云南木蠹象蛹室在云南松树内的分布

云南木蠹象是我国西南地区新发现的云南松的一种重要蛀干害虫。云南木蠹象蛹室在被害云南松树木上的分布规律,反映了该虫幼虫和蛹在树木上的危害与分布。研究表明,云南木蠹象蛹室主要分布在云南松树木主干的中上部,其蛹室数量占主干蛹室量的76 99%;同时,云南木蠹象蛹室集中于树木主干,主干上的蛹室数占全树蛹室数的70 26%。云南木蠹象蛹室在轮枝上的分布多集中在中上部轮枝,即第1～3轮轮枝。在这些轮枝上的蛹室数目是所有轮枝蛹室数目的87 69%。从生长年龄而言,蛹室主要分布在1～2年生的主干和侧枝上。

家蝇蛹抗菌肽对肿瘤细胞膜破坏作用

目的观察4种肿瘤细胞在家蝇蛹抗菌肽作用下细胞表面的变化,探讨抗菌肽杀伤肿瘤细胞的机制。方法用针刺对家蝇幼虫感染大肠埃希菌,诱导其产生抗菌肽,然后至蛹期提取该抗菌肽并作用于4种肿瘤细胞(人髓样白血病细胞株K562;人淋巴瘤细胞株Daudi;人食管癌细胞株Eca109;人膀胱癌细胞株T24)。36 h后用扫描电镜观察其细胞表面变化。结果4种肿瘤细胞表面出现大小不等的创伤,且大部分创伤为孔洞型。

蓖麻蚕蛹卵巢细胞的离体培养及其病毒感染试验

本文采用不同的培养液在体外培养蓖麻蚕蛹卵巢细胞,比较观察细胞生长,发现这些细胞能连续传代。开始细胞生长相当慢,13代以后,生长加快,趋于稳定。并且发现这些细胞对蓖麻蚕核型多角体病毒十分敏感。

人促红细胞生成素基因在家蚕体中的高效表达

人促红细胞生成素(EPO)是一种调控红系干细胞增殖、分化和成熟的糖蛋白激素。将合成的EPOcDNA插入杆状病毒转移载体pBlueBacⅢ,使其置于Ph基因强启动子控制之下,获得了转移载体pBlueBacEPO。将pBlueBacEPODNA与野生型BmNPVDNA共转染BmN细胞,经空斑纯化,获插入EPOcDNA的重组病毒rBmNPVEPO。经Sonthern杂交和PCR扩增鉴定证明人EPO基因已正确组建于BmNPV的预定位置。将重组病毒rBmNPVEPO穿刺接种5龄幼虫和蛹,收集感染第3～5d的幼虫血淋巴和3～65d蛹血淋巴。用ELISA检测幼虫血淋巴中EPO表达量高达62800u/mL,蛹血淋巴中表达量达74000u/mL。Westernblot结果显示幼虫血淋巴和蛹血淋巴均有一条明显的免疫杂交带,分子量均约为26kD。用TF1细胞对幼虫表达产物进行了生物活性测定,每毫升血淋巴中EPO活性约为63000u。

家蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞MGC-803的增殖抑制活性鉴定

以不同蛋白酶酶解制备家蚕蛹蛋白酶解产物（SPPHs）,采用MTT比色法检测其对人胃腺癌细胞MGC-803的增殖抑制活性。不同蛋白酶酶解制备SPPHs对MGC-803的增殖抑制作用存在显著差异（P〈0.05）,其中家蚕蛹蛋白以Alcalase 2.4L酶解的产物（AH）对MGC-803的增殖抑制活性最高,当AH的质量浓度为0.25 mg/m L时,水解度（DH）=25%的AH的抑制活性最高,对MGC-803细胞的增殖抑制率可达到92.74%。Alcalase2.4L酶解家蚕蛹蛋白产物的分子质量也显著影响其对MGC-803细胞的增殖抑制活性,其中分子质量〈5 k D组分的抑制率高达91.13%,将该组分经葡聚糖（G-25）凝胶层析后分离出4个组分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）,组分Ⅱ对MGC-803细胞的增殖抑制率最高（27.5%）,但与未分离样品相比,抑制效率显著降低,而其他3个分离组分则无抑制作用。研究结果提示,蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的体外增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能是由多种组分协同完成。

蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响

手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著抑制小鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),抑制率达到50.08%±10.12%;荧光定量PCR检测小鼠成纤维细胞中的细胞生长因子TGF-β1和VEGF编码基因的表达极显著下调(P<0.01),并且这种抑制作用呈现明显的剂量效应。据此初步认为,蚕蛹羧甲基壳聚糖可有效控制成纤维细胞中关键的自分泌生长因子编码基因的表达,进而抑制机体的细胞增殖与生长以及炎症反应和血管增生,预防术后组织粘连。

蓖麻蚕蛹卵巢细胞株的建立及其对核型多角体病毒敏感性的研究

用蓖麻蚕（Ｐｈｉｌｏｓａｍｉａｃｙｎｔｈｉａｒｉｃｉｎｉ）雌蛹卵巢组织进行离体细胞培养，建立了细胞株，命名为ＷＶＢ－Ｐｃｒ－０２．在建株过程中，原代培养一个月左右，就开始传代，细胞生长稳定，分裂比值为１∶２，每４～５ｄ传代一次．细胞主要为贴壁的圆形细胞，其次是梭形细胞．细胞群体倍增时间为６０～６４ｈ．观察细胞染色体，其二倍体蚕的染色体为５６条，建株后染色体数为１００～１１０条，与其他蚕细胞类似．用同源蓖麻蚕核形多角体病毒感染后，观察了细胞病理变化及病毒在蓖麻蚕细胞中的复制．细胞感染率可达９０％以上，多角体产量为２．４×１０７ＰＩＢ·Ｌ－１．

柞蚕免疫蛹粉在刺参健康养殖中的应用研究

体外诱导方法制备含有抗菌活性物质的柞蚕蛹粉,并将其以不同比例(0%、1.0%、2.0%)添加到刺参饲料中,并对照商品抗菌肽产品(0.5%添加),制成C、M1、M2和K几种等能、等氮饲料,探讨其在海参养殖中的应用可行性。结果发现,抗菌肽添加组(K)刺参的体增重率(82.06%)显著高于对照组(C)(64.77%)(P<0.05),M1组比对照组提高13.4%,但差异不显著。免疫学指标测定中发现,刺参体腔细胞吞噬活性在各组间无显著差异,但各添加组体腔液超氧化物歧化酶(SOD),M2、K组溶菌酶(LSZ)和M1、M2组酸性磷酸酶(ACP)活性与对照组相比均表现出显著提高(P<0.05),其中SOD活性M1、M2组和K组分别比对照组提高了40.24%、49.91%和61.49%;LSZ活性M2组和K组分别比对照组提高6.41%和5.48%;ACP活性,M1组和M2组分别比对照组提高了29.65%和37.34%。经体腔注射用灿烂弧菌(Vibrio splendidus)侵染各组健康刺参,三处理组刺参均表现出一定的对病原菌的抵抗力,但其中K组刺参的免疫保护率最高。电镜切片显示,柞蚕抗菌肽和免疫蛹粉可以提高小肠绒毛的长度,但2.0%免疫蛹粉则对小肠形态产生一定程度的破坏。综上,饲料添加1.0%柞蚕免疫蛹粉可有效促进刺参生长,并提高抗病力。

柞蚕核型多角体病毒宿主载体表达系统的研究现状及展望

对构建柞蚕蛹-柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nucleopolyhedrovirus,ApNPV)宿主载体表达系统及利用其生产有用外源基因产物的基本原理、研究进展和应用前景进行了论述。指出该系统为真核生物表达系统,与大肠杆菌等原核生物和其他昆虫杆状病毒表达系统相比,在表达出的目的基因产物特性、经济效益和产业化生产等方面均具有明显的优越性,应用前景广阔。

家蚕茧丝突变种Nd的丝腺发育形态观察

裸蛹(Nd:25-0.0)其突变性状表现为绢丝腺退化及不能正常吐丝结茧,基因位于与丝素重链同在的第25号染色体的0.0座位。在本研究中,选用Nd-s及大造作为对照,解剖不同发育时期丝腺,经DAPI染色后计数其丝腺细胞数和观察丝腺细胞的发育情况。蚁蚕时期丝腺细胞数的统计结果表明,3个品种的中部丝腺和后部丝腺在细胞数目上并无显著性差异;而在5龄初期,Nd后部丝腺的发育明显比对照发育慢,特别是在长度上;对丝腺细胞核的染色观察发现,5龄期,Nd突变种的中部丝腺的细胞核分裂与对照相比无差异,均呈树突状分裂;而后部丝腺细胞只发生纵向扩展,无正常家蚕丝腺细胞的树突状分裂。对fib-H基因末端序列测序结果表明,该突变在fib-H末端的半胱氨酸位点也没有发生突变。由此认为,该突变种丝腺的退化并不是真正的细胞数减少或者发育过程中萎缩,而是后部丝腺细胞核的分裂过程发生异常从而造成后部丝腺的短小,推测该突变基因与细胞核的分裂有关。

蜂蛹多肽对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响

蜂蛹多肽因具有丰富的营养价值,以及增强免疫、抗肿瘤及抗氧化等生物学活性,而受到了广泛关注,但目前关于蜂蛹多肽纯化组分的体外免疫调节活性的研究尚未见报道。为了探究蜂蛹多肽对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响,以蜂蛹多肽纯化组分BPP-21为研究对象,研究其在不同浓度(12.5、25、50、100和200μg·mL^-1)下对RAW264.7巨噬细胞的细胞活力、吞噬能力、细胞因子分泌能力、NO分泌能力和氧化应激指标的影响。结果显示,在浓度12.5~200μg·mL^-1范围内,BPP-21对RAW264.7巨噬细胞无明显的细胞毒性作用,可显著提高干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)与NO的分泌水平(P<0.05);在浓度25~200μg·mL^-1范围内,显著增加细胞吞噬能力以及白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的分泌量(P<0.05);在浓度50~200μg·mL^-1范围内,显著提高细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力(P<0.05)。研究表明,蜂蛹多肽纯化组分BPP-21可增强RAW264.7巨噬细胞的免疫活性,为蜂蛹多肽免疫调节剂的研究与开发提供了理论依据。

樗蚕蛹(Philosamia cynthia)精巢细胞系的建立

樗蚕蛹精巢细胞传代培养已到８９代。细胞系形态基本为圆形，少数为梭形。细胞呈悬浮生长，也有少数半贴壁现象。细胞群体倍增时间约７２ｈ左右。细胞系生长的适宜培养基为ＭＧＭ４４３；温度２６～２７℃ｐＨ６４。染色体具有典型鳞翅目昆虫的染色体特征。细胞系的酯酶同功酶、葡萄糖６磷酸脱氢酶活性较好。

细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性

目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)鉴定rhEGF,通过MTT和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果 Tricine-SDS-PAGE、Western blot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTT法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P<0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625～1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P<0.05)。结论 AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。

家蝇蛹多肽的制备及促伤口愈合活性评价

为了确定酶解法制备家蝇蛹多肽(PHP)的工艺条件,并初步评价PHP的促伤口愈合活性,以家蝇(Musca domestica L.)蛹为原料,采用蛋白酶酶解法制备PHP,通过单因素实验优化酶解法制备PHP的工艺条件,并在细胞水平上评价PHP的促伤口愈合活性。结果表明,10种蛋白酶酶解法制备的PHP中,胃蛋白酶酶解法制备的PHP得率最高,其次是风味蛋白酶酶解法制备的PHP(PHF)。另外,PHF的多肽含量及水解度均最高。单因素实验结果表明,制备PHF的最佳条件为酶解温度60℃、加酶量8000 U/g、酶解时间4 h,在此条件下制得的PHF得率最高、水解最完全。细胞实验结果显示,不同蛋白酶酶解法制备的PHP具有不同程度促进HaCaT细胞增殖及迁移的作用。其中,PHF(分子质量主要分布在500~1300 Da之间)促伤口愈合活性最佳。同时,PHF可显著促进RAW264.7细胞转化生长因子TGF-β1及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达。综上,风味蛋白酶酶解法是一种制备高得率、高多肽含量及高水解度的PHP的方法,PHF具有促进伤口愈合的潜力。