维拉帕米对铜绿假单胞菌群体感应抑制作用的体外研究

考察维拉帕米对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)群体感应(Quorum sensing,QS)的抑制作用。测定维拉帕米最小抑菌浓度(Minimal inhibit concentration,MIC);构建培养环境,考察维拉帕米对PA生长的影响,绘制生长曲线;毒力因子表达实验中,分别考察维拉帕米对PA弹性蛋白酶表达、蛋白水解酶表达和绿脓毒素表达的影响。结果表明,维拉帕米MIC_(50)为128μg/mL,MIC_(90)为512μg/mL,最低抑菌质量浓度范围为128~512μg/mL时,具有较好抑菌活性;生长曲线表明,维拉帕米质量浓度为16μg/mL时,开始抑制PA的生长,随着浓度的增加,抑制作用逐渐增大;当维拉帕米质量浓度为512、256、128、64、32、16μg/mL时,明显抑制弹性蛋白酶表达(P<0.01),质量浓度为8μg/mL时,对弹性蛋白酶有一定抑制作用(P<0.05),维拉帕米质量浓度为512、256、128、64、32μg/mL时,明显抑制蛋白水解酶的活性和绿脓毒素的表达(P<0.01),当质量浓度为16μg/mL时,对蛋白水解酶活性和绿脓毒素的表达有一定抑制作用(P<0.05);维拉帕米对QS的抑制有浓度依赖。维拉帕米对PA的QS有明显抑制作用,体外可明显抑制PA生长,可作为抗菌增效的潜在开发药物。

5株海洋来源真菌的卤盐调节发酵产物分析与代谢产物鉴定

目的对来源于青岛沿海的5株耐盐真菌,分析卤盐胁迫(halogen stress)对次生代谢产物结构多样性和活性的影响,并分离鉴定特征化合物。方法对5株海洋来源真菌进行单菌株多化合物(OSMAC)策略研究,使用高效液相层析(HPLC)法对次生代谢产物化学多样性进行分析,并采用非真菌的紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum)进行群体感应(QS)活性测试。用中压柱色谱和制备HPLC进行分离纯化,根据波谱数据鉴定化合物结构。结果发酵培养基中碳氮源或卤盐的变化可改变5株耐盐真菌次生代谢产物的种类,继而带来活性的变化。从菌株L6的大米+NaCl培养基发酵粗提物中分离鉴定其主产物为细交链格孢酮酸。结论卤盐胁迫可丰富耐盐真菌次生代谢产物多样性,海洋来源真菌菌株对药用资源开发具有进一步研究价值。