qa-3稀有密码子和mRNA结构改造及其在大肠杆菌中的高效表达

奎尼酸脱氢酶的高表达是奎尼酸生物合成的代谢工程研究的关键和基础。粗糙脉孢菌基因组中编码奎尼酸脱氢酶的基因qa-3在大肠杆菌中不表达,根据大肠杆菌密码子使用频率分析qa-3基因,发现有27个稀有密码子,其中编码Arg(R)的有8个,编码Gly(G)的有9个。编码精氨酸的AGG(AGA)两个稀有密码子紧密相连(R区),另外还有个相对比较集中的GGG密集区G区。进一步通过计算机分析其qa-3基因mRNA二级结构,发现改变5′和3′末端个别碱基对其二级结构的影响很大,可以使mRNA的自由能由野生型的-374.3kJ/mol降低到最小-80.5kJ/mol,从而大大减少mRNA两端二级结构的产生,而仅仅改变R区和G区的稀有密码子自由能变化很小。通过对该基因密码子改造和优化5′和3′末端对其mRNA二级结构的影响,在大肠杆菌中表达真菌的基因qa-3,并测到了奎尼酸脱氢酶活性,为构建产奎尼酸工程菌株奠定基础。

Mapcheck 3的剂量学特性测量及比较

目的SNC于2018年底推出了新一代的Mapcheck,并命名为Mapcheck 3。测量Mapcheck2和3的剂量学特性,分析Mapcheck 3的剂量学特性曲线,并和Mapcheck 2进行比较。探讨新一代的Mapcheck能否满足临床需求以及改进。方法分别测量新旧两代Mapcheck的探头一致性、剂量线性和测量重复性。结果归一后Mapcheck 3的探头一致性为0.0154%;剂量线性为0.0394%;测量重复性为0.0121%;剂量线性结果经过直线回归后常数项为-0.09232;回归系数为1.054107。结论Mapcheck 3中的新一代探测器的剂量学特性满足临床使用要求,并且因为体积更小能够在调强验证中提供更高的空间分辨力。