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基于Pushover方法的耗能自复位铰节点框架结构抗震性能分析
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作者 鲁亮 颜浩天 叶雨立 《东南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第3期608-615,共8页
基于Pushover分析方法研究设置耗能自复位铰节点(EDSC-HJ)的钢筋混凝土框架结构的抗震性能.首先介绍EDSC-HJ框架的结构形式,并建立了EDSC-HJ框架结构的有限元模型,通过与振动台试验结果对比验证数值模拟的正确性;其次使用Pushover方法计... 基于Pushover分析方法研究设置耗能自复位铰节点(EDSC-HJ)的钢筋混凝土框架结构的抗震性能.首先介绍EDSC-HJ框架的结构形式,并建立了EDSC-HJ框架结构的有限元模型,通过与振动台试验结果对比验证数值模拟的正确性;其次使用Pushover方法计算EDSC-HJ框架有控结构与无控结构的抗震性能并设计节点弹性恢复装置和耗能装置的力学参数.结果表明:EDSC-HJ框架结构节点相对转动刚度比的合理取值区间为0.05~0.5;设置节点阻尼器的EDSC-HJ有控结构的层间位移响应下降了76%,且满足限值要求;由于节点阻尼器的设置提高了结构的附加抗侧刚度,有控结构的基底剪力响应提高了23%.EDSC-HJ框架结构的抗震性能明显优于钢筋混凝土框架(RCF)结构,具有良好的韧性结构特征. 展开更多
关键词 pushover分析 抗震性能 耗能自复位铰节点 有限元模型 阻尼器
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猪流行性腹泻病毒nsp1、nsp5和N蛋白的重组腺病毒载体的构建及免疫原性比较 被引量:1
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作者 杨霞 王爽云 +8 位作者 于林洋 徐舸 郑继豪 王志朋 张歆明 刘燕玲 张乐宜 徐铮 宋长绪 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期73-78,共6页
为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将... 为研究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)nsp1、nsp5和N蛋白的免疫原性,试验以复制缺陷型人腺病毒5型(AdMax系统)为载体,利用PEDV-GDgh毒株(登录号为MG983755),通过PCR方法扩增出GDgh毒株nsp1、nsp5、N基因,并将其连接到腺病毒穿梭载体上,构建重组穿梭质粒。将3个重组穿梭质粒和腺病毒骨架载体共转染至HEK-293A细胞中获得第1代重组腺病毒,分别命名为rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N。用第1代3株重组腺病毒接种HEK-293A细胞,连续传代,通过RT-PCR和Western-blot方法鉴定第3代重组腺病毒,并采用Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID_(50))。以3株重组腺病毒的第3代病毒液免疫小鼠,收集血清并检测特异性IgG抗体水平。结果表明:试验成功构建出带有nsp1、nsp5、N基因的重组穿梭质粒;分别用重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N感染正常HEK-293A细胞,可产生典型的细胞病变并观察到荧光信号;目的基因正常转录后得到的目的蛋白可正确表达;3株重组腺病毒rAd-nsp1、rAd-nsp5、rAd-N的TCID_(50)依次为1×10^(-8.35)/mL、1×10^(-8.50)/mL、1×10^(-7.66)/mL;免疫小鼠后均可产生针对目的蛋白的特异性抗体。说明试验成功构建的3株正常表达目的蛋白的重组腺病毒均具有免疫原性。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) nsp1基因 nsp5基因 N基因 重组腺病毒 免疫原性 构建 鉴定
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PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响
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作者 康磊 刘珂 +8 位作者 王建忠 尹才 邱亚峰 魏建超 李蓓蓓 邵东华 李宗杰 粟硕 马志永 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期507-514,共8页
[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... [目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。 展开更多
关键词 PRRSV nsp4 Β2M 反向遗传平台 突变毒株
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猪丁型冠状病毒NSP14蛋白截短表达及其间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 刘思雨 何颖 +6 位作者 卢冰霞 赵武 赵硕 许心婷 全琛宇 秦毅斌 欧阳康 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1238-1248,共11页
【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDC... 【目的】进行猪丁型冠状病毒(PDCoV)NSP14蛋白截短原核表达,制备PDCoV NSP14蛋白的多克隆抗体,并建立检测PDCoV抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),为探究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断提供参考依据。【方法】以PDCoV 1468B毒株为模板,构建NSP14截短基因原核重组质粒pET32a-NSP14,经双酶切和测序鉴定后,通过原核表达系统获得NSP14融合蛋白,将其纯化后免疫新西兰大白兔获得NSP14蛋白的多克隆抗体,进行Western blotting验证,并用间接ELISA测定其效价。以NSP14融合蛋白为抗原包被酶标板,采用方阵滴定法优化一系列反应条件,构建检测PDCoV抗体的间接ELISA。【结果】在构建的pET32a-NSP14重组质粒中,NSP14蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,其大小约40.2 kD;制备的NSP14蛋白多克隆抗体效价在1∶512000以上,经Western blotting验证,能与纯化的NSP14融合蛋白发生特异性反应。经过筛选,确定所构建检测PDCoV抗体间接ELISA的最佳反应条件:NSP14融合蛋白最佳包被浓度为4.0μg/mL,包被条件为37℃、2.0 h;封闭条件为5%脱脂奶粉封闭1.0 h;待检血清按1∶400稀释,孵育2.0 h;酶标二抗1∶2500稀释,孵育60.0 min;TMB底物显色时间为30.0 min。特异性试验结果表明,猪病阳性血清PRRSV、JEV、PCV2、PPV、PEDV和CSFV的OD450均小于0.235,说明优化的间接ELISA检测的病原与其他猪病毒阳性血清无反应,特异性良好。重复性试验结果表明,优化的间接ELISA检测猪病阳性血清的批内和批间变异系数均小于10.000%,说明优化的ELISA具有较好的重复性。【结论】成功制备具有高效价和良好免疫反应性的PDCoV NSP14蛋白多克隆抗体,并建立检测该抗体的特异性、敏感性和重复性良好的间接ELISA,可供进一步研究PDCoV NSP14蛋白的生物学功能及进行PDCoV监测和诊断参考应用。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 nsp14蛋白 原核表达 多克隆抗体制备 间接ELISA
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猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备
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作者 陈东奇 郑殿重 +11 位作者 魏志颖 王莹 李佳璇 崔文 姜艳平 王晓娜 周晗 王丽 乔薪瑗 李一经 唐丽杰 单智夫 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期91-97,共7页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 nsp6基因 多克隆抗体 分段表达 真核表达
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高桩结构Pushover抗震分析关键参数及规定
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作者 林岳 索云飞 肖仕宝 《港口航道与近海工程》 2024年第3期53-56,81,共5页
本文以某海外工程强震区的高桩结构为例,基于PIANC和ASCE/COPRI 61-14、POLB等现行国际抗震设计规范,总结了在实际Pushover抗震分析过程中如何应用国际规范确定动力放大系数、容许应变限值、材料期望性能、塑性铰长度等关键参数和如何考... 本文以某海外工程强震区的高桩结构为例,基于PIANC和ASCE/COPRI 61-14、POLB等现行国际抗震设计规范,总结了在实际Pushover抗震分析过程中如何应用国际规范确定动力放大系数、容许应变限值、材料期望性能、塑性铰长度等关键参数和如何考虑P-delta效应、地震荷载组合、地震质量等相关规定,可为类似项目的设计提供参考。 展开更多
关键词 高桩结构 抗震pushover分析 国际规范 关键参数
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猪流行性腹泻病毒解旋酶Nsp13表达纯化及其RNA解旋活性鉴定
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作者 沈熹涓 姬晶晶 +3 位作者 金慧琴 李宇哲 刘斐 单衍可 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第1期33-38,共6页
旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱... 旨在可溶性表达并纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)解旋酶Nsp13,并验证表达纯化得到的PEDV Nsp13蛋白具有RNA解旋活性。将pET28a(+)-PEDV Nsp13重组质粒转化到大肠杆菌Transetta(DE3)感受态细胞中,利用终浓度0.5 mmol/L的IPTG在18℃条件下诱导16 h,收集诱导后的菌体,超声破碎并收集其上清液,通过镍亲和层析技术获得纯化后的PEDV Nsp13;设计RNA底物,并建立体外解旋反应体系,验证蛋白的RNA解旋活性,并在相同时间内探究不同温度条件下PEDV Nsp13蛋白对RNA的解旋情况,进一步验证其活性。结果表明,在大肠杆菌系统中可溶性表达了PEDV Nsp13蛋白,纯化后蛋白浓度可达0.9 mg/mL;通过体外解旋试验,验证了PEDV Nsp13蛋白具有ATP依赖的RNA解旋酶活性,并发现PEDV Nsp13蛋白的RNA解旋酶活性在一定范围内随解旋温度的升高而提高。本研究结果为进一步深入研究PEDV Nsp13的RNA解旋作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 PEDV nsp13 可溶性表达 蛋白纯化 RNA解旋活性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因研究进展 被引量:1
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作者 张航 沙惠阳 +1 位作者 黄良宗 赵孟孟 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期214-221,共8页
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(NSP2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对NSP2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细... 猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种烈性传染病。PRRSV的非结构蛋白2(NSP2)编码一个多功能蛋白,具有广泛生物学作用。本文对NSP2遗传变异分析,与自身病毒蛋白互作,与宿主蛋白互作,影响PRRSV复制、毒力、细胞噬性,调节宿主免疫以及在疫苗应用等相关研究进行综述,为深入研究PRRSV致病机理和疫苗设计提供重要理论基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因 致病机理 疫苗研究
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猪流行性腹泻病毒Nsp7基因真核表达载体的构建及表达
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作者 魏佳琪 高振秋 +6 位作者 郑亮 牛欣雨 武峰峰 吴春宇 王志昊 张华 曹宏伟 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期91-97,共7页
PEDV Nsp7蛋白是猪流行性腹泻病毒的一种非结构蛋白,它在病毒复制过程中表达,并与感染细胞的内质网和细胞膜相关,是病毒基因组翻译的两个大型复制酶的关键辅助因子。为了对PEDV Nsp7蛋白进行更加深入的研究,试验从病变猪小肠中提取总RNA... PEDV Nsp7蛋白是猪流行性腹泻病毒的一种非结构蛋白,它在病毒复制过程中表达,并与感染细胞的内质网和细胞膜相关,是病毒基因组翻译的两个大型复制酶的关键辅助因子。为了对PEDV Nsp7蛋白进行更加深入的研究,试验从病变猪小肠中提取总RNA,并通过RT-PCR扩增获取PEDVNsp7基因,最终将其连接到pCMV-Myc载体上。试验结果显示,成功构建了pCMV-Myc-Nsp7的重组质粒,并通过Western Blot技术和免疫荧光技术在真核细胞中验证了其蛋白表达情况,为后续研究PEDV Nsp7的生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 nsp7基因 真核表达载体 蛋白表达
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新型冠状病毒Nsp1基因真核表达载体的构建及对宿主蛋白质翻译的影响
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作者 王宏宇 田志飘 +8 位作者 刘红线 郑亮 于雯 吴志军 Matthew Kay 高振秋 曹宏伟 耿荣庆 张华 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第1期84-90,共7页
非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成... 非结构蛋白1(Non-structural protein 1,Nsp1)作为新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)的毒力决定因子,在调控冠状病毒复制方面有重要作用。为更有效地研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的生物学功能,成功构建SARS-CoV-2Nsp1基因的真核表达载体,并验证其抑制宿主及外源蛋白质翻译的功能。通过PCR技术扩增SARS-CoV-2Nsp1基因后,利用同源重组技术将其连接至pEGFP-N1载体上。经双酶切和测序结果鉴定,SARS-CoV-2Nsp1基因成功克隆至pEGFP-N1载体上。将重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1转染至HEK-293T细胞和HeLa细胞中,经嘌呤霉素标记后,利用Western Blot和考马斯亮蓝染色检测重组质粒的表达以及嘌呤霉素信号。结果表明,重组质粒pEGFP-N1-SARS-CoV-2-Nsp1在HEK-293T细胞和HeLa细胞中成功表达,并验证其抑制宿主蛋白质和外源转入细胞蛋白质的翻译,为更深入研究SARS-CoV-2 Nsp1蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 nsp1基因 真核载体构建 蛋白翻译
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Nonlinear Pushover Analysis of the Influences on RC Footing for the External Elevator Well
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作者 Mo Shi Xiaoyan Xu Yeol Choi 《Open Journal of Applied Sciences》 2024年第7期1823-1842,共20页
In contemporary society, reducing carbon dioxide emissions and achieving sustainable development are paramount goals. One effective approach is to preserve existing RC (Reinforced Concrete) buildings rather than demol... In contemporary society, reducing carbon dioxide emissions and achieving sustainable development are paramount goals. One effective approach is to preserve existing RC (Reinforced Concrete) buildings rather than demolishing them for new construction. However, a significant challenge arises from the lack of elevator designs in many of these existing RC buildings. Adding an external elevator becomes crucial to solving accessibility issues, enhancing property value, and satisfying modern residential buildings using convenient requirements. However, the structural performance of external elevator wells remains understudied. This research is designed by the actual external elevator project into existing RC buildings in Jinzhong Rd, Shanghai City. Specifically, this research examines five different external elevator wells under nonlinear pushover analysis, each varying in the height of the RC (Reinforced Concrete) footing. By analyzing plastic hinge states, performance points, capacity curves, spectrum curves, layer displacement, and drift ratio, this research aims to provide a comprehensive understanding of how these structures of the external elevator well respond to seismic events. The findings are expected to serve as a valuable reference for future external elevator projects, ensuring the external elevator designs meet the seismic requirements. By emphasizing seismic resistance in the design phase, the research aims to enhance the overall safety and longevity of external elevator systems integrated into existing RC buildings. 展开更多
关键词 Nonlinear pushover Analysis External Elevator Existing RC Buildings RC Footing Sustainable Development
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Innovative COVID-19 Screening: RT-LAMP Assay for Spike and NSP1 Proteins
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作者 Muhammad Yousaf Amber Khan 《Journal of Clinical and Nursing Research》 2024年第6期256-265,共10页
Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and... Coronavirus disease(COVID-19)is a serious respiratory disease that spreads through the coronavirus globally.It soon became a pandemic after its appearance in 2019 and demanded new techniques for its identification and detection.Owing to this situation,RT-LAMP appears to be a novel method for the identification of COVID-19 because of its vast applications,including cost-effectiveness and time-saving.This research highlights the use of RT-LAMP,a more sensitive test than RT-PCR,for the assessment of SARS-CoV-2,the severe acute respiratory illness.To identify the spike(S)and NSP1 protein using RT-LAMP,170 total samples of coronavirus-suspected patients were served in this research.Health certifications and bioethical considerations were taken into consideration.After the sample was extracted from the patient's swabs,RNA was isolated,extracted,and purified.The response was then run on the RT-LAMP at the ideal temperature,and the outcomes could be observed with the unaided eye as they changed from pink to yellow.It is a simple method of determining if the test is positive or negative.For this purpose,both RT-LAMP and RT-PCR tests are used during these procedures.Genes linked with COVID-19 testing including S,nspl,and ORF are suited to coronavirus testing;they have 100%specificity and low sensitivity,but S has more specificity and sensitivity than nspl and ORF,respectively.Out of the 95 positive samples,89(93.68%)samples yielded favorable outcomes utilizing RT-LAMP,while 55 negative samples yielded 100%positive results.The present research demonstrates that RT-LAMP is less sensitive yet more selective for coronavirus detection. 展开更多
关键词 COVID-19 nsp1 SPIKE RT-LAMP
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基于NSP联合Mini-CEX模式对精神科护生实习能力和自我效能感的影响
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作者 温萌 王佳佳 《中文科技期刊数据库(文摘版)教育》 2024年第4期0024-0027,共4页
探究基于护士标准化病人(NSP)联合迷你临床演练评估(Mini-CEX)模式对精神科护生实习带教和自我效能感的影响效果。方法 采用随机抽样法,选取徐州医科大学护理学院2022年3月-2023年4月期间在本院实习的护生共67人,对照组34人采用传统精... 探究基于护士标准化病人(NSP)联合迷你临床演练评估(Mini-CEX)模式对精神科护生实习带教和自我效能感的影响效果。方法 采用随机抽样法,选取徐州医科大学护理学院2022年3月-2023年4月期间在本院实习的护生共67人,对照组34人采用传统精神科教学模式实习带教,研究组33人采用NSP联合Mini-CEX模式实习带教,实习结束后对两组从教学目标完成度、理论知识掌握度及技术操作提升度进行综合考核评价,两组采用一般自我效能感量表评估执行能力等指标。结果 研究组护理问诊、查体、诊断、措施、健康咨询、人文关怀、组织效能和整体评价考核成绩均高于对照组(P<0.05),研究组自我效能感较对照组显著提升(P<0.01),其中健康咨询、人文关怀以及组织效能与自我效能感有显著正相关性(P<0.01)。结论 基于护士标准化病人联合Mini-CEX模式可以实现教学、考核与评估的一体化,提高精神科护生实习带教质量,提升其综合临床护理服务能力;利用护士标准化病人基本杜绝传统标准化病人的伦理问题,更具实用性和科学性,提高实习带教整体满意度,值得持续推广与应用。 展开更多
关键词 nsp MINI-CEX 精神科护生 实习能力 自我效能感
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盖塔病毒非结构蛋白NSP1多克隆抗体的制备及鉴定
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作者 张洁 李超凡 +1 位作者 翟晓风 粟硕 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第3期79-83,共5页
试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达... 试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达。纯化原核表达的目的蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备了NSP1蛋白的多克隆抗体,间接ELISA效价达1∶10^(5)以上。Western blot和免疫荧光试验(IFA)结果显示,NSP1蛋白多克隆抗体与GETV有良好的反应性。NSP1蛋白多克隆抗体的制备,为进一步研究该蛋白在盖塔病毒复制周期中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 多克隆抗体 nsp1基因 非结构蛋白 盖塔病毒
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基于盖他病毒nsP3基因的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:2
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作者 魏新宇 王铭 +3 位作者 杜炳辰 史智宾 杨德成 王靖飞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期910-915,929,共7页
为建立一种灵敏、特异且高效的检测盖他病毒(GETV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,本研究根据GETV的nsP3基因设计特异性引物及探针,以GETV (SC483株) cDNA作为模板,扩增目的基因并克隆至p ET-29a载体中,构建重组质粒标准品p ET29a-nsP3并经... 为建立一种灵敏、特异且高效的检测盖他病毒(GETV)的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,本研究根据GETV的nsP3基因设计特异性引物及探针,以GETV (SC483株) cDNA作为模板,扩增目的基因并克隆至p ET-29a载体中,构建重组质粒标准品p ET29a-nsP3并经PCR和测序鉴定。基于该质粒标准品,采用方阵法优化引物、探针浓度以及退火温度,初步建立了一种基于GETV nsP3基因的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,并绘制标准曲线。以GETV (SC483株、SC266株)、辛德毕斯病毒(SINV)、猪流感病毒(H3N2、SIV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)等病毒的基因组RNA反转录为cDNA作为模板,利用本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法检测,结果显示,仅GETV为阳性,SINV、SIV、TGEV、PEDV、PRRSV均为阴性,表明该方法特异性较强;分别以10倍倍比稀释(3.07×10^(-1)拷贝/μL~3.07×10^(8)拷贝/μL)的重组质粒标准品p ET29a-nsP3作为模板,利用本研究建立的方法和普通RT-PCR方法分别检测,结果显示,本研究建立的方法对重组质粒标准品的检测限为30.7拷贝/μL,敏感性是普通RT-PCR的100倍,敏感性较高;分别以同一时间及不同时间提取的不同浓度的质粒标准品作为模板,利用本研究建立的荧光定量RT-PCR进行组内与组间的重复性试验检测,结果显示,该方法的组内组间变异系数均小于2%,重复性较好。利用本实验建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法与普通RT-PCR方法分别对来源于GETV感染小鼠的84份组织样品中的病毒核酸进行检测,结果显示,该TaqMan荧光定量RT-PCR方法对GETV检出率为95.24%(80/84),而普通RT-PCR对GETV的检出率为67.86%(57/84)。二者的阳性符合率达100%。本研究首次基于GETV nsP3基因建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为GETV的检测提供了有效工具。 展开更多
关键词 盖他病毒 荧光定量RT-PCR nsp3 检测方法
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基于改进Pushover方法的自升式平台极限承载力研究
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作者 王晨思 杨树耕 +1 位作者 张德瑞 朱本瑞 《船舶工程》 CSCD 北大核心 2023年第8期142-147,共6页
针对自升式平台在海上石油开采中面临的安全问题,以某自升式平台为例,基于ANSYS有限元软件,以载荷重现期作为环境载荷施加的变量,采用改进的非线性推覆方法对平台在极端环境作用下极限承载力与失效模式进行分析。结果表明:甲板上浪载荷... 针对自升式平台在海上石油开采中面临的安全问题,以某自升式平台为例,基于ANSYS有限元软件,以载荷重现期作为环境载荷施加的变量,采用改进的非线性推覆方法对平台在极端环境作用下极限承载力与失效模式进行分析。结果表明:甲板上浪载荷是影响平台倒塌的重要因素,不同入射工况下平台的倒塌模式均为桩腿的中下部斜撑结构形成塑性铰,塑性失效位置以及3条桩腿的塑性失效程度取决于入射角度。以环境重现期为标准对平台环境承载力进行分析,可为自升式平台极限性能与弱点位置的分析提供参考。 展开更多
关键词 深水自升式平台 改进的pushover 极限承载力 失效模式
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多地震动作用下地下结构Pushover分析法研究
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作者 蒋家卫 荀郑 +1 位作者 赵凯 许紫刚 《震灾防御技术》 CSCD 北大核心 2023年第1期20-26,共7页
求解多地震动作用下结构响应均值与标准差是地震易损性分析的基础工作。在地下结构Pushover分析法的基础上,提出间接计算结构在多地震动作用下均值响应的求解方法,即间接求解法(Indirectly Solution Average,ISA)。该方法以多地震动作... 求解多地震动作用下结构响应均值与标准差是地震易损性分析的基础工作。在地下结构Pushover分析法的基础上,提出间接计算结构在多地震动作用下均值响应的求解方法,即间接求解法(Indirectly Solution Average,ISA)。该方法以多地震动作用下自由场响应均值为目标位移,采用倒三角荷载分布模式,经1次Pushover分析得到结构响应均值。采用ISA计算得到不同地震动强度(调幅12个强度等级)下地铁车站结构层间位移响应均值与标准差。将ISA计算结果与先进行地下结构Pushover分析,然后求取响应均值与标准差的直接求解法计算结果进行比较,可知2种方法得到的结构层间位移响应均值误差<2%,标准差误差基本<10%,验证了ISA计算精度,可为地下结构基于性能的抗震设计概率地震需求模型计算提供快速分析方法。 展开更多
关键词 地下结构 pushover 分析 地震动 地震易损性 层间位移
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带PEC柱的钢框架结构Pushover分析 被引量:2
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作者 夏远洋 孙海峰 王延凯 《科技和产业》 2023年第6期180-186,共7页
对于多高层建筑而言,部分外包混凝土柱(PEC柱)是非常理想的边缘约束构件。为探究带PEC柱钢框架结构的力学性能,采用OpenSees有限元软件建立8层及12层共12个带PEC柱钢框架结构模型算例并进行Pushover分析。通过软件模拟分析,得到PEC柱内... 对于多高层建筑而言,部分外包混凝土柱(PEC柱)是非常理想的边缘约束构件。为探究带PEC柱钢框架结构的力学性能,采用OpenSees有限元软件建立8层及12层共12个带PEC柱钢框架结构模型算例并进行Pushover分析。通过软件模拟分析,得到PEC柱内填混凝土等级和型钢板件的厚度变化对整体结构力学性能各个指标的影响。分析表明,在型钢钢柱中灌入混凝土提高了结构的抗侧刚度、延性及承载能力,PEC柱相关参数的变化对结构底部的影响程度大于结构顶部。 展开更多
关键词 PEC柱 多层钢结构 pushover分析 力学性能
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基于Pushover方法的漫滩软土区地铁车站抗震分析
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作者 姚任行 涂智溢 +3 位作者 王仰君 蒋家卫 吴琪 张江伟 《震灾防御技术》 CSCD 北大核心 2023年第3期614-619,共6页
为研究地下结构Pushover分析方法在不同条件下的适用性,基于有限元软件平台,建立长江漫滩区地铁车站土-结构二维有限元分析模型,分别采用非线性动力时程分析方法与地下结构Pushover分析方法对5种不同土体刚度模型进行抗震分析。峰值层... 为研究地下结构Pushover分析方法在不同条件下的适用性,基于有限元软件平台,建立长江漫滩区地铁车站土-结构二维有限元分析模型,分别采用非线性动力时程分析方法与地下结构Pushover分析方法对5种不同土体刚度模型进行抗震分析。峰值层间位移角与峰值内力的分析结果表明,当土体刚度与结构刚度一致时,地下结构Pushover分析方法计算结果与非线性动力时程分析方法计算结果相近,而当土体刚度小于结构刚度或土体刚度大于结构刚度时,Pushover分析方法计算精度下降。 展开更多
关键词 地下结构 pushover分析方法 土体刚度 抗震分析 长江漫滩区
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轮状病毒NSP4胞质区在杆状病毒系统的表达及其黏膜佐剂效应评价
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作者 谢力 曾韦锟 +5 位作者 李臣 孔璟 王纪爱 陈伟伟 李鸿钧 孙茂盛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期917-921,927,共6页
目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体... 目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体介导Bac-NSP4-CF转染sf9细胞,收获细胞并传代培养。测定病毒滴度,Western blot检测目的蛋白表达情况。纯化后的重组NSP4-CF与卵清蛋白(OVA)滴鼻共免疫小鼠,并检测其黏膜免疫佐剂效应。结果:在杆状病毒系统中成功获取了NSP4-CF重组蛋白,Western blot检测可见约16 kD的特异性条带;重组NSP4-CF与OVA共免疫小鼠后,小鼠血清OVA特异性IgG、IgA抗体水平与肠道SIgA水平较OVA单独免疫组均有升高(P<0.05);ELISPOT检测结果表明NSP4-CF佐剂组(5μg)分泌IFN-γ的脾细胞平均数均高于OVA组(P<0.05)。结论:经昆虫细胞表达系统可获得RV NSP4胞质区(47~175 aa)重组蛋白,该蛋白与模式抗原经黏膜途径免疫小鼠具有增强系统免疫应答与黏膜免疫应答的佐剂活性,为进一步研究RV-NSP4佐剂活性区域及其分子机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 佐剂 轮状病毒 nsp4胞质区 杆状病毒 黏膜免疫
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