生长抑素三硫化物的制备与质谱分析

采用生长抑素与硫代硫酸钠(Na_(2)S_(2)O_(3))反应生成生长抑素三硫化物,并使用高压制备液相色谱法将其纯化后冻干,利用高分辨质谱对其精确分子量、肽序列与三硫键连接位点进行检测。结果表明,当生长抑素与Na2S2O3摩尔比为1∶2时,60℃水浴下反应1 h,即可生成生长抑素三硫化物,对其纯化、脱盐、冻干后,最终获得纯度大于95%的目标物。通过质谱分析,其加合离子[M+2H]^(2+)的m/z为835.3539、[M+3H]^(3+)的m/z为557.2369,肽序列为A-G-C-K-N-F-F-W-K-T-F-T-S-C,三硫键连接位点为Cys(3)-Cys(14),均与理论结构一致。该研究可为生长抑素的质量研究提供依据。

新型复合抗菌滤芯的研制及净水效果的比较

以活性炭纤维、纳米纤维素、聚丙烯、抗菌母粒等为原材料,采用湿法成型技术制备了第二代纳米活性碳纤维滤芯,结合湿法成型技术和熔融喷丝技术制备第三代复合型抗菌滤芯.采用XRD和SEM表征了第三代复合型抗菌滤芯的结构与表面形貌,并与市售的第一代烧结型活性炭滤芯和第二代纳米活性碳纤维滤芯进行了水中化学需氧量(COD)、色度、浊度和余氯等污染物的过滤性能对比试验.结果表明:第三代复合型抗菌滤芯在过滤微量有机污染物、悬浮污泥颗粒、氯化消毒副产物,以及过滤铅、镉两种重金属离子等方面的表现明显优于第二代纳米活性碳纤维滤芯和第一代烧结型活性炭滤芯.此外,第三代复合型抗菌滤芯对浊度的去除率大于94%,对COD的去除率大于53%,对色度去除率大于97%,对余氯去除率大于98%,对金属离子(铅、镉)的去除率大于98%,其效果良好;该滤芯受污染物浓度、水样温度变化的影响较小,净水效果稳定且显著.

葛根中黄酮的提取与纯化研究

以葛根粉为原料,采用乙醇提取法,研究葛根中黄酮的提取及纯化工艺。采用紫外分光光度法测定黄酮标准曲线用于计算葛根中黄酮含量。在乙醇提取法提取葛根黄酮的研究中,以提取时间、料液比、乙醇体积分率、温度为考察因素,进行单因素条件研究。结果表明,最佳提取时间为1.5 h,料液比为1∶13 g/m L,乙醇体积分率为40%,温度为60℃,葛根黄酮的提取率达到2.64 mg/g。以LS-303型大孔吸附树脂为吸附剂,以葛根黄酮在该树脂上的最佳动态吸附与解吸条件为操作参数,采用树脂柱进行葛根提取液中黄酮的分离纯化,采用紫外分光光度法检验纯化效果,研究发现LS-303型树脂对葛根黄酮有良好的纯化作用。

定向进化人α型干扰素基因家族的研究

应用DNA改组(DNAshuffling)技术重组了12种人α型干扰素基因,并结合噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术构建了噬菌体干扰素改组文库,采用简便的、功能性的定向竞争筛选方法,获得了比活达1 0×109IU/mg的新型α型基因工程复合干扰素,是目前国际上已投产的α2型干扰素的5倍,具有生产应用前景,上述策略也为其它细胞因子或酶的改造提供了借鉴方法。

菜芙蓉总黄酮纯化及其体内抗氧化性

为研究菜芙蓉总黄酮(TFA)的纯化条件及体内抗氧化性,采用AB-8大孔树脂静态吸附-洗脱工艺,控制纯化条件为上样液质量浓度0.1g/mL,pH值为3.5,解吸液乙醇体积分数为70%,解吸液体积与树脂质量比为20∶1(mL/g)。在最优纯化条件下,黄酮的质量分数提高到48.50%;与正常对照组相比,实验组小鼠器官指数无显著差异(P>0.05);小鼠血清和肝组织中MDA含量显著低于正常对照组(P<0.05),而CAT,GSH-Px和SOD活性均高于正常对照组且具有明显的量效关系。实验结果表明,TFA具有良好的体内抗氧化效果。

文冠果壳总黄酮分离纯化及稳定性研究

以吸附率和解吸率为评价指标,对大孔树脂分离纯化文冠果壳总黄酮的工艺进行优化,并研究纯化后文冠果壳总黄酮的稳定性。结果表明,文冠果壳总黄酮的最佳分离纯化工艺为:采用XAD-1600树脂,上样液pH=4,上样浓度0.5mg/mL,吸附时间6h,上样流速2BV/h,洗脱液流速3BV/h,洗脱液乙醇浓度40%。该条件下,纯化后总黄酮的纯度为(70.15±1.03)%,回收率为(89.63±1.58)%。稳定性试验表明:文冠果壳总黄酮在低温、酸性、避光条件下性质稳定。

农残级正己烷的产业化制备纯化工艺研究

以工业级正己烷为原料,通过脱色-连续精馏-过滤等一系列纯化工艺制备农残级正己烷,用紫外吸光度、纯度(GC-FID)和杂质峰高(GC-ECD)等检测值作为农残质量控制指标。产品质量与占当前国内垄断市场的进口试剂水平相当。通过试验确定了较为合适的工艺条件:二氧化硅为脱色剂,用量是原料质量的2%,然后用10%的蒸馏水水洗一次,连续精馏装置的导热油加热温度为88℃,脱轻塔和成品塔的回流比分别为10∶1和4∶1,重组分放料速率20 mL/min,产率可达70%左右。

登革2型病毒重组E蛋白的生物学特性分析

[目的]检测重组 D2V全长 E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础.[方法]酵母表达上清超滤浓缩后用金属螯合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带.将纯化蛋白与组氨酸抗体、 D2V E单抗进行斑点印迹和蛋白印迹,以确定纯化物是否为含组氨酸尾的 D2V E融合蛋白,并用 ELISA检测纯化 E蛋白与不同 DV抗体的结合反应.用纯化的重组 D2V E蛋白免疫小鼠后测定其产生的抗体类型与滴度,以分析其抗原性.[结果]表达产物经 MCAC柱纯化获得单一的相对分子质量为 69× 103的蛋白,组氨酸抗体与 D2V E单抗的印迹试验证实该条带就是含多聚组氨酸尾型特异的重组 E蛋白(rEgp) , ELISA显示纯化的 rEgp保留有免疫反应性及型特异性,内糖苷酶 H消化证实其含有 N联高甘露糖残基.接种 rEgp可诱生针对 D2V抗原与重组 E蛋白的高效抗体.[结论]纯化的 D2V全长 E蛋白保留其免疫原性和免疫反应性,并具有型特异性.

决明子活性成分的高速逆流色谱分离

为了高效分离得到高纯度的决明子活性成分,应用高速逆流色谱,在流速为2.0mL/min、固定相为正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(体积比5∶3∶6∶6)的上相、流动相为从正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(体积比5∶3∶6∶6)到正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(体积比5∶3∶5∶7)的梯度洗脱的两相溶剂系统中,从决明子的乙酸乙酯萃取物中同时分离得到5种单体化合物.利用理化常数、质谱(MS)、核磁共振(1HNMR1、3CNMR)等波谱技术鉴定出5种化合物分别为橙钝叶决明素(Ⅰ)、甲基钝叶决明素(Ⅱ)、钝叶决明素(Ⅲ)、大黄素甲醚(Ⅳ)和大黄素(Ⅴ).从500 mg粗提物中分离得到5种化合物的量分别为90.42、45.39、31.84、121.71和39.10 mg;纯度分别为97.4%、93.0%、94.8%、96.3%和95.5%;回收率分别为91.5%、96.7%、93.3%、95.6%和98.4%.

CML66基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

目的:获得原核表达的新的肿瘤抗原CML66蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法:采用RT-PCR技术从睾丸中获得cML66的cDNA,亚克隆至pGEMT载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pET32b(+)中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE、Westernblot鉴定后,应用纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。结果:获得的CML cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列 一致。用纯化的目的蛋白免疫家兔后,获得高滴度的特异性兔抗血清。结论:成功地克隆CML66基因,建立了原核表达、纯化体系。制备纯化的CML66蛋白和高滴度、特异的兔抗血清。

Purification and Activity of Antibacterial Substances Derived from Soil Streptomyces sp.CaiF1

[Objective] This study aimed to separate and purify antibacterial substances from soil Streptomyces sp. CaiF1, and to explore the activities of this substance. [Method] The antibacterial substances were separated and purified by Ethyl acetate extraction, macroporous adsorptive resin, silica gel chromatography and preparative high performance liquid chromatography (HPLC), and powdery mildew were taken as the indicating bacterial to study their activities. [Result] Antibacterial substances were purified and the stability analysis of the extracts from Streptomyces CaiF1 fermentation broth showed very stable at pH 2.0-pH 10.0, 100 ℃ and changed very little under UV treatment for 24 h. Inhibition rate of powdery mildew was 69.7%. [Conclusion] The purified antibacterial substances showed good stability, which provided theoretical foundation for their structural identifications and future applications.

碳化硅质高温陶瓷膜材料在Shell煤气化装置中的应用

碳化硅高温陶瓷膜具材料有耐高温、高压、耐腐蚀、过滤效率高和容易再生等优点,在中高温气体除尘领域,尤其是Shell煤气化装置中用于飞灰过滤优势明显。碳化硅高温陶瓷膜材料在300℃以上的中高温粗煤气净化,可以将飞灰颗粒脱除至0.3μm,除尘后的煤气中飞灰含量降至1～2mg/m3。

马铃薯干腐病镰刀菌的分离及生物学特性研究

为确定华池县马铃薯干腐病的病原菌,采集有干腐病症状的马铃薯块茎为试验材料,采用组织块法和孢子稀释法分离纯化病原菌,参照镰刀菌分类系统进行形态学鉴定;并采用单因素法考察了氮源、温度、碳源和pH值对病原菌生长的影响。结果表明:从采样区分离纯化出35株镰刀菌,鉴定为F.acuminatum和F.sambicinum,优势菌是F.acuminatum,分离频率为62.9%,按照科赫氏法对其进行致病性测定,证实了两种镰刀菌对马铃薯块茎的致病性。优势菌F.acuminatum的最佳生长条件为最适温度为28℃,最佳氮源是玉米粉,最适pH值为9,最佳碳源是蔗糖。

蒸喷塔在高炉煤气净化工艺中的应用

针对380m3中型高炉的大修改造,将煤气净化工艺由塔-文-电工艺改为蒸喷工艺,既满足小高压炉顶生产的要求,又节约大修费用,每小时可节约水耗约200t,经济技术效果良好。

粉尘粒子纤维层湿式过滤的试验研究

在传统基本假设的基础上,利用等效类比的方法引进水均匀分布于纤维丝表面并形成当量直径的假设,实现了湿式纤维层粉尘过滤过程的理论分析.同时,借助正交试验和常规实验的手段对理论式进行了无量纲修正,得到半理论半经验公式,并给予实际应用的适用范围.该公式对湿式纤维层的粉尘过滤具有实际指导意义.

哺乳动物极性蛋白mInscuteable-C末端肽段/GST融合蛋白的原核表达与纯化

目的:构建哺乳动物极性蛋白mInscuteable C末端257～532位氨基酸结构域与谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的融合蛋白GST-mInsc 257～532的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化该融合蛋白。方法:将已经构建好的mInsc 257～532位氨基酸序列克隆至原核表达载体pGEX-4T中,构建重组的质粒pGEX-4T/mInsc 257～532;将重组质粒转化感受态细菌BL21,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达GST蛋白;经谷胱甘肽-琼脂糖球珠分离纯化;产物经SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定。结果:获得高表达及纯化的pGEX-4T/mInsc 257～532融合蛋白。结论:成功构建重组pGEX-4T/mInsc 257～532原核表达载体;诱导表达pGEX-4T/mInsc 257～532融合蛋白并纯化。

环境专业实验教学中探索性实验设计——以“广州主要河流自净能力的测定”实验为例

以"广州主要河流自净能力的测定"实验为例,介绍了环境工程专业实验课教学的探索性实验设计改革,实验教学实施效果表明:开放的探索性实验教学模式有利于调动学生学习的积极性和主动性,培养学生的创新能力,也有利于提高实验课教师的业务水平,符合现代实验课教学的发展要求。

人脑神经元特异性烯醇化酶的纯化方法

采用改良的Ｇｒａｃｅ层析方法，经一次ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析即从人脑中纯化了神经元特异性烯醇化酶，比活力为９２．１Ｕ／ｍｇ，纯化倍数为５９．４．该酶纯化后，经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一蛋白质谱带．此外，还测定了其部分理化性质，其亚单位分子量为４５０００，等电点ｐＩ为４．７，氨基酸组成分析表明其为一种酸性蛋白质；对２－磷酸甘油酸的Ｋ＿ｍ值为５．６×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ．

大孔树脂纯化山竹果壳废弃物色素的研究

以大孔树脂为吸附材料分离纯化山竹果壳中的天然色素,并对其纯化工艺条件进行探究。实验选择了FL-1,FL-2,FL-3,AB-8,NKA-9,D-101,X-5,DA-101,DA-201九种大孔树脂,比较了其对该色素的吸附率和解吸率,并对静态(吸附率×解吸率)柱形图比较进行考察,筛选出最好的树脂。结果表明,AB-8大孔树脂对该色素的吸附和解吸效果较好。在动态吸附中,当上样液吸光度为0.100～0.300,pH 4,上样液流速为3BV/h时,AB-8树脂对山竹果壳色素吸附量大;以90%的乙醇为洗脱剂,流速为2BV/h时,解吸效果最好;山竹果壳色素纯化后,色价提高了5倍左右。这项研究为山竹果壳色素的工业化生产提供了理论基础。

测序级胰蛋白酶的制备工艺与质量检测

目的:制备高纯度、酶解效率高、酶切位点专一的测序级胰蛋白酶,应用于蛋白组学研究的蛋白质鉴定与分析中。方法:取实验室自制的猪胰蛋白酶粗酶,经硼氢化钠、甲醛还原甲基化修饰抑制胰蛋白酶自水解,采用高效液相色谱仪15RPC反相柱纯化,收集对应的甲基化胰蛋白酶峰组分,冷冻干燥;甲基化修饰的胰蛋白酶进一步经甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)修饰,以抑制糜蛋白酶等非特异性酶切活性,并经反相色谱柱再纯化,获得终产物即质谱测序级胰蛋白酶;自制的测序级胰蛋白酶经SDS-PAGE、HPLC反相色谱分析、酶比活力测定,并应用于胶内蛋白质酶切质谱鉴定氨基酸序列等,检测其纯度、酶水解效率及酶切位点特异性。结果:自制甲基化TPCK修饰的测序级胰蛋白酶纯度大于95%,酶比活力为200 U/mgP(TAME)以上,质谱分析酶切特异性好;且酶的制备工艺流程稳定,可应用于测序级胰蛋白酶产品的生产与开发中。结论:制备的测序级胰蛋白酶纯度高、酶解效率优、酶切特异性强,可广泛应用于实验室中蛋白质和肽段测序鉴定、HPLC肽段谱图分析等蛋白组学研究分析中。