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题名绿荧光蛋白标记人骨髓源性神经干细胞的体外实验研究
被引量:15
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作者
姜晓丹
徐如祥
张旺明
邹雨汐
蔡颖谦
杜谋选
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机构
解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所
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出处
《中国临床康复》
CSCD
2003年第25期3439-3441,T002,共4页
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基金
国家自然科学基金资助(3027049)军队[01Z054]
广东省重大科技项目基金资助[粤科基办(2000)25]
[粤财企(2001)367]~~
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文摘
目的:探讨重组腺相关病毒包装绿荧光蛋白(rAAV-GFP)标记人骨髓源性神经干细胞(BM.NSCs)的可行性,为进一步行标记细胞移植实验研究奠定基础。方法:以成人自愿者的骨髓为研究对象,梯度密度离心法分离获取骨髓基质细胞并用“Cytokine·神经干细胞培养基”诱导分化为神经干细胞,分化的细胞以免疫细胞化学鉴定。对接种生长的BM.NSCs(1×105~6/mL)以无血清培养基冲洗并重悬细胞,依最佳病毒感染指数(MOI)为105的标准计算、加入包装了GFP的rAAV病毒颗粒,连续培养12h(37℃,50mL/LCO2)以感染细胞;补加100g/L胎牛血清后,于神经干细胞培养基中继续细胞培养24h(37℃,50mL/LCO2)以上,荧光显微镜(OlympusIX70,Japan)追踪观察rAAV-GFP标记的BM.NSCs。结果:BM.NSCs于标记后1周内见不到GFP阳性表达;在标记10d后才出现有GFP阳性表达情况(平均每个200倍镜下视野可见到5~10个GFP阳性细胞),所标记的细胞在荧光显微镜下呈亮绿色;随着培养时间延长,BM.NSCs表达GFP也逐渐增强、阳性细胞数量逐渐增多,并可于1个月时最明显(标有GFP阳性的细胞可达BM.NSCs总数的60%),追踪观察到到2.5个月时亦未见衰减。结论:rAAV-GFP在人骨髓源性神经干细胞中的表达较迟,但呈渐强趋势;rAAV-GFP标记人骨髓源性神经干细胞具有可行性。
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关键词
骨髓源性神经干细胞
绿荧光蛋白
标记细胞移植
体外实验
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Keywords
raav-gfp expresses late in neural stem cells derived from human bo ne marrow, but shows a gradual enhanced-trend.it is feasible for bm.nscs to be marked with green fluorescence protein packed by raav-gfp.
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分类号
R329.2
[医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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