变异链球菌磷酸转移酶系统ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响

目的研究变异链球菌(S.mutans)磷酸转移酶系统(PTS)中抗坏血酸家族ptxA、ptxB基因对细菌生长能力的影响。方法构建ptxA、ptxB和ptxAB双重基因缺陷菌株以及ptxAB功能补偿菌株。在仅以抗坏血酸作为唯一碳源时,使用实时荧光定量聚合酶链反应检测野生株中ptxA、ptxB基因的表达情况。连续监测野生株、缺陷株和补偿株的菌液OD600值,比较其生长能力。结果经过聚合酶链反应和测序鉴定,结果证明缺陷株和补偿株构建成功。在以抗坏血酸作为唯一碳源的培养基中,野生株ptxA、ptxB基因的表达量均明显增高(P<0.01)。缺陷株的生长能力较野生株有所下降,但是在补偿株中可以得到补偿。结论 ptxA、ptxB基因与S.mutans对抗坏血酸的吸收利用密切相关,缺陷株和补偿株的构建为进一步研究目的基因在S.mutans抗坏血酸代谢中的作用机制提供了理论基础。

PCR检测兔支气管败血波氏杆菌方法的建立及应用

为建立准确、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)的PCR方法,根据Gen Bank中波氏杆菌ptxA基因设计1对特异性引物,用建立的PCR方法扩增兔波氏杆菌,可扩增出870 bp的目的片段。该方法特异性好,仅对波氏杆菌有特异性的扩增,而对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌等病原菌的扩增结果呈阴性;敏感性较高,最低检测限可达6.8×10^(-7)μg/m L;用建立的PCR方法检测临床疑似感染支气管败血波氏杆菌病兔的脏器及鼻拭子样品,可扩增出目的条带,且与细菌分离的结果一致。可见,建立的检测方法敏感、特异,可用于临床上兔波氏杆菌病的快速诊断及鉴定。