代顺序,糖原累积症分为15型[1]。其中,GSDⅨ型的患病率为十万分之一,约占所有类型GSD的25%[2],而GSDⅨa约占GSDⅨ总病例的75%。GSDⅨa型是由磷酸化酶b激酶(PhK)缺陷引起的,该缺陷会激活糖原磷酸化酶,在调节糖原向葡萄糖的转换中起关键作用[3]。转氨酶水平升高和肝肿大是GSDⅨa型最常见的临床表现[4]。

牙龈卟啉单胞菌第Ⅸ型分泌系统结构与功能研究进展

牙龈卟啉单胞菌第Ⅸ型分泌系统(type Ⅸ secretion system,T9SS)是一种最近被发现的新型蛋白分泌系统,它广泛分布于拟杆菌中。T9SS结构复杂、功能强大,目前已经得到验证的T9SS组分20余种,并且仅在牙龈卟啉单胞菌中即能分泌30余种毒力因子,对牙龈卟啉单胞菌的致病性意义重大。T9SS是一个横跨细胞内膜、细胞周质、细胞外膜的大型蛋白复合体,通过各组分之间结构和功能上的联系,组成了一个包括动力提供、能量转导、内外膜易位、外膜修饰及调节系统的精密功能复合体,对货物蛋白进行识别、转运、剪切、修饰,并将细菌胞内货物蛋白转运至细胞表面。近年来,随着X线衍射及原位冷冻电镜技术的发展,对T9SS的探究也从单一组分的功能研究发展至多蛋白复合体原位结构研究,但是目前对蛋白结构解析仍存在分辨率不高、无法捕捉动态功能结构等问题,未来研究方向应该更集中于探索T9SS如何与货物蛋白相互作用并发挥功能。本文对牙龈卟啉单胞菌T9SS在X线衍射及冷冻电镜结构解析上的研究进展做一综述,以便深入理解T9SS的转运机制。

胃癌组织中碳酸酐酶Ⅸ表达的临床意义及分子机制

目的探讨胃癌(GC)组织中碳酸酐酶(CAⅨ)的临床意义及其分子机制。方法采用基因表达谱动态数据分析(GEPIA2)数据库预测GC组织中CAⅨ基因的差异性表达,利用癌症数据分析(UALCAN)数据库分析CAⅨ表达与GC患者临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier Plotter分析CAⅨ对GC的预后价值;收集10例GC患者的癌患组织(GC组)及其癌旁组织标本(对照组),采用免疫组织化学法检测CAⅨ表达;采用交互式基因检索工具(STRING)和可视代综合发现(DAVID)数据库进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析预测CAⅨ的蛋白质互作关系及调控网络。结果GEPIA2数据库结果显示,与对照组比较,GC组CAⅨ的表达量降低(P<0.05);UALCAN数据库显示,CAⅨ的表达与种族、肿瘤分化等级、幽门螺杆菌感染有相关性(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库分析显示,低CAⅨ表达组与高CAⅨ表达组的5年无进展生存期(PFS)相比,差异有统计学意义(P<0.05);临床标本免疫组织化学结果显示,GC组标本中CAⅨ表达量较对照组降低(P<0.05),与数据库预测结果一致;STRING数据库分析显示,CAⅨ与缺氧诱导因子-1α(HIF1α)、溶质载体家族4成员4(SLC4A4)、芳烃受体核转位器(ARNT)等蛋白具有较强相互作用关系;GO分析显示,CAⅨ参与低氧反应下RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调节等过程;KEGG分析显示CAⅨ与癌症信号通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路的调节有关。结论CAⅨ在GC组织中呈低表达,其水平与GC患者肿瘤分化等级、PFS呈负相关,CAⅨ可能参与肿瘤代谢过程。

瓦里安Clinac Ⅸ医用直线加速器多叶准直器故障维修五例

放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段之一[1]。医用直线加速器则是精确放射治疗的必备大型医用设备[2]。瓦里安ClinacⅨ医用直线加速器的多叶准直器(multileaf collimator,MLC)系统主要包括工作台计算机、控制器组件、MLC头组件和马达驱动组件[3-6]。

人体血清中原卟啉Ⅸ自体荧光光谱研究

通过对人体血清样品和模拟人体生理条件下原卟啉Ⅸ和牛血清白蛋白混合溶液的荧光光谱测定和分析,表明人体血清中原卟啉Ⅸ的自体荧光光谱主要来自于原卟啉Ⅸ和血清白蛋白的结合形式。此外,还考察了血清白蛋白和原卟啉Ⅸ对原卟啉Ⅸ荧光发射峰的影响。和不含有白蛋白的原卟啉Ⅸ溶液相比较,白蛋白不但使原卟啉Ⅸ产生的荧光峰发生红移,而且具有很强的增敏效应。在白蛋白存在条件下,当原卟啉Ⅸ浓度值小于0.8×10-5mol·L-1时,随着它的浓度增加,原卟啉Ⅸ的荧光发射峰稍有红移;而当原卟啉Ⅸ浓度值大于0.8×10-5mol·L-1时,其荧光发射波长几乎不随原卟啉Ⅸ浓度而变化。

应用DNA测序技术检测血友病B患者FⅨ基因突变

为了研究3名中国汉族非亲缘系血友病B患者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变的类型,常规检测患者血浆APTT及FⅨ∶C,进行表型诊断;抽提患者外周血白细胞基因组DNA,应用PCR技术分8段扩增FⅨ基因外显子序列,用双脱氧终止法检测核酸序列。结果表明:与正常对照者相比,HB患者APTT测定值明显升高,FⅨ∶C测定值明显降低,PT测定值正常。测序结果显示3例HB患者均有相应的基因序列改变,患者1有外显子6G22119A点突变,患者2有外显子1G7932C点突变,患者3有外显子T32685C点突变。结论:3例HB患者均检测到相应的基因序列改变,这为HB患者基因缺陷的分子机制提供了证据。

A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药失效模式分析

为了探讨A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药的失效模式,通过扫描电镜、工业CT分别对低装药密度、中装药密度和高装药密度A-Ⅸ-Ⅱ炸药装药在高低温循环温度应力施加下的结构稳定性进行分析研究,并讨论了裂纹和"渗油"两种结构失稳模式。研究表明A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药的主要失效模式是药柱产生裂纹,"渗油"引起的结构失稳是否会导致装药失效还有待进一步研究。

应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。

椎动脉与Ⅸ～Ⅻ脑神经毗邻关系的解剖及其临床意义

目的观察椎动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经解剖特点及毗邻关系,探讨颈椎病与高血压的相关性。方法颅颈部标本15具,解剖剥离法,观察椎动脉颅内段、小脑下后动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经的关系;椎动脉颅内段与延髓的关系。并测量其数据。结果 (1)椎动脉自穿经硬脑膜处向前内侧斜行,在延髓侧方走行于Ⅸ~Ⅻ脑神经根丝的前方。左右侧椎动脉与Ⅺ,Ⅻ脑神经接触,与Ⅸ,Ⅹ脑神经不接触者分别为11例(11/15,占73.3%)和7例(7/15,占46.7%);(2)左右侧小脑下后动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经不接触者分别为5例(5/15,占33.3%)和1例;(3)左右侧椎动脉位于延髓腹外侧并与延髓相接触者分别为11例(11/15,占73.3%)和4例(4/15占26.7%),不接触者分别为4例(4/15占26.7%)和11例(11/15,占73.3%);相对于左侧,右侧椎动脉位置偏后。模拟颈部屈曲时椎动脉与延髓腹侧紧密接触,伸直时分离。结论椎动脉与Ⅺ,Ⅻ脑神经接触可能是高血压伴发枕后痛的形态学基础之一;小脑下后动脉走行迂曲,与Ⅸ~Ⅻ对脑神经根丝相互盘绕交叉,高血压搏动更易刺激脑神经根丝,出现相应症状。椎动脉和延髓密切接触极可能既产生颈部症状,又可能造成高血压。控制血压除了常规抗高血压药物,神经营养药物也可以用于治疗高血压。

药物诱导大鼠大肠癌组织原卟啉Ⅸ积聚的定量分析

目的定量分析不同药物诱导大肠癌大鼠大肠正常组织、早期癌和进展期癌组织原卟啉Ⅸ聚积特征。方法15只大鼠分成3组。A组:5-ALA尾静脉注射;B组:DFO腹腔注射半小时后给予5-ALA尾静脉注射;C组:相当量的生理盐水尾静脉注射。每组大鼠诱导4h采集标本。另20只大鼠按B组诱导方法分别在药物诱导2、4、6、8及10h采集标本。用高效液相色谱-荧光检测仪测定其原卟啉Ⅸ含量。结果大肠正常组织、早期大肠癌和进展期大肠癌组织原卟啉Ⅸ含量在A组分别为:(475.261±65.027)、(687.738±73.293)、(852.371±69.457)ng/mg;B组分别为:(496.194±63.539)、(853.194±81.937)、(1173.795±87.184)ng/mg;C组分别为:(347.375±57.413)、(479.375±59.274)、(593.173±37.461)ng/mg。癌变组织原卟啉IX的含量在用药4h最高;正常组织原卟啉IX的含量在用药2h最高,癌变组织与正常大肠组织原卟啉IX含量在用药后4h差异最大。结论5-ALA与DFO联合应用,显著提高5-ALA诱导癌组织原卟啉IX的积聚作用;用药后4～6h检测原卟啉IX含量最高。

声化学激活原卟啉Ⅸ杀伤艾氏腹水瘤细胞的分子机理

采用频率为2.2MHz、声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的损伤进行研究,并初步探讨其作用的生物学机制。分别用荧光分光光度法、激光共聚焦扫描显微镜分析原卟啉Ⅸ在肿瘤细胞内的积聚、定位情况;利用台盼蓝拒染法测定聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对细胞存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测细胞膜脂质过氧化水平的变化。通过研究发现,艾氏腹水瘤细胞对原卟啉Ⅸ有一定的选择性吸收和留作用,原卟啉Ⅸ主要定位于细胞的线粒体中;在超声结合原卟啉Ⅸ作用下,艾氏腹水瘤细胞的存活率明显下降;细胞的超微结构发生明显损伤;线粒体膜电位下降;ROS生成量显著增加;脂质过氧化水平显著增加。研究结果表明:超声激活原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞有着明显的协同杀伤效应,其间产生的活性氧自由基作用,降低线粒体膜电位,增加膜的脂质过氧化水平,可能是其损伤艾氏腹水瘤细胞的主要因素之一。

激光诱导荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ对胃癌生长状态的标示作用

用不同的生物治疗方式治疗人胃癌的裸鼠模型,通过测量治疗后的瘤体体积和检查病理组织学的变化,确定了各组胃癌组织中癌细胞的不同坏死程度。应用激光诱导自体荧光光谱系统测量不同坏死程度的胃癌组织的自体荧光光谱。结果发现,随肿瘤坏死程度的加重,自体荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ(Pp Ⅸ)的特征峰值降低,而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的特征峰未能提示该变化。表明Pp Ⅸ可以作为标识,灵敏地表征胃癌组织的生长状态。

小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除

目的：将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因定向敲除，为建立血友病Ｂ的转基因小鼠模型奠定基础；摸索建立ＥＳ细胞基因打靶技术体系。方法：将线性化的针对小鼠ｍＦⅨ基因组的基因打靶置换型载体（ｐＭＦⅨＤＥＬ）ＤＮＡ用电穿孔法转入小鼠ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，用ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交两种方法，鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况。结果：（１）从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了４个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ＥＳ细胞克隆；（２）观察到在ＥＳ细胞中，ｐＭＦⅨＤＥＬ载体ＤＮＡ与内源ｍＦⅨ基因发生同源重组的频率平均为１．６７×１０－６。结论：得到了４个ｍＦⅨ基因已被敲除的ＥＳ细胞克隆；建立了ＥＳ细胞基因打靶的技术体系。

我国脑血栓患者家系凝血因子Ⅸ基因SNP9的检测

目的 探讨凝血因子 基因在第六外显子 2 3384- 2 3387bp存在单核苷酸多态性 (SNP9)在我国北方人群脑血栓发病机制中的作用。方法 应用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性 (PCR- RFL P)的方法 ,检测 2 0例脑血栓患者和他们家系及 6 0例正常健康对照组凝血因子 第六外显子 2 3384- 2 3387bp多态性分布。结果 2 0例脑血栓患者和 40例他们的家系成员 ,在 Mn II酶切后 ,可见 30 7bp片断基因类型全部是 A。正常 6 0例健康对照组基因多态性基因型也显示为 A,而在阳性对照可见 A、G和 AG。结论 在这一等位基因位点脑血栓家系和正常人群基因多态性基因型均为 A型。这一位点基因对我国脑血栓患者的作用机制有待于进一步探讨。

人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价检测中影响因素的探讨

目的探讨人凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,优化检测条件。方法研究不同的Ca2+浓度对一期法检测凝血因子Ⅸ效价的影响,并分别考察磷酸三丁酯、聚山梨酯-80(S/D)以及硫酸鱼精蛋白中和肝素对检测的影响。结果 Ca2+浓度为0.012 5 mol/L时,检测结果最稳定,标准曲线的相关性(r2)为0.999±0.001,回收率为(99.2±1.789)%,5次重复试验的变异系数为1.80%;S/D对PCC样品中凝血因子Ⅸ效价检测的影响无统计学意义(P>0.1);PCC样品的肝素未中和时,稀释倍数的影响较大,中和后凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。结论优化了凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,最优Ca2+离子浓度为0.012 5 mol/L;S/D试剂无影响;硫酸鱼精蛋白中和肝素后,凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。

一种磺胺类碳酸酐酶Ⅸ抑制剂的合成

为发展一种适合18F标记用于CAⅨ检测的特异性PET探针,该文以对氨基苯磺酰胺和三嗪为主要原料,用乙二醇、2-氟乙醇、对甲基苯磺酰氯对三嗪环进行适当修饰,合成了可能具有高亲和力和选择性的CAⅨ抑制剂4-[4-(2-氟乙氧基)-6-(2-羟基乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-亚胺基]苯磺酰胺,用于前期生物学评价和探针放射化学合成的参比化合物,同时合成了用作18F标记的前体化合物4-(4,6-双[2-(4-甲基苯磺酰氧基)乙氧基]-1,3,5-三嗪-2-亚胺基)苯磺酰胺,这两个化合物的收率分别为27.6%和13.1%,可满足下一步放射化学标记的需要。上述工作为进一步发展CAⅨ特异性PET探针建立了基础。

批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物(英文)

目的 制备纯度较高 ,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ (FⅨ )复合物。方法 以人新鲜冰冻血浆为原料 ,采用SD病毒灭活工艺 ,经国产DEAE SepharoseFastFlow胶批式吸附和Ca3 (PO4) 2 吸附制备凝血因子Ⅸ复合物。结果 两步的活性收率分别为 ( 89.94± 1.31) % (n =7)、( 82 .2 7± 2 .18) % (n =6 ) ,制品的FⅨ∶C比活为 ( 16 .2 8± 2 .80 )IU/mg。FIX的量为 ( 12 6 .82±11.6 0 )IU/瓶 ( 2 0 0PE)。结论 本工艺实用性较高 ,可用于制备低成本 ,高质量的凝血因子Ⅸ复合物。