Ultrio和Ultrio plus 2种核酸试剂对献血者HCV RNA筛查的一致性分析

目的追踪分析Ultrio和Ultrio plus 2种核酸试剂对抗-HCV阳性献血者血液标本筛查结果不一致的原因,并评价此2种核酸试剂检测HCV RNA的一致性。方法 6 254份ORTHO抗-HCV ELISA阴性及158份ORTHO抗-HCV ELISA阳性的无偿献血者血液标本,应用Procleix TIGRIS核酸检测系统的Ultrio、Ultrio plus试剂分别进行核酸筛查,对2种核酸试剂筛查HCV RNA结果不一致的献血者进行追踪,重新采集追踪标本补充Procleix Ultrio Elite、HCV Blot、HCV RNA定量检测,综合分析此2种核酸筛查试剂检测HCV RNA的临床灵敏度。结果 6 254份ORTHO抗-HCV ELISA阴性标本Ultrio、Ultrio plus试剂均未检出HCV RNA反应性。158份ORTHO抗-HCV ELISA阳性标本Ultrio反应性48例,Ultrio plus反应性51例,2种核酸试剂均为反应性47例。2种核酸试剂检测结果高度线性相关(Spearman相关系数rs=0.940,P<0.001),Kappa检验显示一致性极强(Kappa=0.940,P<0.001),配对卡方检验差异无统计学意义。6例核酸检测不一致标本分别为:2例Ultrio+/Ultrio plus-中1例HCV Blot阳性、1例HCV Blot可疑,1例HCV病毒核酸定量检测有结果;4例Ultrio-/Ultrio plus+标本中HCV Blot阳性3例、阴性1例,HCV病毒核酸定量检测3例有结果。追踪标本分析:1例Ultrio+/Ultrio plus-标本检测结果HCV Blot确证试验可疑,Ultrio Elite无反应性、HCV病毒核酸定量检测无结果;2例Ultrio-/Ultrio plus+追踪标本Ultrio Elite检测均无反应性,HCV Blot均阳性。结论 Ultrio与Ultrio plus核酸试剂检测HCV RNA一致性好,对临近检出限的低病毒载量标本均存在概率性检出。

DA3200-ABI7500全自动核酸提取平台高敏HCV RNA定量检测性能验证

目的验证DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA方法性能。方法参考美国临床实验室标准化协会批准指南(CSLI-EP),采用DA3200全自动核酸提取平台及荧光定量PCR检测HCV RNA,评价检测方法的核酸提取纯度、精密度、正确度、线性范围、分析灵敏度、特异度和抗污染能力等性能指标。结果核酸提取后A260nm/A280nm比值为2.02。高、低两个浓度样本的批间精密度和批内精密度CV值均≤5%。正确度与抗干扰能力方面,标本实测值与靶值之间的偏离度≤±0.4lg。在13~1.3 E+06 IU/ml范围内,检测结果与靶值有良好的线性关系(Y=0.984X-0.186,r^2=0.998)。最低检出限为20 IU/ml的检出率为100%,且系统具有较强的特异度和抗污染能力。结论基于DA3200-ABI7500全自动核酸提取高敏检测HCV RNA各项分析性能指标均较好,高敏检测对治疗过程的监测及治疗终点判定具有重要意义。

高灵敏度HCV RNA检测在术前筛查中的应用

目的探讨高灵敏度HCV RNA检测在术前筛查中的应用。方法收集2019年1月至10月间本院术前筛查患者血清标本1005例,同时采用化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)和高灵敏度实时荧光定量PCR法分别检测血清中的HCV抗体和HCV RNA载量。对HCV抗体S/CO值与高灵敏度HCV RNA定量检测结果进行比较与相关性分析,并对HCV抗体S/CO值预测丙型肝炎病毒血症的效能进行评价。结果1005例血清标本中,HCV抗体阳性标本228例,阳性检出率为22.7%,未检出HCV抗体阴性而HCV RNA阳性标本;在HCV抗体阳性的样本中,高灵敏度实时荧光定量PCR法检测出HCV RNA阳性样本83例,检出率为36.4%;HCV抗体S/CO值的高低与HCV RNA定量值之间无相关性。以HCV抗体S/CO值≥10.7作为预测丙型肝炎病毒血症的临界值,其灵敏度与特异度分别为92.59%和77.93%,可较好地预测HCV病毒血症。结论高灵敏度HCV RNA定量检测用于术前筛查丙型肝炎患者,可以准确反映患者体内病毒的复制情况和传染性,与传统的术前筛查方法相比,可区分现症感染和既往感染,并具有快速、灵敏和特异的优点,有良好的临床应用价值。

HCV抗体血清学检测联合HCV-RNA检测的应用价值:附2例病例分析

丙型肝炎(丙肝)为常见传染病,丙肝病毒(HCV)抗体血清学检测是HCV感染筛查的主要方式,常用的方法为化学发光法。但感染HCV后,抗体的血清学转换可延迟至数月后。HCV-RNA检测可直接检测病毒复制量,感染HCV后1~2周即可在血清中检测到病毒,是HCV感染的实验室诊断方法之一。但HCV-RNA检测操作繁琐、成本较高,常规实验室不作为筛选使用。威海市立医院收治2例疑诊病毒性肝炎患者,经核酸检测确诊后即给予相应治疗,患者肝功能好转。说明在实验室常规开展HCV-RNA检测提高了HCV感染检出的准确性。

HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性分析

目的探究分析HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测与ALT的相关性。方法随机选取我院在2013年2月—2015年2月期间接收的120例HCV-RNA阳性丙肝患者,采用不同的方法分别检查患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量水平、HCV抗原(HCV-c Ag)、HCV抗体(HCV-Ab)以及HCV-RNA,并对所有数据进行统计分析。结果 120例HCV-RNA阳性丙肝患者中HCV抗原的阳性率为80.0%,HCV抗体的阳性率为95.0%,ALT含量的变化和HCV-RNA载体含量之间没有明显的相关性(P>0.05),HCV-RNA载体含量越高,则HCV抗体的阳性率越高,HCV-RNA载体载体含量的升高会引起ALT异常率的升高,两者之间呈正相关(P<0.05)。结论对于HCV-RNA阳性丙肝患者中HCV抗原、HCV抗体及HCV-RNA联合检测可进一步明确丙肝病毒的感染力,对患者临床病情具有一定的评估作用,同时结合ALT可对患者治疗效果提供一定的参考,值得临床应用。

CHC患者HCV-RNA与自身抗体检测

目的研究对慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)患者的自身抗体和丙型肝炎病毒(hepatitis virus C,HCV)进行检测,进而分析两者的相关性。方法选取2018年12月—2019年12月在我院治疗的144例CHC患者作为研究对象。对所有CHC患者进行自身抗体检测,包括抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)、抗可溶性肝抗原抗体(anti-soluble liver antigen antibody,SLA)、抗肝肾微粒体抗体-1(anti-hepatorenal microsomal antibody-1,LKMA-1)、抗肝细胞胞质1型抗体(anti-hepatocyte cytoplasmic type 1 antibody,LC-1)等,再检测患者的HCV-RNA,根据检测结果分析其相关性。结果在这144例CHC患者中,98例患者的自身抗体检测结果为阳性,阳性率为68.06%(98/144);HCV-RNA检测结果中,112例患者的自身抗体检测呈阳性,阳性率为77.78%(112/144);在HCV-RNA阳性患者中,ANA阳性率高于HCV-RNA检测呈阴性的患者(P<0.05)。结论HCV-RNA检测阳性CHC患者中,其ANA的阳性率更高,提示慢性丙肝患者的自身免疫反应和丙肝病毒复制能力具有一定相关性。

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。

血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p与HCV-RNA联合检测在丙肝疾病诊断中的意义

目的:研究血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p与HCV-RNA联合检测在丙肝疾病诊断中的意义。方法:选取我院收治的丙肝患者100例为观察组,另选我院同期体检正常者100例为对照组,观察两组研究对象血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p与HCV-RNA水平、不同HCV-RNA组别患者的血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p水平、HCV-RNA与血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p相关性以及联合检测与单独检测对丙肝诊断效能之间的差异。结果:观察组的hsa-miR-17-5p表达量明显高于对照组,25(OH)D_3表达水平低于对照组,HCV-RNA阳性组的hsa-miR-17-5p高于HCV-RNA阴性组,25(OH)D_3低于HCV-RNA阴性组,观察组的HCV-RNA与血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p分别呈现正、负相关,通过对联合检测和单独检测对丙肝患者诊断效能评估,发现血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p以及HCV-RNA的临界值分别为24.23μg/L,1.89相对表达量,1.22×10~3 IU/mL。hsa-miR-17-5p+25(OH)D_3+HCV-RNA联合检测的AUC面积大于单独检测。结论:血清25(OH)D_3、hsa-miR-17-5p与HCV-RNA联合检测对于丙型肝炎诊断效能较高,灵敏度较好,建议在临床应用。

不同储存条件和时间对HCV RNA检测结果的影响

目的评估无偿献血者核酸检测标本的反复冻融和在4℃保存不同时间间隔对HCV-RNA检测的影响。方法选取1份定量检测HCV RNA浓度低于102IU/m L的血浆标本作为本次研究的目标标本。将该标本分为2管,每管50 m L,分别在4℃保存和-20℃保存。并于保存第24 h、48 h、72 h、7 d、14 d每组同时重复取5个标本,用Cobas s 201 Config D核酸自动检测系统检测HCV RNA定量值。结果几乎所有检测结果都为阳性;反复冻融标本核酸定量值（IU/m L）随时间延长有逐步下降趋势,在4 h、24 h、48 h、72 h、7 d和14 d检测值分别为：36.9;62.6,89.4,58.8,88.1,68.8;68.0,67.6,40.2,57.9,61.6;〈15.0,19.3,69.9,37.5,56.8;16.9,21.6,〈15.0,37.7,〈15.0;26.4,30.8,49.4,〈15.0,42.7,第4次、第5次和第6次冻融循环中都有1个检测结果低于检测限（〈15.0）。4℃保存7 d内定量检测结果稳定,d14检测结果显著下降（P〈0.05）,出现了3个低于检测限（〈15.0）的结果,在4 h、24 h、48 h、72 h,7 d和14 d时,核酸定量检测结果（IU/m L）分别为36.9;38.0,32.3,40.4,31.5;26.7,43.8,50.8,59.9,44.3;37.9,25.3,63.4,55.5,74.6;50.5,19.2,31.8,95.6,17.1;39.8,30.7,〈15.0,〈15.0,〈15.0。结论血浆标本储存在4℃中小于7 d,冻融循环不超过3次对HCV RNA检测结果无明显影响。

HCV-RNA和抗HCV在丙肝病毒感染检测中的临床应用

目的探讨HCV-RNA和抗HCV在丙肝病毒感染检测中的临床应用。方法以2019年6月-2020年11月在本院就诊的门诊及住院患者496例为研究对象,取患者血清样本,使用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测患者的感染情况,固相时间分辨免疫荧光分析法(TRIFMA)检测样本中抗HCV(包括IgG、IgM)的含量,分析不同检测方法的诊断效能并进行统计分析。结果对496份样品进行检测,HCV-RNA结果显示阳性73例,对HCV感染患者的检测敏感性为88.75%,特异性为99.52%;抗HCV结果显示阳性96例,阴性400例,对HCV感染患者的检测敏感性为90.00%,特异性为94.23%;二者联合检测阳性122例,对HCV感染患者的检测敏感性为97.50%,特异性为89.42%;HCV-RNA和抗HCV联合检测的敏感性高于HCV-RNA检测,特异性低于HCV-RNA检测,差异均有统计学意义(P<0.05);抗HCV检测的特异性低于HCV-RNA检测,差异有统计学意义(P<0.05);80例HCV感染患者中,HCV-RNA和抗HCV检出情况间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论HCV-RNA检测特异性高于抗HCV检测,二者联合检测能够显著提升敏感性,联合检查上述两种指标有利于丙肝病毒流行的防治。

丙肝患者血清抗-HCV和HCV RNA检测效果分析

目的研究丙肝患者血清抗-HCV和HCV RNA检测效果分析。方法选择我院于2018年9月至2019年4月进行诊治的丙肝患者150例,由于检测方式不同分为两组均75例,其中对照组实施血清抗-HCV,研究组实施HCV RNA检测,观察两组患者检测阳性率、抗-HCV定量值与HCV-RNA检出率的关系。结果研究组阳性率54.67%与对照组56.00%之间,差异无统计学意义,P>0.05。其中抗-HCV定量值≤20s/co阳性率达到46.43%,抗-HCV定量值在20-阳性率为60.98%,抗-HCV定量值在60-阳性率为90.00%,抗-HCV定量值≥100阳性率为92.31%,随着抗-HCV定量值的增大,HCV-RNA阳性率也在不断提高。结论对于疑似丙肝患者,均可采取血清抗-HCV和HCV RNA检测,检测准确率较高,在临床工作可将两种检测方式同时使用,有利于提升患者治疗效果,值得应用。

深圳地区抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者的HCV窗口感染期确认

目的了解深圳地区血液筛查中抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者的检出情况及其HCV窗口感染期的确认。方法 2008-2014年本中心采用酶免(ELISA)及病毒核酸检测方法(NAT)筛查492 325份无偿献血者样品,获得6例抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者,使用荧光定量检测方法(QPCR)和巢式PCR(Nested-PCR)确认其HCV RNA是否存在并随访跟踪复查,以确定6例献血者核酸检测结果假阳性或HCV窗口感染期的性质。结果本中心在这7年期间,492 325份献血者的抗-HCV阴性/NAT初筛阳性检出率为1/82 054(6/492 325);6例抗-HCV阴性/NAT初筛阳性献血者,确认1/6例(16.7%)处于HCV窗口感染期,1/6例(16.7%)判定为核酸检测采血管血样污染HCV造成假阳性结果,4/6例(66.7%)判定为核酸仪器检测过程中出现假阳性导致NAT初筛阳性。故本中心目前献血者HCV窗口感染期检出率为1:492 325。结论目前核酸检测存在假阳性情况,需建立额外核酸扩增方法及追踪随访才能确定样品性质,确保病毒感染窗口期结果的准确性。

HCV抗体阳性样品核酸及核心抗原检测分析

目的对90份临床检测为丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性样品检测其核心抗原(HCV-cAg)、荧光定量PCR,观察3者间的相关性。方法采集临床诊断为HCV-Ab阳性样品90份,分别用市售的HCV-cAg检测试剂盒、荧光定量PCR检测试剂盒、HCV-Ab检测试剂盒进行3种指标的检测复核。结果 90份临床HCV-Ab阳性样品,检出HCV-cAg阳性25份(27.8%),荧光定量PCR检出67份阳性(74.4%),抗体复核阳性的75份(83.33%);检出率HCV-Ab(83.33%)>荧光定量(74.4%)>HCV-cAg(27.8%)。结论丙肝的3种标志物之间存在一定的联系,但不同试剂的检测结果间存在明显差异。

RNA加尾和引物延伸法检测黑腹果蝇3种microRNA表达量

采用RNA加尾和引物延伸real time PCR法实时定量检测了黑腹果蝇Drosophila melanogaster的bantam、mir-14、mir-2a共3种microRNA（miRNA）在各发育阶段组织中的相对表达情况,发现3种miRNA在不同发育时期的表达差异明显,其表达变化规律与文献报道基本一致,验证了该法的可靠性.这种＂加尾和引物延伸＂方法,仅需1~10 ng总RNA或等同物,检测范围可达7个数量级,为昆虫miRNA研究提供了可靠的定量检测方法.

丙型肝炎抗体S／CO值与RNA定量检测结果相关关系的初步探讨

目的探讨免疫发光法检测丙肝抗体S／CO（signaltocutoff）值与HCVRNA检测阳性率之间的关系。方法对1111例丙肝患者行HCV抗体和HCVRNA的实验室检测，以抗体水平进行分段统计，并以HCVRNA检测结果为参考采用ROC曲线评价S／CO值对丙肝患者的诊断效能。结果HCVRNA阳性率随s／co值的增大而升高，S／CO值在0～1时．HCVRNA阳性率为1．09％；在1～5时，阳性率为5．06％；在5～8时，阳性率为24．5％；8～10时，为50％；〉10，阳性率为100％。同时发现，S／CO值较低时HCVRNA阳性病例多为HIV／HCV共感染患者。根据ROC曲线可知，S／CO最佳诊断界值为6．94．此时诊断灵敏度和特异度均为93％。结论丙肝抗体S／CO值与HCVRNA检测结果较一致，临床实践中可参考S／CO值，并充分考虑患者实际情况，以合理选择检验项目，提高诊断效能。

非编码RNA检测技术的研究进展

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)广泛存在于生物体中,不编码蛋白质,以RNA的形式在许多生命过程中发挥着重要的作用。随着越来越多ncRNA生物学功能的揭示,检测ncRNA在不同生理和病理状态下表达谱的变化,已迅速成为研究的热点。为了将ncRNA更好地应用于农业生产和生物医学研究,笔者对ncRNA最新检测技术的原理与应用进行了综述。

丙型肝炎抗体S／CO值与RNA定量检测结果相关关系的初步探讨

目的探讨免疫发光法检测丙肝抗体S／CO（signaltocutoff）值与HCVRNA检测阳性率之间的关系。方法对l111例丙肝患者行HCV抗体和HCVRNA的实验室检测，以抗体水平进行分段统计，并以HCVRNA检测结果为参考采用ROC曲线评价S／C0值对丙肝患者的诊断效能。结果HCVRNA阳性率随S／C0值的增大而升高，s／co值在O～1时，HCVRNA阳性率为1．09％；在1～5时，阳性率为5．06％；在5～8时，阳性率为24．5％；8～10时，为50％；〉10，阳性率为100％。同时发现，S／CO值较低时HCVRNA阳性病例多为HIV／HCV共感染患者。根据ROC曲线可知，s／co最佳诊断界值为6．94，此时诊断灵敏度和特异度均为93％。结论丙肝抗体s／co值与HCVRNA检测结果较一致，临床实践中可参考S／C0值，并充分孝虑患者实际情况。以合理选择检验项目，提高诊断效能。

RNA甲基化修饰检测研究进展

RNA修饰是转录后调控基因表达的重要因素,在表观遗传学领域具有重要的研究意义。目前,许多已知的RNA修饰检测方法依赖抗体的特异性。最常用的是基于RNA甲基化免疫沉淀结合测序法(methylated RNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq),但这种方法也容易产生假阳性和假阴性结果。因此,近年来出现了一系列免抗体的测序方法,以及探索成本低廉、简单易操作的免抗体RNA修饰生物传感检测新方法。此外,特定位点的RNA修饰检测是探明甲基化对疾病具体调控机制的关键,单碱基分辨检测方法构建是必要的前提。本综述总结近年来RNA甲基化修饰特异性检测以及特定位点RNA修饰定量检测的新方法。主要从基于免疫途径、甲基化特异性酶途径、杂交方法、化学处理、标记技术以及RNA修饰原位检测技术进行总结归纳,分析不同检测方法的优点和不足。同时讨论了通用性检测方法及第三代测序用于直接检测RNA甲基化修饰的研究前景。

抗-HCV ELISA单阳、双阳献血者补充实验及跟踪分析研究

目的对抗-HCV ELISA有反应性献血者进行追踪检测,了解其真实的病毒感染情况。方法对抗-HCV ELISA有反应性献血者在献血3个月、6个月时采集标本,进行ELISA试验、HCV PCR检测及RIBA确证3种平衡检测。结果36例单试剂阳性标本中,1例跟踪核酸检测阳性,RIBA确证阳性。36例双试剂阳性标本中有20例确证阳性(55.6%),不确定11例(30.6%),阴性5例(13.9%),跟踪结果无变化。结论应尽快出台并实施献血者补充实验的具体规定,确保血液安全,减少献血者流失;在试剂的选择上应选择特异性和灵敏度都高的试剂,无论选择哪种检测方式,建议ELISA方法应选择双抗原夹心法,也希望尽快在献血者中开展NAT和ELISA平行检测,以有效降低输血传播感染病毒的风险。