DNA提取方法和PCR循环次数对STR扩增成功率的影响

目的探讨常见载体上的微量血痕DNA的提取方法、PCR循环次数对STR扩增成功率的影响。方法分别应用Chelex-100法及Chelex-100结合纯化法对8种载体上不同大小的血痕样本进行DNA提取,并采用28次、30次及34次PCR循环进行STR扩增,分别观察其扩增成功率。结果经28次、30次及34次PCR循环,Chelex-100法提取DNA后的STR扩增成功率分别为0.2917,0.3333,0.4583,Chelex-100结合纯化法的STR扩增成功率分别为0.3750,0.4583,0.8750。结论用Chelex-100结合纯化法提取DNA,用34次循环扩增可提高STR基因座的检测成功率。

浓缩DNA法结合miniSTR分型技术检验微量DNA

目的优化低拷贝数DNA STR分型方法。方法对采用磁珠法或Chelex-100法提取DNA,Identi-filer试剂盒扩增,未获得分型结果的日常检案检材,采用物理浓缩法或过柱浓缩法浓缩DNA,采用miniFilerTM试剂盒再次扩增分型。结果 127例检材中,47例磁珠法提取DNA未获得分型的样品,分型成功率为36%;80例Chelex-100法提取DNA未获分型的样品,分型成功率为30%。结论采用浓缩法和miniFilerTM试剂盒,可以提高日常检案中低拷贝数检材的STR检验分型成功率。

微量接触DNA的浓缩与回收

目的对纯化后的微量DNA进行进一步浓缩,提高DNA检验成功率。方法将30 ml(约600 pg)纯化后的微量DNA,分别采用Amicon离心超滤管和DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒进行浓缩回收,用Identifiler试剂盒进行PCR扩增及分型检测,比较STR分型图谱的平均峰高、峰面积和等位基因丢失率。检验24枚白纸上的汗潜指纹,比较浓缩前后的检验效果。结果经过Amicon离心超滤管回收后,STR分型平均峰高85.3RFU,平均峰面积为1 130.8,等位基因丢失率为66.13%。经过DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒回收后,STR分型平均峰高147.5RFU,平均峰面积为1 960.2,等位基因丢失率为35.14%。汗潜指纹的DNA检验通过DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒纯化浓缩,获得有效分型的数量由浓缩前的9枚提高为20枚。结论 DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒可以明显提高微量DNA检材的检验成功率,效果优于Amicon离心超滤管。对白纸上的指纹,DNA Clean&ConcentratorTM-5试剂盒浓缩后检验成功率升高。

一种焚烧骨骼的DNA提取方法

本文介绍了一种针对烧骨的DNA有效提取方法。对烧骨进行研磨制成骨粉,对骨粉进行大体系脱钙和裂解,采用Amicon~Ultra-15离心过滤器对获得的脱钙、裂解上清液进行浓缩,提高DNA的回收率,使用硅胶膜法对浓缩后的DNA溶液进行纯化,并经复合STR扩增检验。使用上述方法成功完成两起严重焚烧骨骼案件的检验,确定了受害人身源。

法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上提取案件样本DNA的性能研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上对48份检材样本DNA进行了提取和扩增,成功检测到所有样本DNA的STR分型,检测成功率为100%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒具有较高的灵敏度和检材适应性,提取得到的DNA模板质量完全能够满足法医日常DNA检验工作的需要。

法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上的应用研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上提取276份血斑样本DNA,PCR扩增检测到270份样本STR分型,成功率达97.8%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒可与国外进口的DNA自动提取仪相配伍进行血斑样本的批量提取。

骨骼DNA快速检验方法

目的探讨骨骼DNA提取与快速检验的方法。方法取1年内的碎骨片37份,采用优化的PrepFiler BTA Forensic DNA试剂盒法提取DNA,以GlobalfilerTM Express复合扩增,经3130 xL基因分析仪电泳分离进行STR分型检测。结果 37份骨骼样本均获得完整的STR分型,各等位基因峰为200~7500rfu,峰型较均衡。结论采用本文建立的骨骼DNA快速检验法提取骨骼DNA,检验时间短,STR分型结果好,可在实际检案中使用,特别适合于灾害事故遇难者身份识别(disaster victim identification, DVI)的身源鉴定。

改良酚/氯仿法提取人全血DNA的研究

目的对传统酚/氯仿法进行改良,以期提取到高纯度的DNA,提高回收率。方法采用改良酚/氯仿法提取人全血基因组DNA,与传统酚/氯仿法在DNA纯度、质量浓度和聚合酶链反应(PCR)扩增短串联重复序列(STR)位点等方面进行比较。结果改良前后酚/氯仿法提取到的DNA纯度比较,差异无统计学意义(P>0.05);改良酚/氯仿法提取DNA的量明显高于酚/氯仿法,二者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。改良后酚/氯仿法提取2μL全血DNA仍可准确进行CFS1PO分型。结论改良酚/氯仿法提取DNA具有较高纯度和较高回收率的特点,可能在微量检材DNA提取中有一定应用价值。

一起强奸致孕案中葡萄胎的亲子鉴定分析

葡萄胎是异常受精所致的妊娠滋养细胞疾病。涉及葡萄胎组织的亲子鉴定在法医实践中相对罕见。在一起强奸致孕案中,受害人怀孕时未满14周岁,经医院诊断为葡萄胎。流产组织的形态和基因分型特征符合完全性葡萄胎的特点,但被控嫌疑人和流产的葡萄胎组织不符合亲子关系。笔者结合相关文献对检验结果进行分析,通过DNA数据库单亲比对为追溯犯罪嫌疑人提供线索,并对本案相关人员样本和流产葡萄胎组织进行了多次复检,增加了X-STR和Y-STR基因座检验,进一步明确了流产葡萄胎组织的生物学父亲。本文对该案件的检验鉴定过程进行分析和探讨,以期为同类型案件的办理提供启示。

国内外法医DNA检验试剂发展现状

DNA多态性分析技术是当前法医生物物证鉴定中最主要的技术手段，其承载的物质基础是法医DNA检验试剂。本文对国内外法医DNA检验试剂的研究现状与研究的进展情况进行综述报道。

DNA提取纯化技术的发展及在法医学中的应用

本文对国内外在DNA提取纯化技术上的发展以及相关试剂研究进行了综述，针对DNA提取纯化技术在法庭科学上的应用进行了归纳和展望。

一例遭清洗、雨淋的剪刀上做的DNA检验

公安机关在办理重大案件,特别是在办理具有难度的案件中,微量物证的DNA检验对整个案件的侦破能起到关键作用。微量物证具有肉眼无法识别、难发现、难提取、易污染、易破坏的特点,造成微量物证提取和检验的困难。"6.3"案件中对剪刀上微量物证的DNA检验是案件侦破中的一个很重要环节,对指导相关案件检验具有重要启示作用。

烧骨DNA检验技术的研究

目的解决陈旧性骨骼和烧骨DNA检验难题。方法研究建立了CTAB法裂解提取DNA,再用磁珠纯化得到的DNA提取液进行STR复合扩增检验。结果实验结果及实际检案显示研究所建立的骨DNA提取方法能较好地去除DNA扩增抑制物,得到高质量的DNA模板。结论本研究所建立的烧骨DNA检验方法其识别率为10×10-12,达到个人同一认定的目的,在解决实际工作中杀人焚尸案、火灾、爆炸等恶性案件和事故中有重要的作用。

载体法检验微量检材DNA

目的解决微量生物检材DNA检验难题。方法采用载体法对已知微量血样DNA进行检验,再与目前高灵敏度的Chelex-100提取的DNA检验的相应结果进行比较。结果载体法针对微量血样的DNA检验,不但能得到正确的STR分型结果,同时在检验灵敏度上比Chelex-100法高出2倍以上。结论载体法可提高微量生物检材中DNA检出率,且操作简单,在法医检案工作中具有较高应用价值。

泥土微生物检验及其在法庭科学中的应用

泥土物证的检验一向归属于微量物证的检验范畴,但随着生物技术的发展和方法的成熟,近年来越来越多的法庭科学工作者开始关注泥土中微生物物证的检验分析。泥土是微生物的大本营,其中蕴含着极为丰富的微生物信息,这些微生物的种类和数量可以反映泥土的很多特征,如可能的来源区域及其气候特点与土地利用方式等。泥土微生物检验是一个新兴的物证研究方向,具有极大的应用潜力,集成有信息量巨大、区分精度高、检验所需样品量少等优点。通过泥土微生物的比对分析或来源推断,可为某些疑难案件侦破提供方向、线索或证据。本文就泥土微生物物证的特点、研究方法、应用价值等方面进行综述,并提出需要解决的问题,以期为进一步深入研究应用泥土微生物辅助破案提供借鉴与参考。

棉织物上血斑洗涤后无损取材方式及DNA提取方法研究

目的探究不同无损取材方式及DNA提取方法对棉织物上洗涤血斑DNA分析成功率的影响。方法采用棉签擦拭法、植绒拭子擦拭法、脱落细胞粘取器粘取法富集洗涤棉织物上的血痕。分别采用Chelex 100法、过柱法和磁珠法提取DNA。采用常规PCR和复合PCR技术扩增目标片段并分别运用琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳技术检测目标产物。结果植绒拭子擦拭法取材的效果最差,通过脱落细胞粘取器粘取法获得的DNA浓度、STR分型成功率均高于棉签擦拭法,且粘取法操作较简单,实践中优先推荐选择粘取法作为该类检材的取材方式。此外,DNA浓度和STR分型结果均表明过柱法提取DNA的效果优于Chelex法,而磁珠法在3种DNA提取方法中效果最差,建议实践中选择过柱法作为此类检材DNA提取的首选方法。结论针对棉织物检材上洗涤血痕无损取材及DNA分析,优先推荐选择脱落细胞粘取器粘取法和过柱法分别进行样本取材以及DNA提取。

降解生物检材DNA分析策略的研究进展

生物检材发生降解后的DNA分型是法医DNA领域的难题之一。本文对降解检材分析策略的研究进行综述。分析了目前常用的降解DNA分析方法与技术的优缺点,对近年来新出现的方法,如扩增前降解损伤DNA修复策略、扩增后纯化策略和核小体DNA策略做了介绍,希望能为降解生物检材DNA检验的研究和分析提供思路,为相关应用提供新方法的参考。

接触DNA在法医实践中的应用研究进展

人体在接触物体后,会在其表面留下少量接触DNA。对接触DNA的检验是目前法医DNA检验技术的热点和难点。接触DNA的检验成功率差异较大,受各环节多重因素影响。影响接触DNA检验成功率的主要因素有接触DNA检材的准确发现、接触DNA的提取与纯化以及扩增策略的选择和结果分析等。本文详述了接触DNA检验过程的进展及研究展望。

R语言在法庭科学DNA检验中的应用现状

本文综述了统计学分析软件R语言在法庭科学DNA检验中的主要应用内容,重点阐述了R语言拓展包在DNA混合物的统计学分析、DNA数据库分析、家系分析等研究方向的应用,并通过案例介绍各拓展包内主要函数的应用情况。最后,本文提出,相较于传统统计学软件,R语言在法庭科学DNA检验中应用优势将愈发明显。

烟头上脱落细胞3种DNA提取方法的比较

目的比较采用3种方法提取烟头上脱落细胞DNA的成功率,评价其应用价值。方法 91枚实际检案中积累的烟头,按过滤嘴的水松纸材质颜色分为深色(68枚)和浅色(23枚)两组;采用Chelex-100法、DNA-IQ磁珠法和骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱,提取烟头上的脱落细胞DNA;Identifiler-Plus试剂盒进行扩增、AB 3130x L型遗传分析仪及Gene Mapper ID-X v1.2基因软件进行检测,对两组检验成功率进行比较。结果采用Chelex-100法、磁珠法和联合纯化柱提取各组DNA的分型成功率在浅色组分别为:82.6%、91.3%和95.7%,不同方法之间比较无显著性差异(P>0.25);深色组分别为:60.3%、29.4%和91.2%,不同方法之间比较有显著性差异(P<0.01)。结论本文3种方法中,骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱方法更能适应不同材质过滤嘴外层纸上脱落细胞的DNA提取,可在相关检验中选择使用。