Pygo2过表达促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖

目的通过构建过表达Pygo2的重组体上调Pygo2表达,探讨其在大鼠胶质瘤C6细胞增殖中的作用及机制。方法重组体经EcoR I和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染大鼠胶质瘤C6细胞,采用Western blot检测外源Pygo2蛋白表达,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测过表达Pygo2对C6细胞中cyclinD1、β-catenin水平的影响,并采用细胞免疫荧光法检测其对C6细胞中cyclinD1、β-catenin亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定结果证实插入序列正确,重组体能有效上调Pygo2表达。将重组体转染C6细胞上调Pygo2表达后,细胞的生长增殖被显著促进,克隆形成显著增多,细胞周期进程从G1期至S期转变显著增强;且cyclinD1水平随之增高,亚定位无改变,β-catenin水平和亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了过表达Pygo2的重组体,过表达Pygo2通过增高cyclinD1水平,促进细胞从G1期进入S期,从而促进大鼠胶质瘤C6细胞增殖。

下调Pygo2抑制脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭及其cyclin D1的表达

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pygo2cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pygo2shRNA对U251细胞Pygo2mRNA和蛋白表达的干扰效果,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布,BrdU掺入法检测DNA合成,Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pygo2shRNA对U251细胞cyclin D1、β-catenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2shRNA显著抑制了U251细胞Pygo2mRNA和蛋白的表达;Pygo2shRNA抑制U251细胞Pygo2表达后,细胞增殖显著降低,细胞更多地阻滞在G1期,且BrdU掺入显著减少,侵袭细胞数显著减少。此外,抑制Pygo2表达可显著下调U251细胞cyclin D1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体。抑制Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,可能通过下调Wnt信号靶基因cyclin D1的表达,使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。

Wnt信号调控因子Pygo2在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨Wnt信号重要成员Pygopus 2(Pygo 2)在人脑胶质瘤中的表达水平及与脑胶质瘤发生发展的关系。方法采用免疫组化方法检测Pygo2蛋白在80例脑胶质瘤和5例正常脑组织标本中的表达水平。结果 Pygo2在脑胶质瘤中的表达阳性率及免疫反应评分(IRS)为65.0%、3.32±2.51,正常脑组织未见染色。Ⅰ～Ⅳ级以及良、恶性脑胶质瘤Pygo2表达阳性率分别为38.5%、46.2%、78.9%、90.9%和43.6%、85.3%,在脑胶质瘤不同病理级别以及不同恶性度间Pygo2表达阳性率均有显著性差异(P<0.01)。Ⅰ～Ⅳ级以及良、恶性脑胶质瘤Pygo2IRS分别为0.875±0.29、1.84±1.229、4.24±2.16、6.39±2.97和1.52±1.10、5.53±2.84,在脑胶质瘤不同病理级别以及不同恶性度间Pygo2IRS有极显著性差异(P<0.01)。结论 Pygo2在脑胶质瘤中高表达,并随脑胶质瘤病理级别的增加而表达增强,可能在脑胶质瘤恶性发生发展过程中具有重要作用。

特发性少精子症和无精子症与Pygo2基因蛋白编码区SNPs的相关性

男性不育常伴随精子数量减少。Pygo2基因在染色质重塑的伸长精细胞中表达,其功能受损会导致精子形成阻滞和精子生成减少而引发不育。文章旨在检测引起人特发性少精子症和无精子症的Pygo2基因突变。从77例正常生育力男性和195例特发性少精子症和无精子症患者静脉血提取DNA,采用聚合酶链式反应-测序方法对Pygo2基因3个蛋白质编码区进行测序对比,非同义单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点分别用SIFT、Polyphen-2和Mutation Taster软件进行诱发蛋白质结构和表型改变的检测和分析。结果表明,195例患者中,178例(30例轻度或中度少精子症,57例重度少精子症和91例无精子症)基因序列分析报告完好,无精子症中3例患者分别在2个位点(rs61758740,rs141722381)发生了非同义突变SNPs,重度少精子症中1例患者在位点rs61758741发生了非同义突变,3个突变位点在SNPs基因数据库都已有报道,轻度或中度少精子症患者以及正常生育力男性中不存在SNPs。rs61758740可使PYGO2蛋白第141位蛋氨酸(M)变为异亮氨酸(I),rs61758741使PYGO2蛋白第261位碱性赖氨酸(K)变为酸性谷氨酸(E),rs141722381使PYGO2蛋白第240位亲水侧链天冬酰胺(N)变为疏水侧链异亮氨酸(I)。软件分析表明,在所发现的3个SNP非同义突变位点中,rs141722381引起的单个氨基酸改变会导致PYGO2蛋白空间结构破坏和诱发相关疾病。因此,Pygo2基因蛋白质编码序列区SNPs可能是特发性少精子症和无精子症的诱发因素之一,导致男性不育。

pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达

目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ,HindⅢ酶切分析及测序检查,表明真核表达载体构建正确;瞬时转染C6细胞后,免疫细胞荧光染色及蛋白印迹检测表明转染细胞能够表达外源Pygo2基因。结论成功构建了pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并能够在真核细胞中进行表达,这为今后研究pygo2基因在胶质瘤中的作用机制奠定了基础。

微小RNA-873-5p通过靶向作用于PYGO2基因对膀胱癌细胞生长的影响

目的探讨微小-873-5p(miR-873-5p)转染对PYGO2基因表达的调控作用及对膀胱癌细胞5637生长的影响。方法根据处理不同,膀胱癌细胞分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-873-5p)。qRT-PCR检测转染后两组细胞中miR-873-5p表达量。生物信息学预测PYGO2为miR-873-5p可能的靶基因。qRT-PCR检测PYGO2mRNA的表达。构建PYGO2基因的3’UTR野生型及突变型序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。Western blot检测PYGO2及下游靶蛋白的表达。流式细胞术分析细胞周期分布,MTS法和集落形成实验分析细胞活力和增殖能力。结果实验组中miR-873-5p表达量显著上升(P<0.01)。双荧光素酶报告基因系统结果显示PYGO2是miR-873-5p的靶基因。与对照组相比,实验组细胞中PYGO2 mRNA水平下调58.48%(P<0.01)。PYGO2及下游靶蛋白表达明显下调。转染miR-873-5p后,细胞周期被阻滞在G0/G1期(P<0.01),实验组细胞的活力和增殖能力均明显降低(P<0.05)。结论 miR-873-5p通过干扰膀胱癌细胞5637中PYGO2基因的表达,阻滞细胞周期进展,抑制细胞的增殖,可能成为膀胱癌基因治疗的靶标分子。

抑制Pygo2表达对U251细胞增殖的影响

目的构建RNA干扰(RNAi)重组体抑制Pygo2的表达,并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法针对Pygo2 cDNA序列设计并合成一对特异性的含有"短发卡"的寡核苷酸序列及其随机对照序列,经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后,用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞,采用RT-PCR和Western blot检测Pygo2 shRNA对U251细胞Pygo2 mRNA和蛋白的干扰效果,应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,BrdU掺入法检测DNA合成。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确;Pygo2 shRNA显著抑制了其mRNA和蛋白的表达,MTT分析其细胞增殖也被显著抑制(P<0.01)。与scr shRNA组的克隆形成数(78.9±6.8)%相比,Pygo2 shRNA组克隆数(55.4±5.2)%显著减少(P<0.05)。与对照组的BrdU掺入率(20.96±2.19)%相比,Pygo2 shRNA组的BrdU掺入率(8.81±0.56)%显著减少(P<0.05),而scr shRNA组的BrdU掺入率是(20.35±1.73)%无显著变化。而且,Pygo2 shRNA使U251细胞处于S期百分比显著减少、G1期显著增加(P<0.01),致细胞周期阻滞于G1期。结论成功构建了抑制Pygo2表达的重组载体,下调Pygo2表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成,使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖。

Pygo2转基因小鼠模型的建立及表型的初步分析

主要通过建立Pygo2转基因小鼠的模型对其表型进行初步分析.首先构建K14-2×flag-Pygo的转基因构件,经酶切、纯化后构建Pygo2转基因小鼠.出生后的仔鼠用PCR和Western方法检测基因型,并通过进一步的免疫组化验证Pygo2基因的表达.PCR检测获得7只转基因阳性鼠,6只Western检测为阳性.对转基因小鼠子代的胚胎和成体进行免疫组化证明,Pygo2基因在皮肤和乳腺组织中有过量表达.转基因小鼠的皮肤、乳腺以及鼠尾椎骨等组织出现了异常的表型.乳腺中有肿瘤组织的形成,且Pygo2在肿瘤中有大量表达.该模型的成功建立为进一步研究Pygo2的功能奠定了基础.

血清GP73与PYGO2对已长期抗病毒治疗慢性乙型肝炎肝硬化的诊断价值

目的探讨高尔基体蛋白73(GP73)和人尾肢同源蛋白(PYGO2)对已长期抗HBV治疗慢性乙型肝炎(CHB)肝硬化的诊断价值。方法选取抗HBV治疗3年的CHB患者149例,其中转氨酶正常(ALT≤40 U/L)59例、转氨酶升高(ALT>40 U/L)33例、肝硬化57例。采集外周血以ELISA法检测血清GP73、PYGO2蛋白,采用瞬时弹性纤维测定仪测定肝脏硬度(LSM),以AST、血小板计数(PLT)建立APRI、FIB-4诊断模型,以ROC曲线分析5种指标诊断长期抗HBV治疗CHB肝硬化的价值。结果除血清PYGO2外,CHB不同病情患者间其余指标均有统计学意义(P均<0.05);与转氨酶正常者比较,转氨酶升高患者APRI升高(P<0.05);与转氨酶升高者比较,肝硬化患者血清GP73、LSM、APRI、FIB-4均升高(P均<0.05)。与其他各指标比较,GP73诊断长期抗病毒治疗CHB肝硬化的AUC最高(P均<0.05)。GP73最佳诊断点为3.61 ng/mL,敏感度93.0%,特异度79.3%;PYGO2最佳诊断点为0.52 ng/mL,敏感度36.8%,特异度46.7%。结论长期抗HBV治疗CHB患者肝炎稳定期与活动期血清GP73、PYGO2水平并无明显差异,但肝硬化患者血清GP73升高、PYGO2无明显改变;血清GP73可作为诊断长期抗病毒治疗CHB肝硬化的指标,PYGO2不具备诊断价值。

Pygo2蛋白在肿瘤中作用机制的研究进展

Pygo2蛋白作为Wnt信号通路下游一个重要的新功能蛋白,已发现同多种肿瘤的发生有着密切的关系.Pygo2包含NHD和PHD结构域,其中NHD是该蛋白特有的结构域,能够结合组蛋白甲基化转移酶和乙酰酶,并且协同PHD共同结合甲基化组蛋白,改变染色体的结构,激活Wnt靶基因.但是Pygo2蛋白在肿瘤发生过程中的具体分子机制并不清楚,故本文对Pygo2的结构及其与肿瘤的相关性进行综述,拟阐明Pygo2蛋白在肿瘤的发生发展过程中所扮演的角色及其致病机制.

RNA干扰pygo2基因对人脑胶质母细胞瘤U251生物学行为及wnt通路的影响

目的研究pygo2在胶质瘤细胞系U251中的表达、功能及作用机制。方法利用反义pygo2转染U251,下调pygo2的表达,应用流式细胞术和MTT法,评价细胞生长、增殖、凋亡及周期变化;细胞克隆形成试验和transwell侵袭试验分析细胞的克隆形成能力和侵袭能力,采用Western印迹法检测通路蛋白的表达变化。结果转染反义pygo2后,pygo2表达降低,MTT结果显示转染反义pygo2后细胞生长受到抑制且凋亡细胞增加;流式细胞术提示G1期到S期阻滞,细胞克隆形成能力下降,侵袭能力均受到抑制,Western结果表明wnt通路相关蛋白c-myc和Cyclin D1在抑制pygo2表达后下降。结论 pygo2可促进人脑胶质瘤细胞生长、增殖,可能是胶质瘤治疗的有效靶点,其发挥作用可能与wnt通路密切相关。

猪精子发生候选基因PYGO2的分离、表达和亚细胞定位研究

旨在分离猪PYGO2编码区序列,获悉该基因mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征、细胞中的分布和定位,并构建蛋白相互作用网络。本研究首先利用RT-PCR从成年版纳微型猪近交系(BMI)睾丸组织中克隆PYGO2编码区序列;利用生物信息学解析其基因结构并对蛋白质进行多种功能分析,比较多个哺乳动物PYGO2的氨基酸序列同源性,构建系统进化树和蛋白质相互作用网络;然后利用qPCR技术检测PYGO2在15个组织中的mRNA表达情况;最后通过构建pEGFP-C1-PYGO2融合表达载体,转染猪睾丸细胞(ST),确定PYGO2的亚细胞定位。结果表明,PYGO2基因CDS长1221 bp,编码406个氨基酸(基因和氨基酸号分别为KY644518和AVB77243.1),定位在猪4号染色体;PYGO2蛋白二级结构以无规则卷曲为主,N端和C端均疏水;氨基酸序列同源比对分析表明,猪PYGO2与其他哺乳动物的相似度均大于97%,在进化上高度保守;蛋白互作网络分析显示,猪PYGO2与9个蛋白可能存在相互作用,其中与BCL9蛋白作用最为紧密;qPCR表达分析表明,猪PYGO2在被检的15个组织中均有不同程度表达,在生殖腺中表达相对较高;ST细胞中的亚细胞定位结果表明,PYGO2 mRNA主要分布在细胞核。本研究获得了PYGO2基因的编码序列,蛋白质结构和定位,蛋白质相互作用网络,mRNA多组织表达特征,可为进一步解析该基因在猪精子生成中的分子机制提供参考。

Wnt信号通路调控因子Pygo2在人肾癌组织中的表达及意义

目的研究Wnt信号通路调控因子Pygo2在。肾癌组织中的表达及意义。方法经病理检查确诊为。肾透明细胞癌组织标本42例。肿瘤直径1．2—15．5cm，平均7．2cm；其中〈4．0cm7例，4．0～7．0cm9例，〉7．0cm26例。Fuhrman分级：Ⅰ级6例，Ⅱ级17例，Ⅲ级17例，Ⅳ级2例。AJCCTNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期7例，Ⅲ期7例，Ⅳ期12例。采用RFQ—PCR及免疫组织化学sP法检测Pygo2在肾癌组织及癌旁正常肾脏组织中的表达。统计学分析癌旁正常肾组织与肾癌组织、肾癌组织各组内的表达差异情况。结果肾癌组织与癌旁组织中Pygo2mRNA表达量分别为2．88±1．26及1．00±0．00，蛋白表达量分别为45．53±24．54及11．02±1．39，组间差异均有统计学意义（P〈0．0001）。肾癌组织中Pygo2表达与病理分级、临床分期密切相关，特别是与有无淋巴结转移密切相关（P〈0．0001），而与性别、年龄无关（P〉0．05）。结论Pyg02在病理高分级、临床高分期、发生淋巴结转移的肾癌组织中高表达，提示可能在肾癌发生发展过程中具有重要作用。

miR-98-5p靶向PYGO2基因对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨miR-98-5p对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及其作用机制。方法选取2016年1月至2019年1月郴州市第一人民医院收治的宫颈癌患者的癌组织和癌旁组织;予以miR-98-5p、si-PYGO2及anti-miR-98-5p单独或共培养Siha细胞,记为:miR-NC组、miR-98-5p组、si-NC组、si-PYGO2组、anti-miR-NC组、anti-miR-98-5p组、miR-98-5p+pcDNA组、miR-98-5p+pcDNA-PYGO2组。运用qRT-PCR检测宫颈癌组织和细胞中miR-98-5p和PYGO2 mRNA的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;将WT-PYGO2、MUT-PYGO2分别与miR-NC、miR-98-5p共转染至Siha细胞中,双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。采用方差分析和t检验进行统计学分析。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miR-98-5p表达水平降低(0.98±0.08比0.47±0.05),PYGO2 mRNA(1.00±0.07比2.43±0.24)和蛋白表达水平(0.27±0.03比0.62±0.05)均升高(P均<0.001)。与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Siha、Hela、Caski中PYGO2 mRNA(0.98±0.09比2.76±0.23、2.46±0.24、2.55±0.21)和蛋白表达水平(0.21±0.03比0.62±0.06、0.51±0.05、0.57±0.06)升高;miR-98-5p的表达水平降低(1.00±0.08比0.34±0.04、0.56±0.05、0.46±0.04)(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-98-5p组宫颈癌Siha细胞活性(48 h:0.61±0.05比0.42±0.04,72 h:1.02±0.09比0.59±0.06)、迁移数量[(112.46±10.27)个比(48.35±4.96)个]及侵袭数量[(92.47±9.56)个比(39.46±3.52)个]均降低(P均<0.05)。与si-NC组相比,si-PYGO2组宫颈癌Siha细胞活性(48 h:0.64±0.06比0.46±0.05,72 h:1.05±0.08比0.67±0.06)、Siha迁移数量[(106.48±9.75)个比(42.16±4.25)个]和侵袭数量[(87.63±8.11)个比(35.42±6.20)个]均降低(P均<0.05);Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、MMP-14表达水平降低,p21、p27表达水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。与miR-NC组比较,miR-98-5p组转染WT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性(0.38±0.04比0.99±0.08)降低(P<0.05),转染MUT-PYGO2的Siha细胞荧光素酶活性(1.03±0.08比1.01±0.09)差异无统计学意义(P>0.05)。PYGO2过表达逆转了miR-98-5p过表达对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-98-5p可抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与其靶向调控PYGO2的表达有关,将可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶点。

Pygo2对肾癌OS-RC-2细胞凋亡的影响

目的 观察Pygo2对肾癌OS-RC-2细胞凋亡的影响.方法 通过慢病毒介导三质粒重组,分为4组：A组：过表达组Pygo2OE（RNA过表达）;B组：原始细胞对照组绿色荧光蛋白（GFP）;C组：沉默组Pygo2 shRNA（RNA干扰）;D组：空白对照组Pygo2 scrRNA（RNA错配）.慢病毒感染肾癌OS-RC-2细胞,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测Pygo2的抑制效率.碘化丙锭（PI）染色法检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白C-多腺苷二磷酸核糖聚合酶（C-PARP）的表达.结果 Pygo2抑制效率约为80％.PI凋亡率分别为A组6.52％、B组9.01％、C组61.09％、D组6.88％.抑制Pygo2的表达,肾癌OS-RC-2细胞的凋亡率明显升高（P＜0.05）.Western blot结果显示C组细胞凋亡蛋白C-PARP表达明显升高,而其他组均无C-PARP的表达（P＜0.05）.结论 体外实验中,沉默Pygo2基因能促进肾癌OS-RC-2细胞凋亡;Pygo2可能抑制肾癌OS-RC-2细胞凋亡.

PYGO_2基因RNA干扰真核表达载体的构建

目的构建PYGO2基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体。方法以PYGO2为靶基因,以pSUPER.puro质粒为载体,设计构建重组体,根据基因库(GenBank)提供的PYGO2基因核苷酸序列,在http://www.ambion.com网站上使用siRNA Target Finder软件进行目的基因的siRNA序列对应DNA的设计与筛选,选择设计两条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pSUPER.puro中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析,将重组的pSUPER.puro-PYGO2质粒转染胶质瘤C6细胞48h,检测其对该细胞PYGO2蛋白的影响。结果经酶切鉴定筛选出的重组体测序结果与目的序列完全一致,重组载体显著降低胶质瘤细胞PYGO2的蛋白表达,重组载体构建成功。结论利用RNAi技术可成功构建抑制PYGO2表达的siRNA真核表达载体。

非酒精性脂肪性肝病儿童血清人尾肢同源蛋白水平检测的临床意义

目的目前仍不了解非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患儿人尾肢同源蛋白(Pygo2)血清水平在疾病进展过程中作用,以及可否评估肝纤维化程度。文中旨在检测肥胖儿童外周血中的Pygo2水平,并分析其与传统肝纤维化血清学指标之间的关系,从而评估NAFLD患儿Pygo2检测的实际临床价值。方法选择2014年9月至2016年2月在安徽医科大学附属省立医院和南京医科大学第一附属医院就诊的住院和门诊肥胖患儿120例。参考NAFLD诊疗指南将120例肥胖患儿分为单纯性肥胖组(n=44例,肝B超无弥漫性脂肪肝的肥胖儿童)、单纯性非酒精性脂肪肝(NAFL)组(n=35例,肝B超提示有弥漫性脂肪肝但肝功能正常)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)组(n=41例,肝B超提示有弥漫性脂肪肝且肝功能异常)。另选取18例健康志愿者为对照组。对照组及所有患者均收集外周血清,并分别采用酶联免疫吸附方法测定血清Pygo2水平,放射免疫分析法检测透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘连蛋白(LN)和全自动酶法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)表达量。结果 NAFL组、NASH组Pygo2表达量[52.1(12.3)、78.3(50.0)μg/L]较单纯性肥胖组[43.2(18.7)μg/L]明显升高(P<0.05);NASH组Pygo2表达量较对照组[41.7(16.8)μg/L]、NAFL组明显升高(P<0.001)。NAFH组HA、CⅣ、LN、ALT、γ-GT表达量较对照组、单纯性肥胖组、NAFL组明显升高(P<0.001)。血清Pygo2与HA、PCⅢ、CⅣ、ALT、γ-GT、LN呈显著正相关(r=0.708、0.356、0.589、0.454、0.674,0.169,P<0.05)。结论随着Pygo2表达量水平升高,肝纤维化程度加重。Pygo2与HA、CⅣ、γ-GT等指标显著相关,表明Pygo2亦可作为检测NAFLD患儿肝纤维化的临床评估指标。

Pygopus 2 promotes kidney cancer OS-RC-2 cells proliferation and invasion in vitro and in vivo

Objective:Human Pygopus 2(Pygo2)was recently discovered to be a component of the Wnt signaling pathway required for b-catenin/Tcf-mediated transcription.But the role of Pygo2 in malignant cell proliferation and invasion has not yet been determined.Methods:Lentivirus-mediated small interfering RNA(siRNA)and vector-based overexpression were used to study the function of Pygo2 in OS-RC-2 cells.The resulted cells were subject to Western blotting assay,MTT assay,colony formation and cell invasion assays.Furthermore,renal cell carcinoma(RCC)models were established in BALB/c nude mice inoculated with OS-RC-2 cells.Immunohistochemistry(IHC)staining of matrix metalloproteinase-7(MMP-7),matrix metalloproteinase-9(MMP-9)and vascular endothelial growth factor(VEGF)was performed in tumor tissue.Results:Pygo2 gene was successful knocked down and overexpressed in RCC OS-RC-2 cells by using an shRNA and overexpressing vector,respectively.Overexpression of Pygo2 effectively promoted cell proliferation,colony formation and invasion in vitro.Knockdown of Pygo2 obviously inhibited xenograft tumor growth in nude mice.In addition,overexpression of Pygo2 increased the levels of MMP-7,MMP-9 and VEGF in the xenograft tumors.Conclusion:Pygo2 has a role in promoting cell proliferation,invasion and metastasis,and may regulate angiogenesis via the Wnt/b-catenin signaling pathway.