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临床分离鸡毒支原体粘附素蛋白编码基因pvpA的分子特征 被引量:11
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作者 陈继荣 曾振灵 +3 位作者 邓碧琴 阎化领 李旭宁 蒋红霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期2467-2473,共7页
【目的】探讨中国临床分离鸡毒支原体粘附素蛋白(PvpA)编码基因pvpA的分子特征,为进一步了解鸡毒支原体致病机制、建立新的鉴别诊断方法奠定基础。【方法】利用巢式PCR法对41株广东、四川和北京地区临床分离的鸡毒支原体和3株参考株的p... 【目的】探讨中国临床分离鸡毒支原体粘附素蛋白(PvpA)编码基因pvpA的分子特征,为进一步了解鸡毒支原体致病机制、建立新的鉴别诊断方法奠定基础。【方法】利用巢式PCR法对41株广东、四川和北京地区临床分离的鸡毒支原体和3株参考株的pvpA基因进行扩增并测序,分析中国临床分离株pvpA的基因变异特征。【结果】所有临床分离株pvpA基因分子特征与强毒株S6,BG44T一致,与疫苗株F36完全不同。临床分离株pvpA基因C-末端DR-1、DR-2区域(第670位~第1056位)GC的含量为53.52%,明显高于鸡毒支原体的平均GC含量;所有临床分离株及S6、BG44T在DR-1和DR-2之间丢失60个碱基。推测该区域编码的氨基酸序列富含脯氨酸,高达30.27%;重复四肽Pro-Arg-Pro-X共出现10次,X为甲硫氨酸6次、甘氨酸1次、天冬酰胺1次、谷氨酰胺2次。而疫苗株F36PvpA只有DR-1区域,与R株相比间隔25肽缺失了24个肽,DR-2区域全部丢失。【结论】临床分离株pvpA基因变异特征与强毒株S6一致,与疫苗株F36的变异特征有显著差异,可以把pvpA基因作为靶标以建立临床鸡毒支原体流行病调查和诊断的新方法。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 pvpa基因 粘附蛋白 变异
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以重组PvpA蛋白作为抗原的鸡毒支原体抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:8
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作者 周云雷 李健 +2 位作者 魏飞龙 张小华 蒋红霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期713-717,共5页
为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法。特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大... 为建立鸡毒支原体(MG)种特异性检测的间接ELISA检测方法,本研究以原核表达的PvpA蛋白作为包被抗原,初步建立了检测MG抗体的间接ELISA检测方法。特异性试验结果表明,重组PvpA蛋白与鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、滑液支原体、大肠杆菌"O"抗原、禽沙门氏菌"O"抗原阳性血清均不发生交叉反应。该方法的批内变异系数小于8%,批间变异系数小于11%,表明具有较好的重复性。采用该检测方法与进口试剂盒对不同省份送检的鸡血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均达到90%以上。本研究建立的间接ELISA检测方法为MG抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 pvpa 原核表达 间接ELISA
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鸡毒支原体黏附蛋白PvpA的原核表达与纯化 被引量:2
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作者 蒋红霞 陈继荣 +2 位作者 曾振灵 阎化领 李旭宁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期864-867,881,共5页
利用基因重组技术将PvpA基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-41a(+)连接,转化入DH5α感受态细胞,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(D3)受体菌,用IPTG诱导蛋白表达。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,... 利用基因重组技术将PvpA基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-41a(+)连接,转化入DH5α感受态细胞,通过PCR、双酶切及测序鉴定后,将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(D3)受体菌,用IPTG诱导蛋白表达。用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备PvpA蛋白多克隆抗血清,并用Western blotting检验抗体特异性。结果表明,本研究成功获得PvpA纯化蛋白,在免疫印迹试验中,兔抗PvpA高免血清能与目的蛋白发生阳性反应,证实表达产物为特异性蛋白。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 pvpa蛋白 原核表达 WESTERN BLOTTING
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以鸡毒支原体pvpA基因序列建立的套式PCR检测方法 被引量:3
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作者 毛晓娜 王嵩林 +3 位作者 徐丽丽 周莉 姚琦 张映 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第7期84-86,共3页
本试验以GenBank中登录的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的特异性黏附蛋白pvpA基因序列为目标,用两对引物对鸡毒支原体DNA进行套式PCR扩增,建立套式PCR扩增体系,并进行了套式PCR的敏感性和特异性试验。结果显示,应用该PCR方法... 本试验以GenBank中登录的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)的特异性黏附蛋白pvpA基因序列为目标,用两对引物对鸡毒支原体DNA进行套式PCR扩增,建立套式PCR扩增体系,并进行了套式PCR的敏感性和特异性试验。结果显示,应用该PCR方法对MG DNA的检出限为0.18 pg/μL;以鸡常见细菌、病毒DNA为模板进行PCR扩增,均未扩增出条带,说明该方法特异性强,适用于临床对MG早期感染的检测。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 套式PCR 黏附蛋白pvpa 检测
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Study on the microcosmic superlubricity mechanism of PVPA affected by metal cations
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作者 Hongyun CAI Caixia ZHANG +4 位作者 Fuping LI Mengmeng LIU Tao ZHANG Hongyan CHU Zhifeng LIU 《Friction》 SCIE EI CAS CSCD 2023年第7期1150-1164,共15页
Hydrophilic polymer coatings on artificial implants generate excellent tribological properties.The friction properties of polymer coatings are affected by salt ion factors.Herein,the atomic force microscopy(AFM)was us... Hydrophilic polymer coatings on artificial implants generate excellent tribological properties.The friction properties of polymer coatings are affected by salt ion factors.Herein,the atomic force microscopy(AFM)was used to show that the superlubricity was achieved between poly(vinylphosphonic acid)(PVPA)-modified Ti6Al4V and polystyrene(PS)microsphere probe lubricated with monovalent salt solutions(LiCl,NaCl,KCl,and CsCl).Considering that adhesion is an important cause of friction changes,the AFM was further utilized to obtain adhesion between friction pairs in different salt solutions.The results indicated that the larger the cation radius in the lubricant,the smaller the adhesion,and the lower the friction coefficient of the PVPA coating.The electrostatic interaction between the PVPA and one-valence cations in lubricants was analyzed by the molecular dynamics(MD)simulation as it was found to be the main influencing factor of the adhesion.Combined analysis results of friction and adhesion indicated that by adjusting the size of cation radius in lubricant,the adhesion between the tribo-pairs can be changed,and eventually the magnitude of friction can be affected.This study opens up a new avenue for analyzing the friction characteristics of hydrophilic polymer coatings from the perspective of intermolecular forces. 展开更多
关键词 atomic force microscopy(AFM) SUPERLUBRICITY poly(vinylphosphonic acid)(pvpa) CATION ADHESION molecular dynamics(MD)simulation
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鸡毒支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:19
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作者 周云雷 魏飞龙 +2 位作者 李健 张小华 蒋红霞 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2371-2378,共8页
【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将... 【目的】建立基于鸡毒支原体种特异性粘附蛋白编码基因pvpA的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank公布的不同国家和地区鸡毒支原体pvpA基因序列,在高度保守区域设计一对引物。以临床分离鸡毒支原体RC1为模板扩增pvpA基因,将其连接到PMD19-T载体,转化至大肠杆菌DH5α中,经PCR和酶切鉴定并测序验证后得到阳性重组质粒rPvpA90。以rPvpA90为模板建立SYBR Green I荧光定量的标准曲线和溶点曲线,并进行特异性,灵敏性,重复性及临床样本检测试验,评价该方法的可行性。【结果】所建立的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶点曲线特异,相关系数为0.990。最低检测限为72拷贝/20μL,其敏感性比常规PCR至少高100倍;无论是对不同病原DNA单模板还是几种病原DNA混合模板进行扩增,该方法都呈现很好的特异性;重复性试验中,批内和批间变异系数均小于2%,表明该方法重现性好;临床样本的检测结果表明所建立的荧光定量PCR检测方法的检测率明显高于常规PCR方法。【结论】本研究初步建立了基于种特异性基因pvpA的鸡毒支原体荧光定量PCR方法,为养禽场诊断和监测鸡毒支原体病原提供一种新的特异、灵敏的方法。 展开更多
关键词 种特异性 pvpa 鸡毒支原体 实时荧光PCR SYBR Green I
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一株鹌鹑源鸡毒支原体的分离鉴定
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作者 刘丽萍 李玉杰 +8 位作者 路晓 赵巧雅 盛媛 高月花 郭效珍 胡峰 田野 刘存霞 于可响 《家禽科学》 2021年第8期41-44,共4页
本研究从发病鹌鹑体内分离出1株支原体,通过菌落形态、pvpA基因的PCR扩增与测序分析,鉴定为鸡毒支原体。采用6种抗菌药物测其最小抑菌浓度(MIC),发现该分离株对泰妙菌素最敏感,MIC达0.00625μg/mL;其次为酒石酸泰乐菌素、盐酸强力霉素,... 本研究从发病鹌鹑体内分离出1株支原体,通过菌落形态、pvpA基因的PCR扩增与测序分析,鉴定为鸡毒支原体。采用6种抗菌药物测其最小抑菌浓度(MIC),发现该分离株对泰妙菌素最敏感,MIC达0.00625μg/mL;其次为酒石酸泰乐菌素、盐酸强力霉素,对大观霉素、庆大霉素、卡那霉素的敏感性较差。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 鹌鹑 pvpa基因 最小抑菌浓度
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新型药用辅料PVP 被引量:1
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作者 孙彬彬 张晗晖 《浙江化工》 CAS 2005年第10期31-32,共2页
阐述了新型药用辅料PVP的概况及其在制药工业中的应用。
关键词 药用辅料 聚乙烯基吡咯烷酮 PVP pvpa64 PVPP 药用辅料 PVP 制药工业
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Injectable <i>in situ</i>crosslinkable hyaluronan-polyvinyl phosphonic acid hydrogels for bone engineering
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作者 Nguyen Thi-Hiep Dao Van Hoa Vo Van Toi 《Journal of Biomedical Science and Engineering》 2013年第8期854-862,共9页
A novel injectable hydrogel that was synthesized by in situ crosslinking of hyaluronan and polyvinyl phosphonic acid was proposed in this study. Fourier transform infrared spectrum (FT-IR) analysis, scanning electron ... A novel injectable hydrogel that was synthesized by in situ crosslinking of hyaluronan and polyvinyl phosphonic acid was proposed in this study. Fourier transform infrared spectrum (FT-IR) analysis, scanning electron microscope (SEM), pH measurement, and biodegradation test were used to confirm its characteristics. The results permitted to prove successful crosslinking, observe the inner morphology of hydrogel and pore sizes distribution, and determine the decomposition of hydrogel components during incubation time. Result of pH measurement showed that the pH scale of hydrogel decreased when volume of PVPA increased. As a consequence, it affected the cytotoxicity value, cell proliferation, and cell growth behaviors of each hydrogel. Optical microscope observation showed that chondroblasts cell proliferated well on HA-PVPA hydrogel. Therefore, these results suggest that the new injectable hydrogel is appropriate for bone/cartilage regeneration applications. 展开更多
关键词 HYALURONAN pvpa INJECTABLE Hydrogel Mesenchymal Stem CELLS Chondroblast CELLS
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