pur操纵子的启动子部分点突变对肌苷合成的影响

以lacZ作为报告基因,对野生菌、肌苷低产菌和肌苷生产菌分别构建了研究型质粒pYH1206、pYH1618和pYH1620,并在大肠杆菌中表达,以研究pur操纵子与其阻遏蛋白PurR的相互作用对肌苷合成的影响。lacZ表达β-半乳糖苷酶相对活性的测定结果和阻遏蛋白PurR的序列分析表明,肌苷生产菌中pur操纵子的启动子部分-272位点处的突变是肌苷高产的主要原因。

枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径基因修饰及效应

在核黄素操纵子过表达的枯草芽孢杆菌中,采用无标记基因敲除方法,分别敲除GMP还原酶基因(guaC)、腺苷琥珀酸合成酶基因(purA)、嘌呤操纵子(pur operon)阻遏蛋白编码基因簇(purR-yabJ),并且用cryⅢA mRNA稳定子替换嘌呤操纵子的mRNA前导区,构建了菌株LX35.采用实时定量PCR方法,测定其胞内嘌呤操纵子mRNA的相对水平.摇瓶发酵,测定其发酵液中的核黄素含量.结果显示,菌株LX35嘌呤操纵子的mRNA水平相对提高了53.33倍,核黄素产量提高了126.6%.使用cryⅢA mRNA稳定子,能够有效提高嘌呤操纵子的表达水平,有助于核黄素过量合成.