GC-MS法在黔产宽叶缬草质控中的应用

宽叶缬草(Valeriana offtcinalis L. var.latifolia Miq.)系败酱科植物.主产贵州,我国从东北至华北也有分布.具有镇静、镇痛、降压、解痉等作用.目前,对其挥发油研究较多,但采用气相色谱-质谱对药材质量进行研究较少.……

食品检验用木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂质量差异分析

为丰富我国食品微生物检验用培养基验收时的质控菌株,提高商品化培养基质量,该实验采用GB 4789.28-2013中规定的验收方法,以鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、福氏志贺氏菌CMCC 51572、金黄色葡萄球菌ATCC 6538和大肠埃希氏菌ATCC 25922为参照,选取6株鼠伤寒沙门氏菌、1株福氏志贺氏菌、4株金黄色葡萄球菌和5株大肠埃希氏菌对4个品牌的木糖赖氨酸脱氧胆盐培养基(XyloseLysineDesoxycholateAgar,XLD)的外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标进行实验评价。结果显示A、B、C、D4个品牌培养基干粉颜色分别为粉红色,淡粉色、土黄色、粉白色;水分含量分别为5.55%,5.92%、5.46%、5.94%;配置100 mL添加量分别为5.54、5.89、5.69、5.70 g;pH值均符合7.4,6株鼠伤寒沙门氏菌和1株福氏志贺氏菌在4个品牌培养基上生长率均≥0.7,4株金黄色葡萄球菌均不生长,5株大肠埃希氏菌生长指数G均<5。综上,4个品牌的XLD培养基全部符合GB4789.28-2013,该实验所选菌株可用作验收XLD培养基质控菌株的补充菌株。

血液细菌培养仪的质量控制方法探讨

随着医疗技术的发展,血液细菌培养仪使用范围的逐渐增加,其质量控制的要求也随之提高。本文通过介绍该培养仪的发展历程、影响因素及现有质量控制方法,针对其光学检测系统物理质控方法的实操影响因素进行实验,并根据实验结果提出使用建议,为血液细菌培养仪的质量控制提供参考。

Quantitative estimation of (-)-hinokinin, a trypanosomicidal marker in Piper cubeba, and some of its commercial formulations using HPLC-PDA

The fruits of Piper cubeba have been used in Ayurvedic system of medicine for pain,tastelessness, painful urination and mouth diseases. Among its various chemical constituents,（-）-hinokinin, a trypanosomicidal dibenzylbutyrolactone lignan, is found in significant quantities.For quality evaluation of P. cubeba fruit and its commercial formulations, there is an urgent need to develop an analytical method based on（-）-hinokinin. For this purpose, an HPLC method was developed using photo diode array detector and Waters HR C18 column with gradient elution consisting of water and acetonitrile. The developed method was validated as per ICH-Q2 B guidelines and found to be accurate, precise and linear over a wide range of concentrations（5–300 mg/m L）.（-）-Hinokinin contents were found to be in the range of 0.005–0.109%（m/m） in various P. cubeba samples. The developed method was extended to LC–MS for further identification and characterization of（-）-hinokinin in samples. The developed method is simple,rapid and specific, and can be used as a tool for quality control of P. cubeba fruits and its commercial formulations.

混合盲样菌株鉴定过程分析与体会

2021年5月,建德市疾病预防控制中心接到1份盲样菌株鉴定考核任务,考核项目为菌株鉴定(若检出副溶血弧菌、沙门菌、志贺菌,则同时进行血清分型并报告其结果;若检出致病性大肠埃希菌,则同时进行毒力基因检测并报告其结果),检测依据为《国家致病菌识别网技术规范》。通过对拿到的半固体琼脂穿刺培养物进行观察,初步分析为混合菌株盲样,但经过一系列分离培养鉴定后,只检出一种目标菌。作者调整思路,通过改变培养条件,成功分离出了第2株目标菌,分析检测过程,供同行参考。

河北省2016-2021年脊髓灰质炎实验室细胞系质量监测与分析

目的 通过监测与分析河北省疾病预防控制中心脊髓灰质炎(简称“脊灰”)实验室2016-2021年使用的人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma, RD)细胞系和转人脊灰病毒受体基因的鼠肺细胞(mouse L cells expressing the human Poliovirus receptor, L20B)系质量,确保检测脊灰病毒和非脊髓灰质炎肠道病毒(non-polio Enteroviruses, NPEV)的敏感性,为维持无脊灰状态提供可靠的技术保证。方法 采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)法对所用的RD细胞系和L20B系进行支原体检测(Mycoplasma detection);采用96孔微量培养板病毒滴定法对RD细胞系和L20B系进行细胞敏感性(cell sensitivity, CS)监测。结果 2016-2021年RD细胞系和L20B系支原体检测结果为阴性。与河北省脊灰实验室质量控制(laboratory quality control, LQC)株比较,RD细胞系和L20B系滴度波动范围为±0.5log CCID50/0.1ml, RD细胞系均值及标准差为Ⅰ型7.86±0.17,Ⅲ型7.73±0.13;L20B系均值及标准差为Ⅰ型7.05±0.10,Ⅲ型6.48±0.14。结论 2016-2021年河北省脊灰实验室使用的RD细胞系和L20B系质量控制良好,所用细胞系未受支原体污染,对Ⅰ型和Ⅲ型的脊灰病毒敏感性良好,为河北脊灰实验室脊灰病毒和非脊髓灰质炎肠道病毒分离及型别鉴定的质量提供了重要保障。

不同标准菌株对原料乳大肠菌群检验用培养基验收差异分析

为保证原料乳质量,丰富检测原料乳中大肠菌群涉及到的培养基的验收质控菌株,采用GB 4789.28—2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中规定的验收方法,分别选取3个品牌的结晶紫中性红胆盐琼脂(violet red bile agar,VRBA)、结晶紫中性红胆盐-4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖苷琼脂(violet red bile agar with MUG,VRBA-MUG)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(lauryl tryptose broth,LST)和煌绿乳糖胆盐肉汤(brilliant green lactose bile broth,BGLB),对其进行外观、pH值、水分含量等物理指标以及生长率、选择性等微生物指标实验评价。同时以弗式柠檬酸杆菌ATCC 43864为参照,选取7株弗式柠檬酸杆菌对3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB进行验收实验评价。结果表明:3个品牌的不同培养基干粉颜色均正常,水分含量均控制在5%~6%,pH值均符合国家标准;7株弗氏柠檬酸杆菌在3个品牌VRBA、VRBA-MUG上的生长率均大于0.7;仅CMCC 48098和CICC 22910在3个品牌的LST、BGLB中浊度达到2,且导管内产生气体,与ATCC 43864结果相同。综上,3个品牌的VRBA、VRBA-MUG、LST和BGLB全部符合GB 4789.28—2013,推荐CMCC 48098和CICC22910用作验收4个培养基质控菌株的补充菌株。

支原体液体培养基质控菌生长分析

目的:摸索肺炎支原体在支原体肉汤培养基和口腔支原体在精氨酸支原体肉汤培养基中的生长规律,比较不同密闭方式对支原体液体培养基灵敏度的影响,同时考察液体培养基基础的有效期。方法:采用变色单位试验法测试肺炎支原体和口腔支原体在相应液体培养基不同培养时间段的颜色变化单位(CCU),并绘制生长曲线。使用3种不同密闭方式的器具制备液体培养基并检测灵敏度。测试液体培养基基础存放0、15、30、60和90天的灵敏度。结果:使用3种不同密闭方式培养,支原体肉汤培养基和精氨酸支原体肉汤培养基灵敏度均达到109 CCU·mL^(-1)。支原体肉汤基础和精氨酸支原体肉汤基础存放于2~8℃有效期为90天。结论:本试验为支原体液体培养基灵敏度的检查和研究提供依据。

稀有鮈鲫近交系微卫星多态性分析

利用17对微卫星引物对稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)野生群体和近交系F20和F22进行了遗传分析。结果表明在野生群体中17个微卫星位点均为多态位点,但在F20中仅有6个多态位点,F22中则仅有4个多态位点。在野生群体中共检测到64个等位基因,F20、F22分别为26、21个。近交系的平均基因纯合率均较高,其中F20为86.18%,F22达91.96%,而野生群体平均基因纯合率为46.84%。近交系平均杂合度和平均多态信息含量均较野生群体低。在近交系F20和F22中,群体间遗传相似性指数最大,其遗传距离最小,说明二者之间的亲缘关系最近。HAN系遗传多样性明显降低,已具有较高的遗传纯度。

赤眼蜂种质资源的描述规范及重要指标分析

根据国家战略需求,本文制定了松毛虫赤眼蜂、玉米螟赤眼蜂、螟黄赤眼蜂、甘蓝夜蛾赤眼蜂、广赤眼蜂、卷叶蛾赤眼蜂和稻螟赤眼蜂共7种赤眼蜂的种质资源描述规范和数据质量控制标准,并按照规范对40个赤眼蜂品系(地理种群)进行了标准化整理和数字化表达。描述和测定了赤眼蜂种质资源的护照信息、标记信息、基本特征特性描述信息、图像信息、种质保存信息和共享方式共100多项指标,并对雌成虫寿命、羽化率、性比、产卵历期和产卵量(寄生能力)等重要指标的数据进行了统计分析,发现赤眼蜂各品系的上述指标均有比较明显的差异。这为筛选优良赤眼蜂品系提供了重要依据,并具有重要战略意义和应用价值。

橘小实蝇遗传性别品系的建立及雄性不育技术

为了更好地应用昆虫不育技术防治橘小实蝇,建立了以蛹色区分雌雄性别的橘小实蝇遗传性别品系。经过连续测交表明遗传品系能稳定遗传。质量监测表明遗传性别品系平均孵化率、蛹重、羽化率、飞出率、存活率等指标与普通种无显著差异。取遗传性别品系羽化前1、2、3天(分别用-1d、-2d、-3d表示)的雄蛹,经过100Gy的^(60)Co辐射后,分别与野生雌虫杂交,F1代卵的孵化率均大大低于对照组。对经过辐射处理-1d、-2d、-3d的雄蛹分别进行质量检测,飞出率、存活率与对照组均无显著差异;-1d、-2d的羽化率之间及与对照组之间无显著差异,-3d的羽化率与-1d、-2d及对照组差异均显著。取遗传性别品系的-2d的雄蛹辐射100Gy的^(60)Co,获得不育雄虫,和野生雄虫一起竞争与野生雌虫交配的机会,相对不育系数为0.4923,表明不育雄虫与野生雄虫交配能力相当。田间扩散能力研究表明,不育雄虫在田间存在丰富的寄主植物的情况下不会大量扩散很远的距离。

卡介菌及其衍生制品鉴别实验用BCG DNA国家参考品的研制

目的建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用。方法以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA特异性缺失区RD1区是否存在,验证所制备的BCG DNA可作为定性用国家参考品,组织3家实验室对该参考品进行验证;并在不同时间,观察其稳定性。结果所制备的BCG DNA A260/286=1.96>1.8;BCG DNA国家参考品经多重PCR扩增BCG缺失区RD1的产物为约200bp DNA片段,与卡介菌巴斯德株DNA结果相同,3家实验室的验证结果一致,该制品经37℃4周,4℃3个月、6个月、12个月放置后,PCR结果不变。结论该BCG DNA制品纯度高,稳定,可作为BCG DNA定性用国家参考品,在卡介苗相关制品的质量控制中,做为BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用的国家参考品。

乳酶生生产用菌种的全基因组序列分析研究

目的了解我国乳酶生的生产用菌种全基因组分子特征。方法将乳酶生的生产用菌种屎肠球菌CMCC32901培养后,依次进行形态观察、生化鉴定与16S rRNA基因序列测定,并应用高通量测序技术,对生产用菌种CMCC32901进行全基因组序列测定,分析基因组基本特征、基因功能、同源性及致病性。结果分析结果显示,发现CMCC32901菌株与NCBI数据库中收录的不同屎肠球菌菌株的16Sr RNA基因序列相似度大于99.5%,与其他肠球菌菌株之间的16S rRNA基因序列相似度均大于92.0%。屎肠球菌CMCC32901染色体全基因组序列全长为2 394 726 bp,平均GC含量为39.1%,共含有2718个基因,其中具有COG功能2059个,参与KEGG代谢通路1402个。同源性分析显示其基因组中编码2589个屎肠球菌特异性蛋白。细菌的致病性预测分析发现在CMCC32901菌株中发现5种对人潜在致病性相关蛋白。结论首次获得了我国乳酶生生产用菌种——屎肠球菌CMCC32901全基因组的基本特征,为后续乳酶生的生产工艺优化和生产用菌种的质量控制奠定了基础。

支原体检验用培养基质控菌株的生长曲线与世代时间测定

为了摸索用于支原体培养基检验用质控菌株的生长规律,利用活菌计数方法测定滑液支原体、猪鼻支原体不同培养时段的颜色变化单位(CCU),并绘制生长曲线,确定世代时间。结果表明:滑液支原体菌株迟缓期在培养后6 h内,对数期为培养后6～36 h,稳定期为培养后36～54 h,衰老期为培养54 h之后,世代时间G=231.8 min;猪鼻支原体菌株迟缓期在培养后6 h内,对数期为培养后6～18 h,稳定期为培养后18～126 h,衰老期为培养126 h之后,世代时间G=117.1 min。通过对质控菌株生长规律的初步探索,为培养基检验及质控菌株的使用提供了参考。

细菌回复突变试验标准菌株分子质控方法的研究

目的建立细菌回复突变试验标准菌株的分子生物学质量控制(质控)方法。方法使用分子生物学方法(16s rDNA、种属特异性鉴定PCR、组氨酸操纵子关键突变位点序列分析、凝胶电泳和多位点序列分析方法)鉴定细菌回复突变试验标准菌株,并与传统生物学特性的质控方法进行比对。结果细菌回复突变试验标准菌株的生物学特性结果符合标准要求;16S rDNA序列比对为沙门菌,且种属特异性扩增结果为鼠伤寒沙门菌;标准菌株均具有组氨酸操纵子区原始构建的突变位点;脉冲场凝胶电泳带型均不一致,最低相似度为82%;多位点序列分析可分为ST19和ST3438两个ST型。结论建立了细菌回复突变试验标准菌株的分子生物学质控方法,该方法具有操作性强和重复性好等特点,与传统生物学特征方法具有很好的一致性,特别是针对相应his基因突变位点的检测手段,确保了细菌回复突变试验标准菌株检测的遗传稳定性和准确性。

特种医疗设备风险及控制

特种医疗设备危险性较大,一旦发生事故,会涉及到医患人员的生命安全。通过对特种医疗设备技术性能、产品安全、事故隐患进行全面分析,认识特种医疗设备的薄弱环节,针对质量控制问题,提出防止和减少特种医疗设备事故的对策。

基于椭圆度卷轴铺设过程矫直质量控制方法研究

由于管道在铺设过程的反复塑性变形,会产生残余应力、残余塑性应变及椭圆度,较大地影响了铺管作业质量。分析得到椭圆度为铺设过程的重要影响因素,结合已有的卷轴铺设残余应变控制法,提出椭圆度与残余应变共同控制法。通过有限元软件建立三维铺设模型,模拟上卷矫直过程应力应变变化规律。对于模拟的管道截面,若以残余应变作为矫直参数,矫直位移150～300mm均符合要求;但是加入椭圆度作为另一个矫直参数,则选择椭圆度1.40%,矫直位移200 mm左右为最佳。该项研究成果为矫直过程的参数选择提供了合理依据,对工程实践具有一定的借鉴意义。

支原体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究

为探究支原体液体培养基和固体培养基质控菌猪鼻支原体生长规律,以活菌浓度,菌液pH值为指标,比较了不同代次与不同传代方式猪鼻支原体生长情况。结果显示：3%与10%浓度传代,0-48 h内,活菌浓度持续上升,菌液pH值持续下降,3%浓度传代的支原体生长较均匀,更利于菌种生长;1-5代支原体活菌浓度无显著差异;通过0.3 mL菌液加9.7 mL培养基传代,20组菌液平均浓度为（24.4±5.7）×10^-8CFU/mL,通过0.9 mL菌液加29.1 mL培养基传代,菌液平均浓度为（7.2±2.1）×10^-8CFU/mL,两种浓度差异极显著,前种传代方式更有利于支原体生长。本次试验为支原体液体和固体培养基的质控工作标准化提供参考。

沈阳市区县CDC检验科盲样考核质控评价

目的了解沈阳市各县区疾控中心微生物科质控工作现状,为进一步加强微物科室室内质控管理提供依据.方法对该市各区县13个疾控中心微生物科室进行了样本盲样菌株质控考核.结果2001～2003年考核结果虽有逐年提85.44%高,室间质控菌株样品符合率并不理想.体检、食品、环境水、流行病室检测符合率分别为85.44%、91.14%、88.61%、86.08%.结论各县区疾控中心检测室内质控,虽有逐年提高,但基本功缺乏,应进一步加强对沈阳市县区疾控系统实验室质量控制工作的管理.

实验红鲫C1HD系遗传质量控制地方标准的研究

实验红鲫是我国本土实验鱼类。实验红鲫C1HD系是已经培育成功的一种近交系鱼类。基于实验红鲫标准化研究和验证性试验,湖南省质量技术监督局编制发布了《实验鱼类实验红鲫C1HD系遗传质量控制》的湖南省地方标准。该标准包括前言、范围、规范性引用文件、术语和定义、主要生物学特性、繁殖方法、养殖环境、遗传学质量检测及附录A、B、C等内容。