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Colloidal Gold Strip-NASBA Technique for Rapid Detection of Shigella 被引量:1
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作者 Ni Xiumei Wei Xiaotang Jiangyinghui 《International Journal of Technology Management》 2014年第9期121-123,共3页
关键词 快速检测 志贺氏菌 胶体金 NASBA 试纸条 技术 痢疾杆菌 检测系统
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Colloidal Gold Test Strip for the Detection of Fluoroquinolones in Foods Using an Analyzer
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作者 Fangfang JIA Yuping WAN +5 位作者 Linchen WANG Xiping WANG Zhaoqin WANG Fangyang HE Haifeng CUI Jing LI 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2019年第2期172-176,共5页
A test strip was developed to rapidly detect fluoroquinolones in foods by colloidal gold immunochromatography method in combination with a food safety analyzer. The results showed that the test strip has the detection... A test strip was developed to rapidly detect fluoroquinolones in foods by colloidal gold immunochromatography method in combination with a food safety analyzer. The results showed that the test strip has the detection sensitivity of 20 μg/L for enrofloxacin, sarafloxacin, difloxacin, ofloxacin, norfloxacin, ciprofloxacin, pefloxacin, flumequine and danofloxacin, and the detection sensitivity of 40 μg/L for enoxacin and oxolinic acid. The test strip consumes only 10 min for detection, and the false positive rate and the false negative rate are both zero. The test strip can accurately, reliably and easily detect residual fluoroquinolones in foods, and is suitable for on-site detection of a large number of samples. 展开更多
关键词 FLUOROQUINOLONES colloidal gold strip Food safety ANALYZER Rapid DETECTION
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基于不同抗原的犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金抗体试纸条的制备和比较
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作者 郭晓涵 焉鑫 +11 位作者 邵卫星 殷德辉 闫昊 南文龙 樊晓旭 孙世雄 张培培 孙翔翔 刘蒙达 张皓博 孙淑芳 孙明军 《中国动物检疫》 CAS 2024年第5期90-95,共6页
为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,... 为建立针对犬布鲁氏菌病的免疫层析胶体金快速检测方法,利用从犬种布鲁氏菌菌株提纯的膜蛋白和可溶性蛋白,原核表达纯化的外膜蛋白Omp31和BP26以及基于B细胞抗原肽的融合蛋白F14,分别制备了试纸条,然后采用犬布鲁氏菌病阳性和阴性血清,分别对上述试纸条进行敏感性和特异性比较。结果显示:Omp31抗原的敏感性最高,其次是F14和BP26,而全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白的敏感性较差;特异性上,使用由5种抗原制备的胶体金试纸条检测30份犬布鲁氏菌病阴性血清,结果均为阴性;5种试纸条与沙门氏菌、大肠杆菌(O157)、大肠杆菌(H7)、霍乱弧菌、副溶血弧菌、军团菌阳性血清均不发生交叉反应。另外,由F14和BP26制备的试纸条可识别羊布鲁氏菌病阳性血清,而由Omp31、全菌膜蛋白和全菌可溶性蛋白制备的试纸条均不能识别牛、羊布鲁氏菌病阳性血清。综上所述,Omp31、F14和BP26可作为制备犬布鲁氏菌病免疫层析胶体金检测卡的备选抗原。本研究为粗糙型布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病的诊断提供了技术支撑。 展开更多
关键词 犬布鲁氏菌病 犬种布鲁氏菌 外膜蛋白 免疫层析胶体金检测卡
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基于重组酶聚合酶扩增技术的牛源性成分快速检测方法
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作者 王晓雪 纪艺 +5 位作者 余卉茹 徐俊锋 彭城 汪小福 李玥莹 陈笑芸 《生物技术进展》 2024年第2期278-286,共9页
市场中肉类食品掺假的复杂多样化使得监管机构对动物源性成分鉴定的便捷性、准确性、灵敏性要求越来越高。尤其是市场上经济价值较高的牛肉类产品已成为制假的重灾区,迫切需要建立一种快速、高效的牛源性成分分子检测方法。基于此,以牛... 市场中肉类食品掺假的复杂多样化使得监管机构对动物源性成分鉴定的便捷性、准确性、灵敏性要求越来越高。尤其是市场上经济价值较高的牛肉类产品已成为制假的重灾区,迫切需要建立一种快速、高效的牛源性成分分子检测方法。基于此,以牛组成型表达基因β-actin为靶基因设计并筛选了几组牛特异性扩增的引物和探针组合,经过灵敏度检测和特异性验证,建立了一种牛源性成分实时荧光重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)快速检测方法。通过优化试剂配比,提高了一步法提取牛肉制品DNA的效率,同时将PRA技术与胶体金免疫试纸条显色技术相结合实现了检测的便捷化和结果的可视化。实际应用结果表明,研究建立的牛源性RPA检测方法能够特异性地检测牛源性成分,且最低检测灵敏度可达到14.8个拷贝,通过胶体金免疫试纸条得到的可视化结果的准确性和灵敏度与实时荧光RPA相同。该方法特异性强、灵敏度高,整个过程在25 min内即可完成,极大缩短了检测时间。 展开更多
关键词 牛源性成分 重组酶聚合酶扩增技术 胶体金免疫试纸条
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胶体金免疫层析试纸条在生物毒素检测领域的研究进展
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作者 闫海兴 袁子钦 +5 位作者 袁嘉康 李梦迪 张超伟 侯洁 覃婷 王自良 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第5期134-140,共7页
胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗... 胶体金免疫层析试纸条是一种常用的检测方法,广泛应用于疾病诊断、生物毒素检测等领域。该技术基于胶体金标记的特异性抗原(抗体)与待检样品中的目标分子相互作用,在试纸条上形成可见的测试线或信号变化。其流程包括样品预处理、标记抗体制备、试纸条组装步骤。胶体金免疫层析试纸条可以用于快速检测食品中的毒素残留、环境中的有害物质以及临床诊断中的相关指标。该技术具有无创、快速、灵敏和准确的特点,在临床应急检测和大规模筛查中能快速获得结果。文章总结了胶体金免疫层析试纸条技术及其在生物毒素检测中的研究进展,并分析了当前胶体金免疫层析试纸条技术的优缺点,展望了该技术在生物毒素检测领域的未来发展方向。 展开更多
关键词 胶体金免疫层析试纸条 生物毒素 快速检测 灵敏 准确
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有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立
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作者 李洋洋 崔琳 +2 位作者 张宇彤 郑佳慧 艾金霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期428-434,共7页
目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试... 目的建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原;制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记;优化试纸条工作参数,并进行性能测试。结果抗血清效价在1∶32~1∶64之间,蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量(M r)25000和55000处出现目的条带,纯度较好;试纸条反应时间在5~10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好,试纸条有效期为6个月。结论建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法,适合大量样本的现场初筛。 展开更多
关键词 乙酰胆碱酯酶 多克隆抗体 有机磷农药 胶体金试纸条 免疫层析法
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猪轮状病毒胶体金检测试纸条的研制及应用
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作者 李妍花 周兵强 +11 位作者 康笃利 郝丽影 汪志艳 赵少若 黄甜 庞杏豪 刘俊阳 楚园园 张云静 高晓静 邓均华 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1223-1231,共9页
【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测... 【目的】利用2株猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)单克隆抗体,研制胶体金检测试纸条,用于PoRV的临床快速检测。【方法】制备40 nm粒径的胶体金溶液标记单克隆抗体4G5,将单克隆抗体5G4和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线。通过优化胶体金溶液最适pH、标记抗体和检测抗体的最佳使用量,制备PoRV胶体金检测试纸条;对试纸条的灵敏度、敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评价。通过检测50份猪粪便样品,计算试纸条与RT-PCR方法的符合率,最后采用试纸条进行1249份临床样品的测定。【结果】经优化后试纸条的最佳参数如下:胶体金溶液最佳pH为8.0,标记抗体4G5和检测抗体5G4最佳使用量分别为14.4μg/mL和1 mg/mL。试纸条能检测出1∶2000稀释的PoRV OSU株(G5型)病毒液,灵敏度为104.5TCID50/mL,且检测PoRV G9、G3和G4型毒株均为阳性。检测猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)、猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)均为阴性。批内和批间重复性、稳定性良好。检测50份猪粪便样品,与RT-PCR方法的阳性符合率为97.5%(39/40),阴性符合率为100%(10/10),总体符合率为98%(49/50)。检测2022年在河南、山西省猪场收集的临床样品1249份,阳性检出率为5.2%。【结论】本研究制备的PoRV胶体金检测试纸条具有良好的敏感性、特异性和重复性等优点,与RT-PCR方法的符合率较高,可用于规模化猪场PoRV的快速检测。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) 胶体金检测试纸条 快速检测
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恙虫病东方体混合重组抗原应用于胶体金免疫层析试纸条的制备及效价检测
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作者 赵芷若 周东明 +6 位作者 操敏 陶清源 蔡旭燊 燕书豪 高豹 吕恒 谭伟龙 《生物加工过程》 CAS 2024年第2期196-203,共8页
胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙... 胶体金免疫层析试纸条具有携带方便、操作简单且敏感性、特异性高等特点,近年来开始广泛应用于疾病的诊断。为了实现对恙虫病的快速检测,笔者利用双抗原夹心法,以胶体金标记恙虫病东方体56 kDa混合重组蛋白,56 kDa混合重组蛋白和兔抗恙虫病东方体多克隆抗体分别喷在检测线及质控线上,制备了用于检测恙虫病东方体抗体的胶体金免疫层析试纸条。本研究制备的胶体金试纸条检测限为61 ng/mL,和疟疾、伤寒、血吸虫、出血热以及斑点热等阳性血清无交叉反应,特异性达90%(54/60),检测的敏感性为91.96%(103/112),在4℃下可稳定保存6个月。本试纸条能够应用于人体血清中恙虫病东方体总抗体的检测。 展开更多
关键词 恙虫病东方体 胶体金 混合重组蛋白 快速检测试纸条
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黄曲霉毒素B_(1)胶体金免疫层析试纸条的制备及性能研究
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作者 董高丽 江迎春 +4 位作者 胡鹏 郭宁 杨爽爽 樊海亮 刘闯军 《山东化工》 CAS 2024年第8期29-31,38,共4页
以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤... 以黄曲霉毒素B_(1)为研究对象,制作出一种可实现对黄曲霉毒素B_(1)含量快速检测的胶体金试纸条。实验采用竞争抑制法,基于试纸条的层析作用,以胶体金为标记物与黄曲霉毒素B_(1)单抗偶联,将黄曲霉毒素B_(1)抗原和羊抗鼠二抗固定到硝酸纤维膜上作为检测线和质控线,制备出可以快速检测黄曲霉毒素B_(1)的免疫层析试纸条。通过优化,试纸条在37℃条件下,分别在5,10,15,20 d后测试,效果没有明显降低,检测灵敏度为20 ng/mL;与磺胺类药物、“瘦肉精”类药物均无交叉反应。该试纸条具有良好的稳定性和特异性,可实现生物样本中黄曲霉毒素B_(1)的快速大量检测。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B_(1) 胶体金 试纸条 抗体 快速检测
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Electrochemical Metalloimmunoassay Based on Enlargement of Gold Nanoparticle Label Treated with Ag Enhancement System 被引量:1
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作者 WANGMei-jia YUANHang +8 位作者 JIXiao-hui LIUZhao-yue JIARuo-kun WANGLian-ying LIUYan-mei MALan LIJing-hong BAIYu-bai LITie-jin 《Chemical Research in Chinese Universities》 SCIE CAS CSCD 2003年第4期413-416,共4页
A novel sensitive electrochemical immunoassay with colloidal gold as the antibody labeling tag and subsequent signal amplification by silver enhancement is described. Colloidal gold was treated by a light-sensitive si... A novel sensitive electrochemical immunoassay with colloidal gold as the antibody labeling tag and subsequent signal amplification by silver enhancement is described. Colloidal gold was treated by a light-sensitive silver enhancement system which made silver deposit on the surface of colloidal gold(form Au/Ag core-shell structure), followed by the release of the metallic silver atoms anchored on the antibody by oxidative dissolution of them in an acidic solution and the indirect determination of the dissolved Ag + ions by anodic stripping voltammetry(ASV) at a carbon fiber microelectrode. The electrochemical signal is directly proportional to the amount of analyte(goat IgG) in the standard or a sample. The method was evaluated by means of a noncompetitive heterogeneous immunoassay of immunoglobulin G(IgG) with a concentration as low as 0.2 ng/mL. The high performance of the method is related to the sensitive ASV determination of silver(Ⅰ) at a carbon fiber microelectrode and to the release of a large number of Ag + ions from each silver shell anchored on the analyte(goat IgG). 展开更多
关键词 colloidal gold Silver enhancement Anodic stripping voltammetry(ASV)
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鸭多杀性巴氏杆菌抗体检测胶体金试纸条的研制及应用 被引量:3
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 傅光华 江南松 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期65-69,共5页
为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示... 为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示,仅鸭抗多杀性巴氏杆菌血清检测为阳性,阴性血清、鸭抗大肠埃希氏菌、鸭抗鸭疫里默氏菌、鸭抗沙门氏菌和鸭抗金黄色葡萄球菌血清的检测结果均为阴性,表明D-CGTS的特异性良好。敏感性试验结果显示,对效价1∶16(琼脂扩散试验)的鸭抗多杀性巴氏杆菌血清1∶320倍稀释后采用制备的试纸条检测结果仍为阳性,表明D-CGTS的敏感性较高。重复性试验结果显示,同批次的不同试纸条和不同批次的试纸条,检测阴性血清和鸭抗多杀性巴氏杆菌血清的结果相同,表明D-CGTS的重复性好。对92份鸭血清采用D-CGTS和ELISA进行检测,结果显示,阳性符合率为94.03%,阴性符合率为100%,总符合率为95.65%。结果表明,制备的D-CGTS操作简单,具有较强的特异性、较高的敏感性和较好的重复性,适合在兽医临床推广应用。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 荚膜
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检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用 被引量:1
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 江南松 傅光华 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期374-378,共5页
为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结... 为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示,胶体金标记兔抗鸡IgG的最佳pH为8.5,最佳标记浓度为7μg/mL;rPlpB和羊抗兔IgG抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/mL。利用该方法检测SPF鸡血清,鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清,结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性,其他均为阴性,表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测,结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性,表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时,同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异,表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测,结果显示,二者阳性符合率为91.5%,阴性符合率为100%,总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采用该方法能够检出抗体阳性,免疫后21 d,所有鸡均检出抗体阳性。本研究首次基于rPlpB建立了检测鸡血清Pm抗体的CGTS方法,该方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,适合在基层推广,为评价禽霍乱疫苗的免疫效果提供了可行技术。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 重组脂蛋白B
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qPCR和胶体金试纸条方法检测猫疱疹病毒感染的比较 被引量:1
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作者 张君 李嘉林 +6 位作者 雷若萱 姚铭沁 莫韻怡 刘裕珊 邹俊 戴志亮 叶存栋 《现代畜牧科技》 2023年第3期91-93,共3页
本研究比较猫疱疹病毒(FHV-1)2种检测方法荧光探针qPCR和胶体金试纸在检测FHV-1时各自的优劣,并以PCR扩增FHV-1特异基因Glycoprotein B序列并测序的方法作为参比方法。采集107份疑似FHV-1感染样本,分别用3种方法进行检测,qPCR方法采用... 本研究比较猫疱疹病毒(FHV-1)2种检测方法荧光探针qPCR和胶体金试纸在检测FHV-1时各自的优劣,并以PCR扩增FHV-1特异基因Glycoprotein B序列并测序的方法作为参比方法。采集107份疑似FHV-1感染样本,分别用3种方法进行检测,qPCR方法采用的是冻干型PCR-荧光探针法,胶体金试纸方法采用的是市场成熟产品,参比方法测序结果与GeneBank数据进行比对,确认样本是否为FHV-1。qPCR检出89例FHV-1阳性,18例FHV-1阴性,胶体金试纸条检出51例FHV-1阳性,56例FHV-1阴性,参比方法检出89例阳性,且基因序列比对确认为FHV-1。通过对比实验结果的分析,qPCR方法灵敏度为100%,胶体金试纸条方法灵敏度为57.3%,qPCR检测灵敏度明显优于胶体金试纸。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒 qPCR 胶体金试纸 测序
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牛病毒性腹泻病毒抗原胶体金快速检测试纸条的研制 被引量:2
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作者 卜庆龙 左之才 +6 位作者 才冬杰 叶刚 田斌 李伟强 苟丽萍 王娅 邓俊良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1253-1257,共5页
为建立一种快速准确且便携的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,本研究将制备的BVDV单克隆抗体(MAb)作为检测线(T线),以纯化的免源多克隆抗体作为金标蛋白,以羊抗兔IgG-HRP作为质控线(C线),组装成双抗体夹心胶体金层析试纸条,并优化各... 为建立一种快速准确且便携的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,本研究将制备的BVDV单克隆抗体(MAb)作为检测线(T线),以纯化的免源多克隆抗体作为金标蛋白,以羊抗兔IgG-HRP作为质控线(C线),组装成双抗体夹心胶体金层析试纸条,并优化各反应条件。结果显示,最适金标蛋白标记量为30μg/mL,BVDV MAb和羊抗兔IgG-HRP最佳浓度均为0.5 mg/mL。利用猪瘟病毒(CSFV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛丘疹性口炎病毒(BPSV)及BVDV临床分离株评估该试纸条的特异性,结果显示,除阳性对照和BVDV临床分离株检测为阳性外,其余病毒均为阴性,表明该试纸条的特异性较强,无交叉反应。将BVDV-NADL株(10^(6.6)ELD_(50)/mL)10倍倍比稀释后,利用该试纸条检测,结果显示其最低检出量为10^(4.6)ELD_(50)/mL。利用同一批次和不同批次制备的试纸条对CSFV、IBRV、BPSV、BVDV临床分离株检测,结果显示检测结果均一致,表明该试纸条的重复性良好。将制备的试纸条应用于检测临床采集的68份牛血清样品,并以RT-PCR方法同时检测,结果显示胶体金试纸条对BVDV的阳性检出率为17.5%(12/68),RT-PCR对BVDV的阳性检出率为26.5%(18/68),两者之间的总符合率为88.24%。本研究于国内首次采用双抗体夹心方式制备了检测BVDV的胶体金免疫层析试纸条,该方法方便快捷,特异性及敏感性均较好,适宜于牛场BVDV的快速筛选,为进一步研制BVDV胶体金检测试剂盒提供了实验依据。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 双抗体夹心 胶体金层析技术 检测 试纸条
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牛赤羽病胶体金抗体检测试纸条的研制 被引量:2
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作者 孔玉方 陈冬杰 +4 位作者 王慧煜 景宏丽 许晓琳 魏方 吴绍强 《饲料研究》 CAS 北大核心 2023年第4期123-125,共3页
研究旨在制备一种现场快速筛查牛赤羽病的免疫层析试纸条。通过胶体金标记赤羽病病毒N蛋白,将兔抗牛IgG和兔抗N蛋白多克隆抗体分别喷涂于NC膜上作为检测线(T)和质控线(C)。结果显示,牛赤羽病毒阳性抗体血清稀释度为1∶512时,检测线仍显... 研究旨在制备一种现场快速筛查牛赤羽病的免疫层析试纸条。通过胶体金标记赤羽病病毒N蛋白,将兔抗牛IgG和兔抗N蛋白多克隆抗体分别喷涂于NC膜上作为检测线(T)和质控线(C)。结果显示,牛赤羽病毒阳性抗体血清稀释度为1∶512时,检测线仍显色;且与牛病毒性腹泻病毒、牛结核病、布鲁氏菌病、牛巴氏杆菌病、地方流行性牛白血病毒和蓝舌病毒的阳性血清均无交叉反应;使用试纸条和商品化ELISA试剂盒同时检测40份田间牛血清样品的结果符合率为92.6%。研究表明,试纸条适用于基层养殖户对牛赤羽病的筛查。 展开更多
关键词 赤羽病 胶体金 试纸条
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鸭坦布苏病毒E蛋白Domain Ⅲ单克隆抗体胶体金试纸条的创制及应用 被引量:1
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作者 阚莹 张淼 +8 位作者 卢奇 吕炫 于胜祖 王习强 姜雅倩 王蓓 朱英奇 王晴 王桂军 《中国动物检疫》 CAS 2023年第2期131-138,共8页
为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进... 为建立一种快速诊断鸭坦布苏病毒(DTMUV)的方法,以2株(B9D7B8G10和B9D10C7株)抗DTMUV的单克隆抗体制备DTMUV胶体金免疫层析试纸条。采用经典的柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液,利用rProtein G琼脂糖凝胶亲和层析法对两株单克隆抗体腹水进行纯化并鉴定;以纯化的B9D7B8G10株单克隆抗体作为标记抗体,通过调节单克隆抗体浓度与pH确定胶体金探针最佳结合条件;同时,在硝酸纤维素膜(NC膜)检测带包被纯化的B9D10C7株单克隆抗体,质控带包被山羊抗小鼠IgG抗体,建立检测DTMUV胶体金免疫层析试纸条;成功建立试纸条后,对试纸条敏感性、特异性、重复性和稳定性进行检测,并与RT-PCR检测方法进行比较,对200份临床疑似感染样品进行检测。结果显示:制备的胶体金试纸条在15 min内即可完成检测,最低检测稀释度为1:50,且不与鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅星状病毒、禽白血病病毒发生交叉反应;应用试纸条和RT-PCR方法分别对200份临床疑似样品进行检测,两者符合率达98%。结果表明,制备的胶体金试纸条敏感性高、特异性强、稳定性好、重复性好,为DTMUV的快速检测提供了一种实用检测技术。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 胶体金 单克隆抗体 免疫层析试纸条
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胶体金免疫层析试纸定量检测猪肉中沙丁胺醇的研究 被引量:1
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作者 宋春美 崔梦杰 +1 位作者 刘金鑫 王德国 《许昌学院学报》 CAS 2023年第5期82-85,共4页
通过便携式免疫层析读条仪,建立猪肉中沙丁胺醇的胶体金免疫层析试纸定量检测方法.沙丁胺醇试纸的定量检测限为5 ng/mL,定量检测范围为5~250 ng/mL,试纸与两种β_(2)-受体激动剂无交叉,添加回收试验的平均回收率为105.76%,对三个不同超... 通过便携式免疫层析读条仪,建立猪肉中沙丁胺醇的胶体金免疫层析试纸定量检测方法.沙丁胺醇试纸的定量检测限为5 ng/mL,定量检测范围为5~250 ng/mL,试纸与两种β_(2)-受体激动剂无交叉,添加回收试验的平均回收率为105.76%,对三个不同超市的猪肉样品进行了检测.该法方法灵敏度高、特异性好、精密度和准确性高,而且方便快捷. 展开更多
关键词 沙丁胺醇 胶体金试纸 定量检测 便携式免疫层析读条仪
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呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条快速检测方法的建立和评价 被引量:2
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作者 姜菲菲 宋伶俐 +3 位作者 潘蓓珍 王岳峰 李昊宇 孙丽媛 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期222-230,共9页
目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行... 目的:采用聚合酶链式反应(PCR)技术和胶体金技术建立一种呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条检测方法,并对其检测效果进行评价。方法:根据GenBank数据库选择真菌内转录间隔区(ITS)基因片段作为靶基因,应用DNAMAN软件对真菌ITS基因片段进行分析,并分别在真菌通用引物5'端用生物素(Biotin)和异硫氰酸荧光素(FITC)进行修饰标记;建立PCR体系,进行体系的最佳条件优化;确定胶体金免疫层析试纸条标记链霉亲和素的最佳标记量和质控线及检测线最佳包被物浓度,组装核酸胶体金试纸条,对试纸条的特异度、灵敏度、重复性和稳定性进行验证。结果:水煮法提取白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌DNA,浓度为180μg·L^(-1)以上,纯度为1.60~2.10;在pH 7.0条件下,每100μL胶体金溶液中制备胶体金标记链霉亲和素最佳标记量为3.3μg,质控线包被Biotin化牛血清白蛋白(BSA-Biotin)浓度为2.00 g·L^(-1),检测线包被抗FITC抗体浓度为1.00 g·L^(-1)。核酸试纸条的特异度与电泳结果一致,仅白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌出现阳性结果,与金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌和大肠埃希菌等常见呼吸道感染细菌无交叉反应。灵敏度检测,白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌的DNA浓度分别为10-4、10-2和10-3 mg·L^(-1)时核酸试纸条仍可准确检出,而普通PCR电泳结果显示白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌最低检测浓度分别为0.01、1.00和0.10 mg·L^(-1);重复性检测,在不同实验室不同操作人员对核酸试纸条进行验证,结果一致,重复性良好;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测,结果符合预期,稳定性良好。结论:本研究建立的呼吸道真菌感染核酸胶体金试纸条可以检测白假丝酵母菌、新生隐球菌和毛霉菌等真菌,特异度和灵敏度均较高,操作简便且快速。 展开更多
关键词 呼吸道感染 真菌 胶体金 核酸试纸条
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基于胶体金侧向层析原理的大米中痕量镉现场快速检测方法
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作者 王冉冉 姚丽 +2 位作者 姚帮本 陈伟 陈赵然 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第8期60-65,88,共7页
目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 n... 目的:建立一种可实现对大米中镉元素现场快速检测的胶体金试纸条检测方法。方法:基于侧向免疫层析技术,对胶体金试纸条一系列影响检测性能的参数进行系统优化。结果:所制备的胶体金试纸条对大米中镉元素的检测达到了可视化检测限为10 ng/g的水平。在实际应用中,此方法样品前处理过程操作简单,低浓度酸直接提取并稀释后即可用于试纸条检测。结论:胶体金试纸条快速检测方法适用于大米镉的现场快速筛检。 展开更多
关键词 大米 现场快速检测 胶体金试纸条 可视化检测 低浓度酸
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应用于RPA nfo反应产物结果可视化的胶体金试纸条制备与评价
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作者 杨晨 薛俊欣 +5 位作者 林雅娟 王小妹 蒋蔚 张曼玉 王权 孙卫东 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第12期41-49,共9页
旨在利用6-羧基荧光素(6-FAM)与6-FAM单克隆抗体、生物素与链霉亲和素之间的特异性结合,制备可用于nfo酶切割探针的重组酶聚合酶(RPA)反应产物结果可视化的胶体金侧向免疫层析试纸条(GICS)。通过杂交瘤法和诱生腹水法制备了高亲和力的6-... 旨在利用6-羧基荧光素(6-FAM)与6-FAM单克隆抗体、生物素与链霉亲和素之间的特异性结合,制备可用于nfo酶切割探针的重组酶聚合酶(RPA)反应产物结果可视化的胶体金侧向免疫层析试纸条(GICS)。通过杂交瘤法和诱生腹水法制备了高亲和力的6-FAM单克隆抗体(亲和力常数为5.38×10~9 L/mol),再运用高浓度NaCl破坏试验,确定了胶体金与6-FAM抗体的最佳标记pH值为8.0,最佳抗体标记量为12μg/mL,并使用模拟样本确定了最佳检测(T)线包被缓冲液为0.2 mol/L(pH值5.0)。然后使用RPA nfo反应产物作为实际样本,观察条带的深浅,最终确定在层析液为0.1 mol/L PB(pH值7.4)、T线包被1 mg/mL SA、反应液用量5μL及金标抗体用量10μL条件下,能实现试纸条最佳检测性能。自主研发的胶体金侧向免疫层析试纸条在加样5 min后能出现清晰的条带,与目前商品化试纸条的可视化判定结果一致,能替代现有的商品化试纸条,降低检测成本、缩短检测时间,对建立RPA nfo-GICS及RPA-CRISPR Cas12a-GICS检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 6-FAM单克隆抗体 生物素-链霉亲和素系统 RPA nfo 胶体金侧向免疫层析试纸条
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