Isolation and Screening of Strains for Silkworm Puparium Chitin Degradation and the Optimization of Chitinase Production by Response Surface Methodology

[Objective] The aim of this study was to optimize the conditions of chitinase-produce strains.[Method] A kind of screened chitinase-produce strain G-254 was habituated cultured,and then the single factor experiment was carried out to explore the effects of different carbon source,nitrogen source and inorganic salt on the activity of produced chitinase;the response surface test was used to determine the optimal conditions for chitinase production.[Result] The optimal conditions for chitinase production were：8% of glucose,5% of beef extract and 0.07% of MgSO4,and the activity of chitinase reached the maximal value（6.86 U）under these conditions.[Conclusion] The study improved the activity of chitinase produced by strain G-254 and provided good foundation for industrial production.

壳聚糖止血材料及最新研究进展

壳聚糖具有良好的止血功能,可制成粉末、液体、纤维、凝胶及多孔材料用于各种类型的伤口止血,还可与一种或几种其它高分子材料复合,或是通过化学修饰制备衍生物增强其止血性能,促进伤口愈合。介绍了国内外有关壳聚糖应用于医疗伤口止血材料方面的最新研究成果及家蚕蛹壳壳聚糖的提取与应用前景。

石斛篓象成虫对不同来源气味的行为反应

【目的】研究不同来源气味对石斛篓象Nassophasis sp.成虫嗅觉选择行为的影响,对于发展新型石斛篓象成虫防治技术具有重要意义。【方法】应用陷阱式嗅觉测定仪测试了石斛篓象成虫对同种个体气味、蛹壳气味、成虫粪便、球花石斛Dendrobium thyrsiflorum受害植株气味的嗅觉反应。【结果】雌成虫气味对雄成虫有引诱作用,对雌成虫没有引诱作用;雄虫气味对雌、雄成虫均无引诱效果。雌、雄蛹壳气味对雌、雄成虫均有显著引诱效果。两性成虫聚集时产生的粪便对雌、雄成虫均有显著引诱作用,雌虫或者雄虫单独放置时产生的粪便对雌、雄成虫均无引诱效果。被雌虫为害的球花石斛植株茎干释放的气味仅对雌虫有引诱作用,而受雄虫为害后的茎干产生的气味仅对雄成虫有引诱作用。【结论】本研究为进一步分离、鉴定对该虫有引诱作用的活性物质奠定了基础。

家蚕蛹甲壳素精制工艺的研究及产品质量检测

为制备高品质甲壳素衍生物,研究了利用家蚕蛹皮制备甲壳素的最佳工艺条件：将家蚕蛹皮用3%HCl在30℃条件下浸泡22 h,再用5%NaOH在85℃条件下水浴4 h,然后用10%H2O2于85℃下加热脱色0.5 h。上述工艺制备的甲壳素为白色片状或粉状固体,甲壳素提取率为32%,水分含量为5%～10%,灰分含量为0.63%～0.81%,含氮量为5.86%～6.02%。产品质量指标达到食品级标准。

常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在种属分子鉴定中的应用

目的探讨常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在法医昆虫学种属鉴定中的应用价值。方法收集不同保存时间的嗜尸性蝇类成虫及其羽化后的蛹壳成套样品共55套,根据形态学特征鉴定为2科6属8种。以不同保存时间,将上述样品分为〈2年组（n=23）、2-5年组（n=20）和〉5年组（n=12）。取单个成蝇胸部和空蛹壳,以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取各样品mt DNA,并测定其浓度和纯度。PCR扩增COⅠ基因,获得COⅠ基因序列Ⅰ和Ⅱ,分别截取498 bp和841 bp的序列。在Gen Bank数据库对所获序列作BLAST搜索,进行同源性比对分析。结果所有样品均成功提取了mt DNA。保存时间≤5年的成虫胸肌和〈2年的空蛹壳DNA浓度多在1.0-3.0μg/μl之间,A260/A280值多在1.6-1.8之间。保存时间〉5年的成虫胸肌和≥2年的空蛹壳DNA浓度多低于1.0μg/μl,A260/A280值多低于1.6。随着样品保存时间的延长,各样品DNA浓度均明显下降（P〈0.01）。保存时间〈2年,成虫胸部样品和空蛹壳样品均成功扩增出COⅠ序列Ⅰ和序列Ⅱ。随着保存时间的延长,扩增成功率明显下降,序列Ⅱ表现更为明显（P〈0.01）。8种嗜尸性蝇类COⅠ基因序列Ⅰ和序列Ⅱ分别有6个和7个种属的同源性比对结果完全正确且样品序列比对的Max ident值均〉97%。结论嗜尸性蝇类空蛹壳样品可作为mt DNA提取和种属比对的检材。

丝光绿蝇蛹壳颜色变化及其对死后间隔时间推断的意义

【目的】研究不同恒温下丝光绿蝇Lucilia sericata蛹期蛹壳颜色变化,并利用提取的蛹壳RGB值绘制标准色板,为法医学中死后间隔时间(postmortem interval,PMI)的推断提供科学依据。【方法】在16,20,24,28和32℃恒温下分别饲养丝光绿蝇待其发育至蛹期,选取10头蛹为观察样本,每隔12 h定期观察蛹壳的颜色变化,拍照并利用图像分析软件提取蛹期各观察时间点蛹壳颜色的RGB值,再将分析计算后的RGB值还原为标准色板,并采用R软件对蛹发育时间与蛹壳颜色RGB值中的R值的关系进行多元回归分析和拟合。【结果】不同恒温下,丝光绿蝇蛹壳颜色随发育时间均呈现出不均衡的加深趋势,尤其在化蛹初期和临近羽化时变化明显。根据各发育时间的标准RGB值可制作出对应不同恒温的5个丝光绿蝇蛹壳颜色标准色板。【结论】在案发现场,可将检获到的蝇蛹与本研究得到的相近温度下的蛹壳颜色标准色板进行比色鉴定,初步估算蛹期,为死后间隔时间的推断提供科学依据。

蚕蛹壳几丁质降解菌的分离筛选及其产酶条件优化

[目的]对产几丁质酶菌株发酵产酶活性工艺进行优化。[方法]将筛选得到的1株产几丁质酶菌株G-254进行驯化培养,通过单因素试验考察了不同碳源、氮源和无机盐对菌株产酶活的影响;进行响应面试验,以菌株发酵所产酶活为响应值,确定最佳的发酵产酶工艺条件。[结果]菌株G-254发酵产几丁质酶最佳发酵条件为,葡萄糖8%,牛肉膏料5%,硫酸镁0.07%,在此条件下获得的几丁质酶活为6.86 U。[结论]提高了菌株发酵产几丁质酶酶活,为后续工业化发酵生产奠定了基础。

湿地松粉蚧三种寄生蜂蛹及蛹壳的比较

本文主要通过对湿地松粉蚧Oracella acuta(Lobdell)两种引进天敌迪氏跳小蜂Zarhopalus debarri、火炬松短索跳小蜂Acerophagus coccois与本地天敌粉蚧长索跳小蜂Anagyrusdactylopii(Howard)的蛹及蛹壳的比较,指出可通过寄生蜂蛹及蛹壳的形状、颜色、羽化孔、表面结构特征等对上述三种寄生蜂进行区分。

银杏超小卷叶蛾的蛹壳测报法

2007年—2012年在泰兴市采用蛹壳测报法预测银杏超小卷叶蛾Pammene ginkgoicola幼虫的发生时间及危害程度。结果显示:当树表累计蛹壳数占蛹壳总数的15%,50%和85%时,分别为成虫羽化始盛期、高峰期、盛末期;由成虫羽化高峰期至幼虫危害高峰期,一般为14～17 d;在一定行政区域范围标准株树干表皮观察区域统计的蛹壳数为0,即该范围未发生危害;单位树表面积蛹壳数(个/m2)<10,10～20,20～40,>40,枝被害率分别为<4%,4%～7%,7%～10%,>10%。

大头金蝇蛹壳蛋白质降解特征的法医学意义

目的研究大头金蝇Chrysomyia megacephala蛹壳风化不同时间的蛋白质降解,探讨其在法医学死亡时间推断上的意义。方法收集人工饲养的C.megacephala蛹壳,放置于树林内5、10天后收回,进行红外光谱采集及预处理,读取蛋白质酰胺吸收峰,并对每组平均光谱进行曲线拟合。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果与对照组相比,风化5天组,蛋白质酰胺Ⅰ的峰位蓝移,酰胺Ⅱ的峰位变化无统计学意义,且酰胺Ⅰ及Ⅱ的峰强度变化均无统计学意义。蛋白质的二级结构,α-helix略减少且β-sheet略增加,而β-turn无变化;风化10天组,蛋白质酰胺Ⅰ及Ⅱ的峰位均蓝移,酰胺Ⅰ吸收峰出现明显肩峰,且酰胺Ⅰ及Ⅱ的峰强度均明显下降。蛋白质二级结构,α-helix及β-sheet的变化趋势与5天组一致,而β-turn显著增加。结论红外光谱显示C.megacephala蛹壳风化10天内,蛋白质酰胺Ⅰ及Ⅱ的吸收峰变化开始呈现出一定的特征性,可辅助较长时间的死亡时间推断。

应用丽蝇蛹壳脂类推断死亡时间的基础研究

目的探讨丽蝇科大头金蝇蛹壳风化过程中脂质降解特征对死亡时间推断的应用价值。方法收集饲养的大头金蝇蛹壳,置于户外5d、10d后收回,-20℃保存,对照组清洗后直接冻存。样本行显微傅里叶变换红外光谱(micro-FTIR)检测,预处理后读取峰位、峰高,应用SPSS 19.0进行统计学分析。结果与对照组相比,5d和10d组脂质VasCH_3峰位变化无统计学意义,VasCH_2峰位蓝移,VsCH_2吸收峰消失,仅10d组VsCH_3峰位红移,除5d组VsCH_3外,各吸收峰强度均降低;与5d组相比,10d组所有吸收峰强度均降低,VsCH_3峰位红移,其余各吸收峰的峰位变化均无统计学意义。结论应用micro-FTIR技术检测大头金蝇蛹壳风化过程中脂质的降解特征为法医学死亡时间推断提供新思路,具有一定的应用潜力。

枸杞奈实蝇幼期各虫态的形态发育特征

为探明枸杞奈实蝇Neoceratitis asiatica幼期各虫态的形态发育特性,采用田间取样和室内饲养相结合的方法对其卵、幼虫、蛹的生长发育过程、形态变化及识别特征进行系统观察,通过测量口钩和头咽骨的长度来划分幼虫龄期,解剖并观察不同发育时期蛹及蛹壳颜色,利用图像分析系统提取并分析蛹壳颜色的RGB值。结果表明:枸杞奈实蝇卵的发育可分为初期卵、口钩显现期卵和破壳期卵3个阶段。幼虫分为3个龄期,均具有1对能够自由收缩的骨化口钩及头咽骨,其形态和大小在各龄幼虫之间存在明显差异。预蛹期是从幼虫到蛹蜕变的过渡时期,蛹的形态发育呈规律性变化,可分为隐头蛹期和显头蛹期2个阶段,显头蛹期又可细分为显头蛹初期、黄色眼期、红色眼期、鬃毛蛹期及预成虫期5个阶段。蛹壳颜色随蛹的发育呈不均衡加深趋势,在预蛹期、鬃毛蛹期和预成虫期变化尤为明显。根据蛹壳颜色的RGB值,可制作对应不同发育阶段的蛹壳颜色标准比色板,用于枸杞奈实蝇的发育生物学及防治技术研究。

利用末龄幼虫蜕和蛹壳对单头昆虫基因的无损伤检测

【目的】在昆虫基因功能等相关研究中,通常需要利用单对交配策略来筛选纯合突变品系,如何在配对前确定个体基因型同时又不对昆虫造成损伤,显得尤为重要。本文旨在探讨利用末龄幼虫蜕和蛹壳进行单头昆虫的无损伤基因检测方法。【方法】针对大小不同的3种鳞翅目昆虫斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius、二点委夜蛾Athetis lepigone M?schler和小菜蛾Plutella xyllostella Linnaeus,收集末龄幼虫蜕及蛹壳,利用常规分子生物学技术进行基因组DNA提取、靶标基因PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测、连接转化和单克隆测序验证。【结果】从斜纹夜蛾、二点委夜蛾末龄幼虫蜕和蛹壳提取的基因组DNA,以其为模板对GOBP1基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳检测得到单一、明显的条带,进一步经连接转化和单克隆测序得到目的序列;但由于小菜蛾末龄幼虫蜕和蛹壳太小,以同样方法提取的基因组DNA浓度太低,PCR产物经电泳检测,未能得到目的条带。【结论】对于与斜纹夜蛾和二点委夜蛾相近或更大的昆虫,可以利用单头末龄幼虫蜕或蛹壳提取基因组DNA,通过常规PCR技术克隆特定基因序列,为突变品系筛选过程中昆虫个体的无损伤基因型检测提供了方法。