psm-mec与硝酸镓在生物被膜人葡萄球菌快速诊断与治疗中的临床应用意义研究

目的:拟通过对人葡萄球菌中psm-mec基因与生物被膜(Biofilm, BF)相关性的研究,评估其作为BF标志物的可行性,同时研究硝酸镓(Gallium Nitrate, GaN)的抑菌与抑BF能力,为临床人葡萄球菌感染的诊断与治疗提供新的思路。方法:收集临床人葡萄球菌共85株;通过聚合酶链式反应(PCR)扩增psm-mec基因,采用96孔板染色法筛查BF阳性株,分析比较两者的相关性;采用肉汤稀释法检测GaN的最低抑菌浓度(MIC),比较不同浓度GaN对不同生长时期BF阳性株的抑制作用。结果:32.94%(28/85)的菌株检出psm-mec基因,55.29%(47/85)的菌株BF阳性,携带与未携带psm-mec基因的菌株形成BF的比率分别为82.14%(23/28)和42.10%(24/57),两者差异显著(P<0.05);GaN的MIC50与MIC90分别为312.5μmol/L与625.0μmol/L;312.5μmol/L的浓度对4 h与14 h生长期的抑制率分别为(55.33±6.25)%与(32.11±5.24)%,625.0μmol/L的浓度对4 h与14 h生长期的抑制率分别为(88.21±2.55)%与(51.32±5.69)%。结论:人葡萄球菌中psm-mec基因与生物被膜能力密切相关,GaN是一种有效的抑菌与抑生物被膜物质。

SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的基因定位

目的了解SCCmec相关的psm-mec基因在血液来源人葡萄球菌中的基因定位特征,为深入研究psm-mec基因在人葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床血培养分离的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA基因和psm-mec基因,多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,PCR扩增mecR1/psm-mec基因与psm-mec/xylR基因间隔序列及fudoh基因,探究psm-mec基因在SCCmec上的定位特点。结果 PCR检测显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,psm-mec基因的检出率为47.6%,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌,未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,10株psm-mec基因阳性菌株中,2株属典型SCCmecⅢ型,5株属类SCCmecⅢ型,3株属SCCmec新型别。基因间隔序列和fudoh基因检测显示,10株psm-mec基因阳性人葡萄球菌中,mecR1/psm-mec基因和psm-mec/xylR基因及fudoh基因均阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec基因广泛存在于血液来源的人葡萄球菌中,主要分布在典型SCCmecⅢ型、类SCCmecⅢ型和SCCmec新型别上,定位于mecR1基因与xylR基因之间。

临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌的SCCmec型别分析

目的探讨临床分离携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的SCCmec型别。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定MRSE,扩增psm-mec、fudoh和p221片段鉴定携带psm-mec菌株。采用多重PCR对携带psm-mec基因的MRSE的mec、ccr和SCCmec进行分型。结果 138株MRSE菌株中,29株携带psm-mec基因,携带率为17.58%。多重PCR对mec和ccr分型结果显示,携带psm-mec基因MRSE均为Class A mec,但ccr型别存在明显的多样性。多重PCR对SCCmec分型结果显示,所有菌株均可扩增出Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec条带,且为混合型别。结论临床分离携带psm-mec基因的MRSE的SCCmec具有同源性,以含Class A mec的携带Ⅱ型和/或Ⅲ型SCCmec为主。

携带psm-mec基因的耐甲氧西林表皮葡萄球菌产细菌生物膜的能力研究

目的探讨耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)携带psm-mec基因的情况及产细菌生物膜(biofilm,Bf)的能力,为进一步分析psm-mec与Bf的关系奠定基础。方法收集临床分离并经全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和MRSE,常规PCR检测psm-mec基因确定携带psm-mec菌株,PCR扩增fudoh基因及测序检测psm-mec上游有无基因突变,96孔培养板半定量法评估菌株产Bf的能力。结果 84株表皮葡萄球菌中esp基因均阳性,mecA基因阳性64株,故MRSE为64株(76.2%)。MRSE中psm-mec基因的携带率为39.1%(25/64)。Bf半定量检测发现,25株psm-mec阳性MRSE中产Bf 20株(80%),39株psm-mec阴性MRSE中产Bf13株(33.33%),差异有统计学意义(χ2=13.28,P<0.05)。fudoh基因序列分析发现,20株产Bf且携带psm-mec的MRSE均未发现基因突变,另有3株不产Bf的psm-mec阳性MRSE在psm-mec上游存在点突变(G>A)。结论 psm-mec广泛存在于临床分离的MRSE中,绝大部分携带psm-mec的MRSE具有Bf形成能力。

psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和表达

目的探讨psm-mec基因在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和表达,为进一步分析psm-mec的功能奠定基础。方法收集临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌165株,通过PCR扩增esp和mecA基因准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌（MSSE）和甲氧西林耐药表皮葡萄球菌（MRSE）。扩增psm-mec、fudoh和p221片段确认psm-mec携带菌株,通过DNA序列比对分析psm-mec及其上游序列的变化。构建p221重组质粒制备定量检测psm-mec的标准品,提取携带psm-mec MRSE总RNA,采用荧光定量RT-PCR分析临床分离MRSE psm-mec转录水平。结果 83.64%的临床分离表皮葡萄球菌为MRSE,其中29株携带psmmec基因,携带率为17.58%,且仅分布于MRSE中。所有菌株psm-mec开放读码框序列无突变,仅4.34%菌株在psm-mec基因上游存在G〉A的点突变。临床分离携带psm-mec菌株均表达此基因,其表达水平在103~107拷贝之间,G〉A点突变不影响psm-mec转录表达。结论 psm-mec仅分布和表达于临床分离MRSE中,G〉A点突变不影响psm-mec表达。

SCCmec相关psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和特征分析

目的分析SCCmec相关的psm-mec在临床分离表皮葡萄球菌中的分布和特征,为深入了解其在表皮葡萄球菌中的功能奠定基础。方法收集临床分离并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌84株,PCR扩增esp和mec A基因区分耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE),PCR扩增psm-mec和fudoh基因确定携带psm-mec菌株,分析其在不同标本来源MRSE的分布,同时扩增mecR1/psm-mec与psm-mec/xylR基因间隔序列,探讨psm-mec与mecR1,xylR基因的连接关系。结果 PCR扩增结果显示,临床分离表皮葡萄球菌中,MRSE为64株,占76.19%。psm-mec和fudoh扩增结果显示,psm-mec基因阳性MRSE为25株,携带率为39.0%(25/64),且主要分布于血液和痰液来源MRSE。20株甲氧西林敏感表皮葡萄球菌均未检出psm-mec基因。基因间隔序列扩增结果显示,25株携带psm-mec菌株的mecR1/psm-mec均阳性,16株psm-mec/xylR阳性。结论 SCCmec相关的psm-mec广泛分布于MRSE中,psm-mec均与SCCmec基因盒上mecR1基因相连,64%菌株与xylR连接。

携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌的耐药谱研究

目的比较携带与未携带psm-mec基因耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的耐药谱,为治疗MRSE引起的感染提供理论依据。方法收集临床分离并经过全自动微生物奠定系统准确鉴定的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,S.epidermidis)165株,通过PCR扩增esp和mec A基因,准确鉴定和区分甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)和MRSE。扩增psm-mec,fudoh和p221片段确认携带psm-mec基因的MRSE菌株,比较分析携带与未携带psm-mec基因MRSE的耐药谱。结果83.64%的临床分离S.epidermidis为MRSE,其中29株携带psm-mec基因,携带率为17.58%,且仅分布于MRSE中。临床分离MRSE易对苯唑西林、青霉素、红霉素、复方新诺明和克林霉素耐药,未发现对利奈唑胺、呋喃妥因、普丁/达福、万古霉素和替加环素耐药菌株。携带psm-mec基因MRSE对环丙沙星、庆大霉素、利福平和复方新诺明的耐药率明显高于未携带psm-mec基因MRSE。结论携带psm-mec基因MRSE易对苯唑西林、青霉素、红霉素、克林霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平和复方新诺明耐药。

金黄色葡萄球菌sasX、psm-mec、pvl三种毒力基因的检测与分析

目的分析54株金黄色葡萄球菌的mecA基因与sasX、psm—mec．pvl三种毒力基因分布及临床相关性。方法收集2013年1～5月南京医科大学第一附属医院临床分离的54株金黄色葡萄球菌，用PCR及测序的方法分析mecA、sasX、psm-mec、pvl基因的携带情况，并结合患者的临床资料，探讨其临床相关性。结果54株金黄色葡萄球菌中有23株mecA基因检测阳性，31株mecA基因阴性。mecA基因阳性菌株较mecA基因阴性株体外药敏试验呈多重耐药表型。sasX基因阳性1株，阳性率为1．9％；psm-mec基因阳性10株，阳性率为18．5％；pvl基因阳性38株，阳性率为70．4％。mecA基因阳性菌株psm—mec基因阳性率显著高于mecA基因阴性菌株（P〈0．01），pvl基因阳性率显著低于mecA基因阴性菌株（P〈0．05）。mecA基因和psm-mec基因与临床感染严重程度显著相关（P均〈0．01）。结论联合检测mecA、psm—mec和pvl基因有利于金黄色葡萄球菌感染的诊断、治疗和预后综合评估。

血液来源携带psm-mec基因人葡萄球菌SCCmec型别分析与生物被膜能力的研究

目的研究血液来源携带psm-mec基因人葡萄球菌SCCmec型别和psm-mec基因与生物被膜的相关性,为其临床感染的防治提供依据。方法收集临床血液来源经全自动微生物鉴定仪确认的人葡萄球菌。通过PCR扩增mecA基因区分耐甲氧西林人葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus hominis,MRSHo)和甲氧西林敏感人葡萄球菌(methicillin-susceptive Staphylococcus hominis,MSSHo)。体外粘附实验(Microtite Plate Assay,TCP)检测生物被膜。PCR扩增psm-mec基因并测序,分析其与生物被膜的相关性。PCR扩增psm-mec与mecR1及xylR基因的间隔序列和对psm-mec基因阳性菌株做SCCmec、mec和ccr型别检测,探究其在SCCmec上的定位与分布特征。结果共收集菌株55株,其中46株检出mecA基因为MRSHo,18株携带psm-mec基因,35株产生物被膜。携带与未携带psm-mec基因的菌株形成生物被膜的比率分别为83.33%和54.1%,二者差异显著(P=0.03)。DNA测序显示,3株psm-mec阳性生物被膜阴性的菌株中,2株于psm-mec编码区上游-12处发现G>A的点突变。所有psm-mec与mecR1及xylR的基因间隔序列阳性。携带psm-mec基因菌株分为,2株SCCmecⅢ型,7株Ⅲ型的变异型,9株SCCmec新型别;所有菌株均为Class A类mec;6株为ccr type 1,1株为ccr type 1+2,2株为ccr type 1+3,2株为ccr type 3,7株未扩增出ccr。结论在血液来源人葡萄球菌中,psm-mec基因与生物被膜存在相关性,其定位于mecR1与xylR两个基因之间,主要分布于SCCmecⅢ型、Ⅲ型变异型和新型别中,ccr基因存在高度变异,是造成SCCmec多态性的原因。

SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布

目的探讨SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布,了解人葡萄球菌的分子特征。方法收集血培养阳性并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA和psm-mec基因,采用多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,分析psm-mec在人葡萄球菌中的分布。结果 PCR扩增结果显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌;耐甲氧西林人葡萄球菌psm-mec基因的检出率为47.6%,甲氧西林敏感人葡萄球菌中未检出psm-mec基因。多重PCR结果显示,21株mecA阳性人葡萄球菌中,3株属SCCmec类I型,1株属SCCmecⅢA型,1株属SCCmecⅢB型,4株属SCCmec类IIIA型,1株属SCCmec类IIIB型,3株属SCCmec类Ⅳ,8株属SCCmec新型别。在psm-mec阳性菌株中,1株分布于SCCmecⅢA,1株分布于SCCmecⅢB,4株分布于SCCmec类IIIA,1株分布于SCCmec类IIIB,3株分布于SCCmec新型别。结论 SCCmec相关的psm-mec广泛存在于血液来源的耐甲氧西林人葡萄球菌中,主要分布于SCCmecⅢ型、类III型和SCCmec新型别。

耐甲氧西林表皮葡萄球菌 psm-mec 缺失突变株的构建

目的：构建耐甲氧西林表皮葡萄球菌（ MRSE）的psm-mec缺失突变株，并对psm-mec的功能进行初步研究。方法运用药敏试验、DNA序列分析技术筛选psm-mec上下游序列与S．epi-dermidis标准菌株RP62A完全一致且四环素和氯霉素敏感的MRSE。利用融合PCR和温度敏感性穿梭质粒构建同源重组质粒pBT2-Δpsm-mec，经鉴定后电转金黄色葡萄球菌RN4220进行修饰，提取质粒后电转用于构建缺失突变的临床分离MRSE，经同源重组后筛选和鉴定psm-mec缺失突变株。分析缺失突变株与野生株生物被膜形成能力的差异，验证psm-mec与MRSE生物被膜的关系。结果通过序列比对和药敏试验筛选和鉴定了3株用于构建psm-mec缺失突变的临床分离MRSE。通过同源重组，筛选和鉴定获得psm-mec缺失突变株。与相应的野生株比较，3株缺失突变株生物被膜形成能力明显降低，提示psm-mec可诱导MRSE生物被膜形成。结论成功获得耐甲氧西林表皮葡萄球菌psm-mec缺失突变株，psm-mec与表皮葡萄球菌生物被膜形成相关。