P2Z purinoceptor,a special receptor for apoptosis induced by ATP in human leukemic lymphocytes

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背根神经节嘌呤受体亚型P2X3R介导小鼠术后急—慢痛转化

目的探讨不同部位不同嘌呤受体亚型在小鼠切口术后痛转化中的作用差异。方法足底切口恢复后注射PGE_(2)构建术后痛转化模型。第一部分:C57BL/6小鼠随机分为对照(Con)组、假敏化(sHP)组、敏化(HP)组,检测机械痛阈、自发痛评分和焦虑样行为;Western blot检测患侧L 3-5背根神经节(DRG)和脊髓背角(SCDH)中P2X3R和P2X7R蛋白表达变化。第二部分:C57BL/6小鼠随机分为Con组、HP+生理盐水组、HP+P2X3R拮抗剂组或HP+P2X7R拮抗剂组,观察拮抗不同亚型嘌呤受体对小鼠机械痛阈的影响。结果与正常小鼠相比,切口痛小鼠注射PGE_(2)后机械痛阈明显下降,自发痛评分明显增加(P<0.05),未表现出焦虑样行为(P>0.05),且P2X3R蛋白在DRG中表达明显增多(P<0.05),在SCDH中未检出,而P2X7R蛋白在DRG和SCDH各组中表达均无差异(P>0.05)。拮抗P2X3R能阻断术后痛转化的产生,而拮抗P2X7R无明显影响。结论切口痛小鼠经PGE_(2)诱导可出现急慢性痛的转化,不伴发焦虑样情绪,DRG中P2X3R可能是参与术后痛转化的关键受体之一。

P2X嘌呤受体在大鼠膀胱ICCs细胞中的表达

目的探讨P2X嘌呤受体各亚型在大鼠膀胱ICCs细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)的表达及意义。方法制备SD大鼠膀胱组织铺片及冰冻切片,通过免疫荧光法检测大鼠膀胱组织内ICCs细胞分布情况,并进一步采用免疫荧光双标法检测ICCs细胞上P2X嘌呤受体各亚型的表达。结果SD大鼠膀胱中的ICCs细胞主要集中于黏膜下层、肌束边缘以及肌束间,并相互连接呈网络状分布。在7种P2X嘌呤受体亚型中,ICCs细胞上可检测到P2X2和P2X5两种亚型表达。结论大鼠膀胱ICCs细胞可表达P2X2和P2X5两种嘌呤受体亚型,从功能学上证实嘌呤能信号对ICCs细胞功能有影响。

电针百会、神庭穴对缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力及海马CA1区嘌呤受体P2X7表达的影响

目的观察电针百会、神庭穴对缺血再灌注损伤大鼠学习记忆功能的影响,并探究其可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠42只随机分为假手术组(n=12)和手术组(n=30)。手术组线栓法制备左侧大脑中动脉栓塞90 min再灌注模型,符合纳入标准的24只分为模型组(n=12)和电针组(n=12)。电针组电针百会、神庭共7 d。造模后2 h和干预后1 d、3 d、7 d,采用Longa神经行为学评分进行评定;干预后3 d起行Barnes迷宫实验检测,共5 d;干预7 d后,免疫荧光标记法检测缺血侧海马CA1区嘌呤受体P2X7的表达,酶联免疫吸附法检测海马CA1区白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果干预后7 d,与模型组相比,电针组Longa评分降低(P<0.05);与假手术组相比,模型组Barnes迷宫逃避潜伏期显著延长(P<0.001),进入错误洞口次数显著增多(P<0.001);与模型组相比,电针组逃避潜伏期显著缩短(P<0.001),进入错误洞口次数显著减少(P<0.001);与假手术组比较,模型组P2X7受体平均光密度,IL-1β、TNF-α水平均显著提高(P<0.001);与模型组相比,电针组P2X7受体表达,IL-1β、TNF-α水平减少(P<0.05)。结论电针百会、神庭穴能有效改善缺血再灌注损伤大鼠的学习记忆能力,可能与抑制海马CA1区嘌呤受体P2X7表达,改善缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区神经炎症反应有关。

从噬菌体抗体库中筛选血管内皮细胞新型嘌呤受体功能抗体的研究

目的筛选鉴定血管内皮细胞新型嘌呤受体功能性抗体,为进一步研究新型嘌呤受体提供标志物。方法大鼠血管内皮细胞蛋白质免疫BALB/c小鼠,采用噬菌体抗体库技术构建小鼠抗大鼠血管内皮细胞的单链噬菌体抗体库。利用新型嘌呤受体在主动脉内皮细胞表达而在血管平滑肌细胞不表达的特点,先用主动脉内皮细胞进行阳性筛选,再用血管平滑肌细胞进行阴性筛选,从噬菌体抗体库中富集主动脉内皮细胞特异抗体。对筛选到的抗体经可溶性表达后,采用离体血管环功能试验,筛选新型嘌呤受体特异单链抗体。采用免疫组化实验对筛选到的抗体进行鉴定。结果经过4次免疫后,小鼠血清抗内皮细胞蛋白的IgG效价为1∶16000,通过噬菌体表面呈现,得到小鼠抗大鼠内皮细胞免疫噬菌体抗体库容量为8×106。4轮主动脉内皮细胞阳性筛选及大鼠血管平滑肌细胞阴性筛选富集到约2500株主动脉内皮细胞特异抗体,可溶性表达后,在离体血管环上,经过4轮的逐级淘筛得到一株影响腺苷诱发NO依赖性血管收缩反应的功能性抗体ScFv-B,其抑制率为83.4%±21.6%。免疫组化鉴定此抗体与内皮细胞特异结合,功能性鉴定此抗体对腺苷诱发的肠肌收缩反应无影响,初步认为此抗体是新型嘌呤受体特异性功能抗体。结论本研究通过噬菌体抗体库的构建及抗体筛选和鉴定,得到了新型嘌呤受体特异性功能抗体ScFv-B,为进一步采用表达文库筛选的方法克隆新型嘌呤受体基因提供了良好的工具。

胞外ATP的作用、来源和命运

胞外ＡＴＰ（三磷酸腺苷）浓度的改变，影响许多重要的生理功能，诸如神经递质作用、血小板凝聚、血管紧张、心脏功能和肌肉收缩等等。胞外ＡＴＰ作为递质直接影响神经效应器接点和／或调制其它神经递质以及通过第二信使调节细胞活动，都是由膜上不同的ＡＴＰ受体（Ｐ２嘌呤受体）或ＡＴＰ激活的离子通道介导的。本文从胞外ＡＴＰ的递质作用的发现与确证，胞外ＡＴＰ的来源、ＡＴＰ的受体。

大鼠脑外伤时嘌呤受体P2X4受体的表达

目的:观察大鼠脑外伤后嘌呤受体亚型P2X4的表达水平。方法:免疫组织化学和半定量RT-PCR。结果:脑外伤后P2X4受体表达水平迅速升高,并在损伤后较长的时间内维持高的表达水平;脑外伤早期,损伤区P2X4免疫反应阳性细胞主要是圆形细胞,中后期主要以具有突起的细胞为主。结论:脑外伤早期,损伤区P2X4受体免疫反应阳性细胞主要为小胶质细胞,中后期可能星形胶质细胞为多;由此推测P2X4参与脑外伤时大脑生理或病理生理功能的调节。

P2X_2受体在大鼠胃肠系统肌间神经节中的分布

目的:研究P2X2受体在大鼠胃肠系统肌间神经节中的分布,为研究ATP作为神经递质对胃肠道肌间神经节节细胞的作用提供形态学基础。方法:免疫组织化学。结果:从胃到结肠均有P2X2受体阳性神经元和神经纤维分布,胃、小肠和结肠分别约60％、70％和50％的肌间神经节节细胞为P2X2受体阳性。结论:胃肠道系统多数肌间神经节节细胞都能通过ATP受体特别是P2X2受体对ATP产生反应。

大鼠三叉神经节神经元膜P2X嘌呤受体的特征

采用全细胞膜片钳技术研究了大鼠三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)神经元膜P2X嘌呤受体的特征。结果发现: 大部分受检细胞(78．9％,142／180)对ATP敏感,ATP-激活电流有明显的浓度依赖性。少数细胞无反应(21．1％,38／180)。在对ATP敏感的142个细胞中,绝大部分引起一内向电流(95．1％,135／142),少数为外向电流(2．1％,3／142),另有部分细胞出现双相电流(2．8％,4／142)。引起的内向电流在小直径细胞(<30μm)上多表现为快去敏感电流,对vanilloid高度敏感;在中等大小的细胞(30-40 μm)上多表现为慢去敏感电流,对vanilloid不敏感;绝大多数大细胞(>40 μm)对ATP和vanilloid均不敏感。此外,电流的波形与细胞直径密切相关。无论小细胞还是中等细胞其I-V曲线均表现出明显的内向整流趋势。我们还研究了ATP-激活电流的动力学特征,并观察了P2嘌呤受体激动剂、拮抗剂的效应。结果提示:不同类型的ATP受体- 离子通道在不同类型的TG神经元上的表达具有不同的特点。

P_(2)嘌呤受体的研究进展

P2 嘌呤受体最初被分为P2X和P2Y两种亚型 ,其后扩展到P2T、P2Z 和P2D亚型。 90年代发现 ,一些组织标本对UTP、ATP和ATPγS反应良好 ,而对α ,β MeATP和 2 MeSATP不敏感 ,此类受体被称为“P2U受体”。晚近又证明 ,存在一种对UTP敏感而对ATP不敏感的“嘧啶受体”。据此IUPHAR(Internationalunionofpharmacology)规定 ,任何被核苷酸激活的离子通道型和G蛋白偶联型受体的亚型均分别命名为P2Xn和P2Yn受体。随着分子生物学技术的发展以及上述受体的克隆和表达 ,此分类系统得到了有力的支持。

P2X_7受体对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的:探讨嘌呤受体P2X_7对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法:以小鼠视网膜神经节细胞株RGC-5为研究对象,按照不同处理因素将细胞随机分为4组:正常对照组(G1)、缺氧组(G2)、缺氧+激动剂(BzATP)组(G3)、缺氧+拮抗剂(BBG)组(G4);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率;用Annxin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,RGC-5细胞经缺氧处理后,细胞存活率明显降低;凋亡率显著升高;细胞内cleavecaspase-3和cleave-PARP蛋白表达增加;P2X_7受体激动剂BzATP能明显加重缺氧诱发的细胞凋亡,而BBG预处理可以显著拮抗缺氧所致的细胞凋亡。结论:缺氧能激活视网膜神经节细胞嘌呤受体P2X_7,并参与视网膜神经节细胞的凋亡。

氯胺酮对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X_4受体mRNA表达的影响

目的：研究氯胺酮对神经病理性疼痛大鼠脊髓P2X4受体mRNA表达的影响。方法：雄性SD大鼠45只,体重180-220g,随机分为假手术组（S组）、对照组（C组）和氯胺酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组（KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组）,每组9只。S组大鼠仅分离坐骨神经但不结扎,其余组建立坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）模型,KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组分别于CCI后3d开始至取材点每天腹腔注射氯胺酮5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg;S组和C组注射相同体积的生理盐水。各组大鼠分别于术前1d,术后3d、7d、14d、21d测定大鼠机械性痛觉过敏（MWT）和热痛觉过敏（TWL）。各组均分别于CCI术后7d、14d、21d取3只大鼠,测定痛阈后处死,取L4~5脊髓组织,用逆转录PCR（RT-PCR）方法测定P2X4受体mR-NA表达水平。结果：与术前及S组比较,C组、KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组术后3d开始热痛阈及机械痛阈显著降低（P〈0.05）。与C组比较,KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组术后7d,14d,21d热痛阈及机械痛阈显著升高（P〈0.05）。与S组比较,C组、KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠脊髓P2X4受体表达在术后7d、14d、21d均显著增加（P〈0.05）;与C组大鼠比较,KⅠ、Ⅱ、Ⅲ组脊髓P2X4受体表达明显减少（P〈0.05）。结论：腹腔注射氯胺酮可抑制慢性神经痛大鼠痛觉过敏,该作用可能是通过作用于P2X4受体介导的。

P2X受体对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩运动的影响

目的:探讨P2X受体激动剂α,β-methylene ATP (α,β-MeATP)对豚鼠胃窦环行肌运动的影响及其离子通道机制.方法:采用EWG/B豚鼠,制备去黏膜胃窦环行肌条(10×1.5 mm),并将其固定于恒温灌流槽内(37℃),用碳酸氢钠缓冲液连续灌流并通氧(950 mL/L O_2,50 mL/L CO_2).利用SMUP-E生物信号处理系统记录胃窦平滑肌自发性收缩活动,Ⅱ型胶原酶消化法分离豚鼠胃窦环行肌单细胞,传统全细胞膜片钳技术记录急性分离的胃窦平滑肌细胞膜电位和离子电流,包括钙激活钾电流、延迟整流型钾电流及电压依赖性钙电流.结果:嘌呤能P2X受体激动剂α,β-MeATP明显抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,并有明显的量效倚赖关系:5,10,20,40,100μmol/Lα,β-MeATP作用下,环行肌收缩幅度分别由对照组的100%下降到90%±2%.81%±4%,68%±4%,59%±7%和29%±4%(P<0.05).用神经阻断剂Tetrodotoxin (TTX)预处理后,α,β-MeATP对胃窦环行肌自发性收缩的抑制作用仍不受影响;在传统全细胞膜片钳电流钳模式下,500μmol/Lα,β-MeATP不影响细胞膜电位,也对两种外向钾电流,即延迟整流型钾电流和钙激活钾电流没有影响;不同浓度的α,β-MeATP对电压依赖性钙电流没有影响.结论:P2X受体激动剂抑制豚鼠胃窦环行肌自发性收缩,其作用机制不依赖内在神经,也不依赖细胞膜离子通道以及膜电位改变.

内分泌胰腺嘌呤受体研究的新进展

嘌呤受体分为腺苷作用的P1受体和ATP作用的P2受体两大类;P2受体又分为P2X(离子通道受体)和P2Y(G蛋白耦联受体)。多种嘌呤受体亚型表达于内分泌胰腺,并参与调节胰岛素的分泌。嘌呤受体和配体与糖尿病及其并发症的发病机制密切相关,并可能成为糖尿病及其并发症治疗的新靶点。

影响P2Z受体介导慢性淋巴细胞白血病细胞凋亡的各种因素及其机理研究

目的 探讨嘌呤能 P2 Z受体介导慢性淋巴细胞白血病 (CL L )细胞凋亡的影响因素及其机理。方法 在二价阳离子—— 1.0 mm ol/L Mg2 + 、Zn2 + 、Ca2 + 、Sr2 + 、Co2 + 、Ba2 + ,不同浓度的 EDTA或 EGTA,不同温度及在含 15 0 mm ol/L胆碱的介质中 ,将表达 P2 Z受体 [P2 Z(+) ]的 CL L细胞分别同 1.0 mm ol/L三磷酸腺苷 (ATP)或 0 .1m mol/L苯甲酰苯甲酸 ATP(Bz ATP)体外培养 8小时 ,以 DNA凝胶电泳、Td T法和流式细胞分析 (FCA )检测上述条件下细胞凋亡的诱导或抑制效应。结果 Mg2 + 或 Ca2 + 能以剂量依赖性方式促进 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡 ,而 EDTA或 EGTA却以相反的方式抑制 P2 Z(+)细胞凋亡的发生 ;1.0 mm ol/L Zn2 + 可完全阻止 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡所产生的 DNA片段 ,但其它二价阳离子包括 1.0 mm ol/L Sr2 + 、Co2 + 、Ba2 + 却不影响 ATP的诱导 ;胆碱作为磷脂酶 D(PL D)的抑制剂 ,也可部分抑制 P2 Z(+)细胞凋亡产生的 DNA片段 ;当温度低于 10℃ ,可完全阻止 ATP诱导 P2 Z(+)细胞凋亡产生 DNA片段的发生。结论 P2 Z受体介导 CL L细胞凋亡可能与核酸内切酶 ,PL D的参与密切相关。

川芎嗪对蟾蜍交感神经节细胞膜嘌呤受体介导反应的调制作用

采用细胞外微电极技术，记录离体灌流的蟾蜍椎旁交感神经节细胞膜电位，观察川芎嗪对嘌呤受体介导反应的调制作用。三磷酸腺苷（３００μｍｏｌ／Ｌ）可引起神经节细胞膜去极化（ｎ＝６２）、超极化反应（ｎ＝２７）以及去极化之后伴随超极化过程的双相反应（ｎ＝９）。Ｐ２受体拮抗剂台盼蓝（５００μｍｏｌ／Ｌ）可抑制三磷酸腺苷的去极化反应（ｎ＝８）；Ｐ１受体拮抗剂氨茶碱（２００μｍｏｌ／Ｌ）可抑制三磷酸腺苷的超极化反应（ｎ＝７）。滴加川芎嗪（１～５ｍｍｏｌ／Ｌ），神经节细胞膜未出现明显的电位变化。外源性环－磷酸腺苷（２５０μｍｏｌ／Ｌ）可模拟三磷酸腺苷的超极化反应（ｎ＝９）。川芎嗪（３ｍｍｏｌ／Ｌ）可抑制三磷酸腺苷的去极化反应，使其幅值减少５３９±９５％（ｎ＝１４，Ｐ＜００１），并能加强三磷酸腺苷所致超极化反应，使其幅值增大１０５４±２４５％（ｎ＝１２，Ｐ＜００１）。在同一标本上，川芎嗪使环一磷酸腺苷的超极化反应加强（ｎ＝４）。此外，川芎嗪可抑制三磷酸腺苷引起的双相反应中的去极相，而增大其后的超极相（ｎ＝３）。

长期限食对大鼠尾动脉P_2X_1受体和α_1受体介导血管收缩反应的影响

目的研究长期限食对大鼠尾动脉P2X1受体和α1受体介导血管收缩反应的影响。方法将Wistar大鼠分为对照组和限食组,对照组大鼠自由饮食,限食组大鼠每天给予正常日饮食量的50%,3周后制备大鼠离体尾动脉环标本,记录α,β-亚甲基ATP(α,β-MeATP)和去甲肾上腺素(NA)诱发的等长收缩反应。结果与对照组比较,长期限食后α,β-MeATP和NA诱发大鼠尾动脉的收缩反应明显增强(P<0.01),10-4mol/Lα,β-MeATP和NA诱发的收缩反应与对照组相比,分别增大了34.01%和25.85%。限食前后α,β-MeATP和NA诱发最大收缩反应的比值分别为0.78和0.83,两种血管激动剂的半数有效浓度值在限食前后均无明显改变(P>0.05)。结论长期限食明显增强大鼠尾动脉P2X1受体和α1受体介导的收缩反应,但对两种激动剂的受体结合率、两种受体介导最大收缩反应的比值以及血管的肌性收缩反应无明显影响。

P2嘌呤受体亚型与冠心病的关系

嘌呤受体包括P1受体和P2受体。本文综述了P2嘌呤受体的多个亚型与冠心病之间的关系,P2Y1、P2Y2、P2Y11和P2X7受体参与动脉粥样硬化斑块中的炎性反应,P2X3受体参与了心绞痛的伤害性反应,P2X4受体参与血管重塑和增强非梗死区心肌的收缩力,P2Y2和P2Y6受体与冠脉介入术后再狭窄的形成有关,P2Y11受体的多态性可增加心肌梗死的风险,P2Y1、P2Y12和P2X1受体则参与了血栓的形成。研制P2嘌呤受体各亚型特异性的激动剂和拮抗剂对开发治疗冠心病的新药具有重要意义。

嘌呤P_2受体激动剂ATP对血管张力的调节作用

目的：研究嘌呤Ｐ２受体激动剂ＡＴＰ对血管张力的影响及其药理学特征。方法：大鼠离体主动脉环实验。结果与结论：大鼠主动脉的内皮细胞和平滑肌细胞分别存在Ｐ２ｘ和Ｐ２ｙ受体，ＡＴＰ对血管张力产生的影响取决于血管所处的张力状态：内皮细胞完整的大鼠离体主动脉标本处于收缩状态时，ＡＴＰ通过激活内皮细胞的Ｐ２ｙ受体，诱发内皮依赖性舒血管反应；去除内皮细胞的大鼠离体主动脉标本处于静息状态时，ＡＴＰ作用于血管平滑肌细胞的Ｐ２ｘ受体，诱发非内皮依赖性血管收缩反应。

炎症性肠病患者P2X7嘌呤受体及肥大细胞类胰蛋白酶表达研究

目的探讨P2X7嘌呤受体及肥大细胞类胰蛋白酶在炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)患者肠组织及血清中的表达及临床意义。方法收集2016年12月至2018年3月于郑州大学第二附属医院住院的80例活动期IBD患者的肠组织活检石蜡包埋标本、血清样本及粪钙卫蛋白(FC)结果,其中溃疡性结肠炎(UC)患者58例,包括轻度活动性患者15例,中度活动性患者20例,重度活动性患者23例;克罗恩病(CD)患者22例,包括轻度活动性患者7例,中度活动性患者7例,重度活动性患者8例。另外收集40例结直肠癌患者行外科手术切除的正常断端肠组织作为对照,40名健康志愿者的血清样本作为对照。采用免疫组织化学法检测肠组织中P2X7嘌呤受体的表达,ELISA法检测血清类胰蛋白酶的含量。结果轻、中、重度UC组P2X7嘌呤受体的表达均高于对照组(χ~2=7.062,P=0.008;χ~2=18.983,P<0.05;χ~2=32.216,P<0.05),且重度UC组高于轻度UC组(χ~2=7.242,P=0.007)。轻、中、重度CD组P2X7嘌呤受体的表达高于对照组(χ~2=5.223,P=0.022;χ~2=5.223,P=0.022;χ~2=11.161,P=0.001),CD各亚组比较差异无统计学意义(P>0.05)。类胰蛋白酶在各组血清中的表达差异有统计学意义(P<0.001),IBD组高于对照组,且重度IBD组高于轻、中度IBD组。另外,P2X7嘌呤受体与类胰蛋白酶呈显著正相关(UC:r=0.872,P<0.05;CD:r=0.866,P<0.05)。P2X7嘌呤受体与FC呈正相关(r=0.543,P<0.05)。结论 P2X7嘌呤受体可能通过激活肥大细胞增加类胰蛋白酶的表达参与IBD的发生和发展,检测其变化对疾病严重程度的评估具有重要临床意义。