公共引物介导的多重定量PCR技术在转基因大豆检测中的应用研究

目的建立公共引物介导的多重定量PCR法检测我国农业农村部允许进口的6种转基因大豆(包括:MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705、MON87708)的方法。方法设计并筛选出针对本研究涉及的6种转基因大豆对特异性引物,在每对特异性引物的5’端均加上一段公共引物,形成特异性嵌合引物。以某种转基因大豆DNA为模板,加入多引物体系以及荧光公共引物验证GeXP(geneexpression platform)多重检测体系的特异性,每种转基因大豆DNA模板浓度分别稀释为20、2、1、0.2、0.02ng/μL,运用GeXP多重PCR方法进行单一DNA模板灵敏度分析并优化各对特异性嵌合引物的工作浓度。结果多重PCR检测体系扩增出特异性片段,GeXP检出的各转基因大豆片段长度MON87701、DP356043、CV-127、MON87769、MON87705和MON87708分别为140.75、184.42、274.93、308.47、467.98和517.67 bp, GeXP多重检测体系检测敏感性可达到为1 ng/μL,扩增产物测序结果进一步说明了引物扩增的特异性。结论本研究建立的基于GeXP系统的多重PCR定量检测技术,可以准确鉴别6种转基因大豆,为转基因大豆及其他转基因产品提供了新型的检测方法。