R环结合蛋白对肺腺癌患者预后的预测及药物敏感性分析

目的:研究R环结合蛋白对肺腺癌患者预后及抗肿瘤药物敏感性的影响,为R环在肿瘤生物学中的调控机制研究及临床决策提供科学依据。方法:从R环结合蛋白质组学研究文献及相关数据库中获取R环结合基因,以癌症基因组图谱数据库中的403例肺腺癌患者的数据作为训练集,以基因表达综合数据库中GSE14814与GSE31210两个数据集的数据作为验证集,采用加权基因共表达网络分析(WGCNA)、最小绝对收缩和选择算子(LASSO)、多因素Cox回归分析逐步筛选具有独立预后预测作用的临床变量及R环特征基因,maftools分析R环特征基因的突变特征,构建基于R环特征基因的风险评分和列线图模型,验证该模型对高、低风险患者预后预测的能力及其对抗肿瘤药物治疗敏感性的影响。最后采用实验验证R环特征基因表达对抗肿瘤药物敏感性的影响。结果:收集整理得到R环特征基因1551个,WGCNA筛选得到显著影响临床表型的R环基因78个,LASSO回归分析保留R环基因14个,多因素Cox回归分析筛选到3个与患者预后密切相关的R环特征基因(HEXIM1、GLI2、PLEC)和一个临床变量(肿瘤分级),根据各参数的回归系数构建预后模型和列线图模型。Kaplan-Meier生存分析显示,高风险组患者预后明显差于低风险组(P<0.01)。时间依赖受试者工作特征曲线表明,该模型在训练集和验证集列队中均具有较好的预测能力。抗肿瘤药物敏感性预测结果表明,高风险组患者对肺癌化疗和靶向治疗药物的敏感性更低。PLEC基因沉默实验表明抑制PLEC的表达能增强表皮生长因子受体野生型非小细胞肺腺癌细胞株对吉非替尼的敏感性。结论:R环结合蛋白是肺腺癌预后的风险因素,联合临床信息和R环特征基因可以有效预测肺腺癌患者的预后,靶向上述R环特征基因可能对提高患者存活率具有重要意义。

内质网应激介导巨噬细胞极化分子机制研究进展

内质网(ER)是维持细胞内Ca 2+稳态、折叠新合成的分泌蛋白和膜蛋白以及蛋白质翻译后修饰的重要细胞器。ER腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集,可激活内质网应激(ERS),进而激活蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、需肌醇酶1α(IRE-1α)和活化转录因子6(ATF6)三个不同的下游信号通路影响细胞的存活、分化和表型转换。近年来研究表明ERS下游信号级联反应与诱导巨噬细胞向促炎性M1型极化(IFN-γ和LPS)和抗炎性M2型极化(IL-4和IL-10)的信号通路之间存在密切相互作用,但两者之间的具体分子机制错综复杂。文中总结了ERS介导巨噬细胞极化的主要机制,重点讨论了ERS的三个不同下游信号影响巨噬细胞极化的分子机制。

Rspo3/Lgr5促进N-钙黏蛋白表达参与小鼠肝损伤

目的本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤。方法采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法以及免疫荧光染色方法测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5的RNA干扰实验以确定Rspo3是否通过作用于Lgr5上调Ncad表达。结果在损伤小鼠肝组织中,Rspo3及其受体Lgr5显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3及Lgr5表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降。结论在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤。

药物分子设计前沿技术融入药物化学实验教学——基于分子对接技术的抑制PERK的活性化合物筛选实验

药物化学是一门实践性较强的课程,药物分子设计的快速发展,对于药物化学的实践学习具有非常重要的指导作用。因此,我们设计了一个基于分子对接技术的抑制蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase, PERK)活性化合物的虚拟筛选实验。该实验可以帮助学生掌握分子对接技术的基本原理,熟悉分子对接技术筛选活性化合物的基本操作方法,并学会药物分子设计相关专业软件的使用及实验数据的分析。通过具体的实践练习,使学生了解药物设计前沿技术,提升学生从事药物研发的素养。

当归拈痛汤调控PERK/Bip通路减轻膝关节骨性关节炎大鼠软骨损伤实验研究

目的观察当归拈痛汤对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响,并分析其作用机制。方法50只SD雄性大鼠通过随机数表法分为对照组(n=10)与造模组(n=40),通过木瓜蛋白酶关节腔内注射法建立KOA大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组(n=10),当归拈痛汤组(低、中、高剂量,n=10)。当归拈痛汤组分别按照低剂量6.5 g/kg、中剂量13.0 g/kg、高剂量26.0 g/kg的药量进行灌胃,对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,连续给药1个月。采用游标卡尺测量大鼠双侧膝关节直径;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用甲苯胺蓝染色观察各组大鼠膝关节软组织病理变化;通过实时荧光定量PCR(Real time-PCR)与免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA与蛋白表达水平。结果给药期间对照组大鼠未见膝关节肿胀,与对照组比较,模型组大鼠双侧膝关节直径显著增加,采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节直径显著缩短(P<0.05);病理观察结果显示模型组大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损,采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损症状显著改善;与对照组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平均显著提高,采用当归拈痛汤治疗可以下调大鼠血清TNF-α、IL-1β含量,PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平,中、高剂量当归拈痛汤组大鼠以上各项指标与模型组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论当归拈痛汤可以有效减轻KOA大鼠膝关节肿胀程度,降低血清炎性细胞因子含量,减轻软骨损伤,其机制可能与调控PERK/Bip通路,下调PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平有关。

内质网应激在吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制研究

目的:研究内质网应激(ERS)在吸烟慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠膈肌细胞凋亡中的作用及机制。方法:野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、COPD模型组、激动剂组、拮抗剂组,Perk基因敲除小鼠分为PERK-KO组、PERKKO+模型组,采用被动吸烟法复制COPD模型,给予ERS激动剂毒胡萝卜素或拮抗剂4-苯基丁酸干预,检测0.3 s用力呼气容积与用力肺活量比(FEV_(0.3)/FVC)、最高峰值流速(PEF)、血清及支气管肺泡灌流液(BALF)中IL-1β及IL-6含量、肺组织病理改变、膈肌中细胞凋亡率及蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、肌醇酶1α(IRE1α)、活化转录因子6(ATF6)、p-eIF2α、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Caspase-12表达水平。结果:与对照组相比,模型组FEV_(0.3)/FVC、PEF降低,肺组织出现病理改变,膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05);与模型组相比,激动剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、peIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平提高(P<0.05),拮抗剂组膈肌中细胞凋亡率及PERK、p-eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低(P<0.05);敲除PERK后,与模型组相比,PERK-KO+模型组膈肌中细胞凋亡率及eIF2α、CHOP、Caspase-12表达水平降低。结论:吸烟COPD模型小鼠膈肌细胞凋亡过度激活,ERS的PERK通路激活与膈肌细胞凋亡有关。

lncRNA BDNF-AS在氧糖剥夺/复氧复糖条件下的表达、定位及互作蛋白质分析

脑缺血缺氧会引起长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达变化。为了探究lncRNA BDNF-AS在氧糖剥夺/复氧复糖条件下的表达、定位及互作蛋白质,将SH-SY5Y细胞缺氧缺糖8 h、复氧复糖24 h,构建氧糖剥夺/复氧复糖细胞模型;采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞活力;采用qRT-PCR检测核质中lncRNA BDNF-AS表达水平;利用pull-down和质谱技术对lncRNA BDNF-AS互作蛋白质进行鉴定;利用基因本体论(Gene Ontology,GO)、京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析互作蛋白质的功能及参与的通路;利用STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用网络。结果显示:氧糖剥夺/复氧复糖条件下,lncRNA BDNF-AS表达量显著升高,且胞质表达量显著高于胞核;氧糖剥夺/复氧复糖组有120种蛋白质可能与lncRNA BDNF-AS存在潜在的相互作用。进一步的生物信息学分析表明,lncRNA-BDNF-AS可能与UBA52、NKAP、TBK1、RAB1A、RPL38等蛋白质存在互作关系。综上可知,lncRNA BDNF-AS可能通过绑定自噬和凋亡相关蛋白质影响神经细胞功能。

有氧运动经CNPY2调控PERK-CHOP信号通路改善小鼠非酒精性脂肪肝的机制研究

目的:采用冠层同源物2(CNPY2)基因敲除,结合运动干预,探讨CNPY2和有氧运动在高脂膳食诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的作用及机制。方法:(12±1)周龄SPF级C57BL/6J雄性CNPY2基因敲除(KO)小鼠及其同系同龄同窝野生型(WT)小鼠适应性喂养1周后,随机分为对照组、模型组和模型运动组。对照组予普通饲料喂养,模型组和模型运动组予高脂饲料喂养,连续17周。模型运动组从第10周开始进行连续有氧运动干预,直至第18周实验结束。HE和油红O染色观察肝组织病理形态;全自动生化仪检测小鼠血清高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平;Western Blot法检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α、CHOP蛋白表达;qRT-PCR法检测肝组织PERK mRNA和eIF2αmRNA表达;Tunel法检测肝细胞凋亡。结果:WT小鼠模型组CNPY2表达较对照组显著升高(P<0.05),WT小鼠模型运动组CNPY2表达较模型组显著降低(P<0.05)。同时,与对照组比较,KO和WT小鼠模型组均可见明显肝细胞脂肪性变和脂滴,其血清ALT、AST、TC、TG和LDL-c水平、肝组织PERK、p-eIF2α、CHOP、PERK mRNA和eIF2αmRNA表达、肝细胞凋亡显著升高(P<0.05),血清HDL-c水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,KO和WT小鼠模型运动组上述指标得到显著改善(P<0.05)。与WT小鼠比较,KO小鼠肝组织脂肪性变减轻,肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α、CHOP、PERK mRNA和eIF2αmRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:CNPY2基因缺失和有氧运动均可有效改善NAFLD,其机制可能与其下调CNPY2表达,抑制PERK-CHOP信号通路活性,降低PERK-CHOP信号通路相关分子表达,减少肝细胞凋亡有关。

核桃主要致敏蛋白Jugr1的分离纯化、鉴定与分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)等方法,以Jug r 1含量为指标,对云南7个不同产地的泡核桃(Juglans sigillata)进行筛选,进一步利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤层析、液相色谱-串联质谱等手段制备Jug r 1并进行优化和鉴定,通过圆二色谱对Jug r 1的结构进行表征,最后采用双抗夹心ELISA法测定其含量。结果表明:保山隆阳产地核桃的总蛋白含量和Jug r 1含量均最高,用于后续实验;经优化得到Jug r 1的最佳硫酸铵分级沉淀分离区间为40%~80%,进一步对其进行凝胶过滤层析的最佳条件为上样质量浓度30 mg/mL、上样体积4 mL、洗脱流速1 mL/min;在此条件下纯化得到Jug r 1含量达19.90 mg/120 mg上样量,蛋白得率为16.58%;质谱分析表明该蛋白符合Jug r 1的典型特征;圆二色谱显示Jug r 1的二级结构以α-螺旋为主,多种构象共存;经“两步法”分离纯化后可获得蛋白纯度占总蛋白96%以上的Jug r 1。本结果可为深入研究Jug r 1提供科学基础,并为其他坚果致敏蛋白的分离纯化提供参考。

天麻蛋白对OGD/R诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制研究

目的研究天麻蛋白对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的HT22细胞损伤的保护作用及机制。方法将体外HT22细胞常规培养,生长至对数生长期后铺板并随机分为对照组、OGD/R组、依达拉奉组、天麻蛋白组。以连二亚硫酸钠(Na_(2)S_(2)O_(4))10 mmol·L^(-1)合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,继而恢复为无血清高糖DMEM培养2 h进行复糖复氧处理,以建立体外OGD/R模型。依达拉奉和天麻蛋白为自氧糖剥夺前24 h开始即加入相应药物终浓度,持续至复糖复氧结束。采用MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法测定LDH泄露率,试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,丙二醛(MDA)含量及活性氧(ROS)水平,流式细胞技术Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Western blot检测OGD/R诱导损伤的HT22细胞内Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3、p-AMPK、AMPK、Nrf2、Nrf2入核、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平变化。结果与对照组相比,OGD/R组细胞存活率下降(P<0.01),LDH泄露率升高(P<0.01),SOD、GSH-PX活性下降(P<0.01),MDA含量及ROS水平增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达量下降(P<0.01),Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达量升高(P<0.01);与OGD/R组相比,天麻蛋白可提高细胞存活率(P<0.01),降低LDH泄露率(P<0.01),提高SOD活性及GSH-PX活性(P<0.01),降低MDA含量及ROS水平(P<0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01),上调HT22细胞中Bcl-2、p-AMPK、Nrf2入核、HIF-1α、VEGF蛋白的表达量(P<0.01),有效抑制Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达(P<0.01)。结论天麻蛋白对HT22细胞OGD/R损伤具有神经保护作用,其机制与活性氧/线粒体凋亡通路、AMPKNrf2通路和缺氧诱导因子通路相关蛋白密切相关。

内质网应激通路相关蛋白IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达及其功能的生物信息学分析

目的:本研究旨在通过生物信息学方法系统分析肌醇需求酶1(Inositol-Requiring Enzyme 1,IRE1)、蛋白激酶R样内质网激酶(Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Kinase,PERK)、激活转录因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)在舌鳞癌中的表达及意义。方法:使用GEO、Kaplan-Meier Plotter、GeneMANIA、DAVID等多个数据库对IRE1、PERK、ATF6在舌鳞癌中的表达与预后价值、相互蛋白作用网络及功能富集进行综合分析。结果:ATF6在舌鳞癌组织中表达高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P <0.05)。IRE1及PERK高表达组患者总生存率(OS)高于低表达组,ATF6高表达组患者OS低于低表达组,差异均具有统计学意义(P <0.05)。本研究筛选出与IRE1、PERK、ATF6相互作用的蛋白质各20个并进行GO富集分析。IRE1及相关蛋白富集于内质网、线粒体等细胞组分中,具有蛋白质结合、蛋白磷酸酶结合等分子功能,参与内质网应激反应、泛素依赖性ERAD途径等生物学过程。PERK及相关蛋白富集于胞液、细胞膜等细胞组分中,具有翻译起始因子活性、RNA结合等分子功能,参与内质网未折叠蛋白反应、细胞对葡萄糖饥饿的反应等生物学过程。ATF6及其相关蛋白富集于内质网、细胞核等细胞组分中,具有转录调控区序列特异性DNA结合、蛋白质异二聚化活性等分子功能,参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、内质网未折叠蛋白反应等生物学过程。结论:ATF6在舌鳞癌组织中呈现高表达,同IRE1、PERK与舌鳞癌患者不良预后相关。在未来抗肿瘤治疗中,IRE1、PERK、ATF6可能成为舌鳞癌的诊断和治疗的新选择。

茯苓酸对人骨肉瘤细胞系MG-63的增殖凋亡、迁移侵袭影响及PERK/CCAAT信号通路调控作用

目的观察茯苓酸(PA)对人骨肉瘤细胞系MG-63增殖、迁移、凋亡和侵袭的影响,并探讨PA对蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)信号通路的调控作用。方法体外培养MG-63细胞,分为对照组、低浓度PA组(PA-L组)、中浓度PA组(PA-M组)、高浓度PA组(PA-H组)、高浓度PA+蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)抑制剂GSK2606414组(PA-H+GSK2606414组),PA-L组、PA-M组及PA-H组分别用含20、40及80μmol/L PA的培养基培养,PA-H+GSK2606414组用含80μmol/L的PA和5μmol/L的GSK2606414培养基培养,对照组用空白培养基培养。分别于培养24、48、72 h时采用MTT法观察各组细胞增殖情况;培养24 h时采用细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况;培养48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭情况;培养48 h时采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率;培养48 h时,采用RT-qPCR法检测PERK及CHOP的mRNA表达,并采用WESTERN Blotting法检测PERK/CHOP信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白真核生物起始因子2α(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、CHOP、BCL2相关X蛋白(Bax)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)。结果与对照组比较,PA-M组及PA-H组培养48与72 h时细胞OD_(570nm)值低、细胞迁移率低、细胞侵袭数少、细胞凋亡率高(P均<0.05);与PA-M组相比,PA-H组培养48及72 h时的细胞OD_(570nm)值低、细胞迁移率低、细胞侵袭数少、细胞凋亡率高(P均<0.05);与PA-H组相比,PA-H+GSK2606414组细胞培养48及72 h时的OD_(570nm)值高、细胞迁移率高、细胞侵袭数多、细胞凋亡率低(P均<0.05)。与对照组比较,PA-M组及PA-H组细胞PERK及CHOP mRNA相对表达量高,PERK及eIF2α磷酸化水平高,ATF4、CHOP、Bax蛋白相对表达量高,Bcl-2相对表达量低(P均<0.05);与PA-M组相比,PA-H组细胞PERK及CHOP mRNA相对表达量高,PERK及eIF2α磷酸化水平高,ATF4、CHOP、Bax蛋白相对表达量高,Bcl-2相对表达量低(P均<0.05);与PA-H组相比,PA-H+GSK2606414组细胞PERK及CHOP mRNA相对表达量低,PERK及eIF2α磷酸化水平低,ATF4、CHOP、Bax蛋白相对表达量低,Bcl-2相对表达量高(P均<0.05)。结论PA可抑制MG-63细胞的增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。PA可能通过激活PERK/CHOP信号通路,抑制MG-63细胞的增殖迁移及侵袭,促进MG-63细胞的凋亡。

RNA结合蛋白人类抗原R在肝细胞癌中的研究进展

肝细胞癌(HCC)具有发病率高、早期症状不明显、治疗手段局限、患者预后差等特点,因此寻找有效的早期诊断、监测、治疗HCC的方法迫在眉睫。RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)作为一种重要的转录后调节因子,可通过调节相关靶信使RNA的稳定性、翻译、亚细胞定位和降解等生物过程参与肿瘤的发生发展。与邻近正常肝组织相比,HuR蛋白在HCC中持续高表达,并参与肝脏恶性转化相关基因的转录后调控。因此,HuR蛋白可作为HCC患者生存率较差的预测指标,深入研究HuR在HCC中的作用机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

花旗松素调控内质网应激PERK-ATF4通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究

目的探讨花旗松素(TAX)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚的影响及分子机制。方法24只SHR分为SHR对照组(SHR组)、TAX组(20 mg/kg)、TAX+PERK激活剂CCT020312(CCT)组(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT),每组8只;另选8只正常血压Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照组(WKY组),给予相应的药物持续干预8周。实验过程中观察大鼠血压变化,并于干预结束后超声心动图检测大鼠舒张期室间隔厚度(IVSd)、收缩期室间隔厚度(IVSs)、左心室射血分数(LVEF)判断心肌肥厚程度和心脏功能,计算心脏指数、左心室指数,苏木精-伊红(HE)染色、小麦胚芽凝集素(WGA)染色和Masson染色评估心肌组织病理学变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、B型利钠肽(BNP)、I型胶原蛋白α1链(COL1A1)和Ⅲ型胶原蛋白α1链(COL3A1)mRNA表达,Western blot检测心肌组织蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-转录激活因子4(ATF4)通路相关蛋白表达。结果干预结束后,与WKY组相比,SHR组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、胶原容积分数(CVF)、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、ATF4、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白水平和p-PERK/PERK比值升高(均P<0.05),LVEF降低(P<0.05);与SHR组相比,TAX组SBP、DBP、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、CVF、心肌组织ANP、BNP、COL1A1和COL3A1 mRNA表达、GRP78、ATF4、CHOP蛋白水平和p-PERK/PERK比值降低(均P<0.05),LVEF升高(P<0.05);CCT020312可部分逆转TAX对心脏功能和心肌肥厚的保护作用。结论TAX可通过抑制内质网应激(ERS),改善高血压心肌肥厚,其作用机制可能与抑制PERK-ATF4通路有关。

血清sFLT1、CTRP3水平与子宫内膜异位症的相关性

目的探究血清可溶性血管内皮生长因子受体1(soluble vascular endothelial growth factor receptor-1,sFLT1)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白3(C1q/tumor necrosis factor related protein 3,CTRP3)与子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的相关性。方法回顾性分析江西省景德镇市妇幼保健院收治的80例EMT患者(EMT组),依据r-AFS分期分为Ⅰ-Ⅱ期43例,Ⅲ-Ⅳ期37例,按痛经程度分为轻度46例,中-重度34例;对照组为同时间段健康体检女性80例;检测并分析两组血清sFLT1、CTRP3水平,多因素logistic回归分析Ⅲ-Ⅳ期EMT影响因素,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评价血清s FLT1、CTRP3对Ⅲ-Ⅳ期EMT诊断价值。结果EMT组患者血清sFLT1、CTRP3水平低于对照组(P<0.05);中-重度痛经者血清sFLT1、CTRP3水平低于轻度者(P<0.05);r-AFS分期Ⅲ-Ⅳ期患者血清sFLT1、CTRP3水平低于Ⅰ-Ⅱ期者(P<0.05);EMT患者血清sFLT1、CTRP3分别与r-AFS分期、痛经程度呈负相关(P<0.05)。回归分析显示,sFLT1、CTRP3是Ⅲ-Ⅳ期EMT影响因素(P<0.05);血清sFLT1、CTRP3及联合诊断Ⅲ-Ⅳ期EMT的AUC为0.811、0.832、0.931,联合诊断效能优于sFLT1、CTRP3单独诊断。结论EMT患者血清sFLT1、CTRP3水平均降低,与痛经程度、r-AFS分期相关,是Ⅲ-Ⅳ期EMT影响因素,二者联合可辅助评估r-AFS分期。

RNA结合蛋白人类抗原R与冠心病关系的研究进展

人类抗原R(HuR)是一种广泛存在于哺乳动物体内的RNA结合蛋白,通过转录后修饰过程靶向结合信使RNA(mRNA)的非翻译区调节其翻译,从而影响蛋白质功能和细胞命运。HuR与冠心病的发生发展密切相关。冠心病是由动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血再灌注损伤等病理生理过程逐步演变而来的一组综合征。而HuR在冠心病的发生机制中扮演“分子开关”的角色,精细调控着mRNA的翻译与衰减。因此,深入了解HuR与冠心病的内在关系,有助于未来冠心病患者的治疗及新药物的筛选和开发。

蛋白激酶R样内质网激酶参与维生素E琥珀酸酯激活人胃癌细胞内质网应激和自噬的调控

目的:研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)在维生素E琥珀酸酯(VES)激活人胃癌细胞发生内质网应激(ERS)与自噬中的影响。方法:体外培养人胃癌细胞系MKN28和MKN45,通过CCK-8法绘制细胞生长曲线,根据生长曲线确定用药剂量。不同剂量的VES处理细胞24 h后,qRT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和beclin-1的mRNA表达,Western blot检测GRP78、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1及PERK的蛋白表达。用2μmol/L GSK2606414(GSK)抑制PERK,设置对照组、GSK组、VES组和VES+GSK组,Western blot检测PERK、GRP78、LC3和beclin-1的蛋白表达。结果:CCK-8实验结果显示,VES对两种人胃癌细胞系的活力均有显著抑制作用(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,两种细胞中beclin-1和GRP78的mRNA表达均随着VES剂量的增加而不断升高(均P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,VES均可以显著上调两种细胞中GRP78、PERK、LC3和be⁃clin-1的表达(均P<0.05);抑制PERK后,两种细胞中p-PERK/PERK的比值显著下降(P<0.01),相较VES组,VES+GSK组GPR78、LC3和beclin-1的蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:VES激活人胃癌细胞发生ERS和自噬的同时上调PERK的表达,而PERK参与了VES对ERS和自噬的调节。

内质网应激信号通路PERK与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的探究内质网应激信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)与动脉粥样硬化(AS)斑块稳定性的关系。方法选取2021年2月—2023年2月收治的150例有AS斑块患者作为观察组,另选取150例健康体检者作为对照组。比较2组PERK信号通路相关因子水平,分析PERK信号通路相关因子对AS斑块发生风险的影响;比较不同斑块性质患者临床资料、PERK信号通路相关因子,分析PERK信号通路相关因子与血脂指标的相关性及对AS斑块稳定性的影响;受试者工作特征曲线评价PERK信号通路相关因子对AS斑块稳定性的预测价值。结果观察组血清PERK、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)水平较对照组高(P<0.01)。当血清PERK、CHOP及ATF4处于高水平时,AS斑块发生风险分别是低水平的2.947倍、1.586倍、1.727倍。稳定斑块患者总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、PERK、CHOP及ATF4低于不稳定斑块患者,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)高于不稳定斑块患者(P<0.01)。AS斑块患者PERK、CHOP、ATF4分别与TC、LDL-C、TG呈正相关,与HDL-C呈负相关(P<0.01)。PERK、CHOP、ATF4是AS斑块不稳定的影响因素(P<0.01)。PERK、CHOP、ATF4联合预测AS不稳定斑块的曲线下面积为0.929,较各因子单独预测AUC明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论PERK信号通路参与AS斑块发生发展,与血脂指标TC、LDL-C、TG、HDL-C显著相关。检测PERK信号通路相关因子,有助于临床预判AS斑块性质。

首乌丹参方预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤PKC与iNOS mRNA表达的影响

目的观察首乌丹参方(GTSMP)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)保护作用。方法将实验大鼠分为假手术组、模型组、首乌丹参方高剂量组(9g生药/kg)、首乌丹参方中剂量组(4.5g生药/kg)、首乌丹参方低剂量组(2.25g生药/kg)、阳性对照药复方丹参滴丸组(4.5g生药/kg)、工具对照药消心痛组(1.67mg/kg),共7组。采用结扎大鼠冠状动脉前降支30min/开放120min建立心肌I/R模型。通过RT-PCR分子生物学方法,观察蛋白激酶C(PKC) mRNA和iNOS mRNA的表达情况以及首乌丹参方预处理对其的影响。结果与假手术组相比,模型组和首乌丹参方各组PKC mRNA表达均有所下降;与模型组相比,首乌丹参方中剂量组、复方丹参滴丸组和消心痛组表达上调,均表现出显著性差异,首乌丹参方高剂量组及低剂量组也能促进PKC mRNA的表达,但没有显著性差异;假手术组心肌iNOS mRNA弱表达,模型组呈现高表达,首乌丹参方可下调iNOS mRNA基因表达。结论首乌丹参方预处理可促进I/R的大鼠心肌的PKC表达,下调I/R大鼠心肌iNOS mRNA的表达;其通过激动PKC,使心肌组织iNOS mRNA弱表达,可能是首乌丹参方对缺血再灌注损伤的心肌的保护效应机制之一。

扁玉螺蛋白质、脂肪含量的季节变化

测定和分析了1999年12月～2000年11月的扁玉螺不同部位的蛋白质和脂肪。结果表明 ,扁玉螺蛋白质和脂肪的季节变化都与水温和繁殖季节有关 ,存在明显的季节性 ,但不存在明显的性别差异。蛋白质以足部最高 ,为82.04 % ;性腺和肝脏的蛋白质都比较低 ,小于70 %。脂肪以足部最低 ,仅有1.83 % ;性腺和肝脏的脂肪都比较高 ,尤其是雌性性腺 ,年平均为12.85 % ,4月份可高达19.36 %。