肌苷酸合成酶系PURH基因对苏禽乌骨鸡胸肌肌苷酸含量的关联分析

在分析氨基咪唑氨甲酰核苷酸转甲酰基酶/次黄嘌呤核苷酸环水解酶基因(fused IMP cyclohydrolasegene/phosohoribosylaminoimidazolecarboxamide formyltransferase PURH)对苏禽乌骨鸡鸡群体肌肉肌苷酸含量的遗传效应。采用PCR-SSCP方法检测苏禽乌骨鸡PURH基因外显子9和外显子16多态性,分析多态位点不同基因型与90日龄胸肌肌苷酸(IMP)含量的关联,各种基因型与胸肌IMP含量的方差分析结果表明:PURH基因外显子16中多态位点T17446C与IMP含量显著相关,TT型个体胸肌IMP含量较CT型高出0.757 mg/g,TT型个体胸肌IMP含量较CC型高出1.083 mg/g,均达到极显著水平(P<0.01),CT型个体IMP含量也显著地高于CC型(P<0.05)。因此,可以利用该基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。

北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求。

北京油鸡purH基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明:北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506)编码区为1782 bp,编码593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3%～53.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFp-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。

肌苷酸合成酶系3个基因对白耳鸡胸肌肌苷酸含量的遗传效应

GPAT、AIRC和PURH基因作为肌苷酸合成过程中的酶系基因,它们对鸡肌肉肌苷酸含量均具有显著的效应。为了进一步验证这3个基因对肌苷酸含量的遗传效应,本研究以白耳鸡为试验材料,采用PCR-SSCP和测序相结合的方法,分析了这3个基因的单基因以及合并基因型对鸡胸肌肌苷酸含量的影响。结果表明:GPAT、AIRC和PURH基因均对白耳鸡胸肌肌苷酸含量的差异产生影响,均与鸡肌肉IMP含量存在显著关联(P<0.05),这3个位点可作为影响鸡肌肉肌苷酸含量的分子标记;合并基因型的遗传效应要高于最优秀的单个基因型效应。因此,可以利用合并基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。