新质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrB24的克隆表达

目的研究新质粒介导喹诺酮耐药基因qnrB24的耐药特性。方法 PCR扩增qnrB24基因全编码区,对PCR产物进行测序分析,将qnrB24与克隆载体PHSG398双酶切连接,转化入E.coil JM109受体菌中表达。用E试验纸条法对携带qnrB24的临床菌株、受体菌和克隆表达株进行常用喹诺酮类抗菌药物敏感性试验。结果 qnrB24与qnrB10同源性为98.7%,3个碱基位点发生同义突变,分别为139位C→A,257位C→T,670位A→G,导致氨基酸改变为47位亮氯酸→蛋氨酸,86位丙氨酸→缬氨酸,224位异亮氨酸→缬氨酸。qnrB24基因表达株对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较受体菌下降为原来的近1/8,但耐药水平低于临床分离菌株1/32～1/128。结论本研究首次发现qnrB24基因,qnrB24基因可以轻度增加氟喹诺酮类药物的耐药性。

新质粒介导喹诺酮耐药基因qnrB24的基因分析

目的 对新的质粒介导喹诺酮耐药基因（qnrB24）进行相关研究和分析。方法 对新发现的qnrB24基因阳性菌株进行转移接合实验,了解qnrB24对喹诺酮类药物的耐药性,碱裂解法提取接合子质粒,Southern blot明确质粒大小。采用热不对称交错聚合酶链反应（PCR）技术研究基因5′端以及3′端未知侧翼碱基序列。结果 这个突变基因命名为qnrB24（Genbank登录号HM192542）。药敏试验结果显示携带qnrB24基因接合子对环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）值为0.125μg/mL,左氧氟沙星MIC值为0.190μg/mL。接合子对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较大肠杆菌J53受体菌下降约8~11倍,接合子耐药水平低于临床分离菌株。Southern杂交显示该基因位于约60.0Kb质粒上。热不对称交错PCR结果显示,qnrB24基因5′端为假定的转座酶。结论 qnrB24通过质粒介导引起细菌对喹诺酮类药物的耐药性上升,容易发展成高水平耐药,因此需要监测其在细菌中的流行性。