p16、CyclinD1、Cdk4、Rb基因在胰腺癌中的表达及其意义

目的：探讨ｐ１６ 、 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、 Ｃｄｋ４ 、 Ｒｂ 在胰腺癌中的作用及其相互关系。方法：免疫组织化学检测ｐ１６ 、 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、 Ｃｄｋ４ 、 Ｒｂ 蛋白在胰腺癌中的表达，原位杂交检测ｐ１６ 和 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 在胰腺癌中的存在状况。结果：ｐ１６ 在胰腺癌中低表达， Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 和 Ｃｄｋ４ 过度表达，未发现 Ｒｂ 在胰腺癌标本中缺失；ｐ１６ 与 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１，ｐ１６ 与 Ｒｂ 呈负相关关系（ Ｐ＜ ０．０５） ， Ｃｄｋ４ 与 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 呈正相关关系（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。结论：胰腺癌发生机制涉及ｐ１６ 、 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１、 Ｃｄｋ４ 和 Ｒｂ 调节环路中多个基因的异常，ｐ１６ 低表达和 Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１ 过度表达可能起在胰腺癌发生中起协同作用。

利用组织芯片研究p21^(WAF1/CIP1)和Rb基因在肝细胞肝癌中的表达

目的:利用组织芯片研究肝细胞肝癌(hepatocelluarcarcinoma,HCC)中p21WAF1/CIP1简称p21、Rb蛋白的表达及两者的关系。方法:建立含40例HCC肿瘤组织及其相应癌旁、远癌正常组织共120个微组织的组织芯片,应用免疫组织化学技术(SP法)检测HCC肿瘤、癌旁、远癌正常组织中p21、Rb蛋白的表达情况。结果:p21蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为27.5%,显著高于癌旁及远癌正常肝组织(P<0.05),并与HCC的组织学分级相关(P<0.05);Rb蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为42.5%,显著高于癌旁和远癌正常肝组织P<0.05,但与HCC肿瘤的大小和组织学分级均无统计学相关性(P>0.05)。HCC肿瘤组织中p21与Rb的表达呈负相关P<0.05。结论:p21、Rb蛋白表达缺失可能与HCC的发生有密切联系,p21与Rb基因在HCC中可能通过负反馈机制相互调节。组织芯片是可高效进行肿瘤分子病理研究的技术平台。

胃癌中p16^(INK4a)和RB基因甲基化状况及其表达

目的 :研究胃癌组织中 p16 INK4a和视网膜母细胞瘤易感基因 (RB)启动子区域的甲基化状况 ,并探讨基因异常甲基化与蛋白表达及其临床病理指标的关系。方法 :采用甲基化特异性PCR方法对 81例胃癌和 10例正常胃黏膜中 p16 INK4a和RB启动子区域甲基化状况进行检测 ,并采用免疫组织化学方法对 p16 INK4a和视网膜母细胞瘤蛋白 (pRb)表达情况进行相应检测。 结果 :胃癌中 p16 INK4a和RB基因的甲基化率分别为 37% (30 / 81)和 4 2 % (34/81) ;胃癌p16 INK4a蛋白和pRb表达阳性率分别为 5 4 % (4 4 / 81)和 90 % (73/ 81)。 10例正常胃黏膜中均未检测到p16 INK4a和RB异常甲基化 ,而且其相应蛋白表达均为阳性。 p16 INK4a甲基化状况与其蛋白表达有相关性 ,但p16 INK4a甲基化状态与肿瘤分化程度、淋巴结转移、性别及年龄均不相关。RB甲基化状态与pRb表达、肿瘤分化程度、性别及年龄无相关性 ,但与淋巴结转移相关。结论 :p16 INK4a和RB异常甲基化是胃癌细胞常见的分子事件 ,可能参与了胃癌的发生发展过程。RB异常甲基化与胃癌淋巴结转移相关 ,提示RB甲基化检测对于分析胃癌淋巴结转移情况可能有一定参考价值。p16 INK4a基因启动子区域高甲基化是其蛋白表达抑制的重要机制。

siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响

目的:研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响。方法:采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF-7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designedan-ti-BRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF-7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率。结果:与阴性对照组相比,siRNA转染MCF-7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3%;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1%;实验组MCF-7细胞增殖抑制率为(81.9±6.1)%,抑制作用明显强于对照组(P<0.05)。结论:BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF-7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用。

胃癌组织中mdm2和Rb基因表达及临床意义

目的:探讨mdm2,Rb基因表达与胃癌发生及胃癌生物学行为的关系.方法:采用免疫组织化学技术(S-P法)检测18例正常胃黏膜、26例异型增生胃黏膜、18例早期胃癌、38例进展期胃癌患者组织中的MDM2,Rb基因蛋白的表达情况,并与临床病理特征相比较.在此基础上,我们通过RNAi技术特异性降低mdm2的表达水平,观察细胞周期的变化,探讨了mdm2作用的分子机制.结果:MDM2蛋白在正常胃黏膜、I型及II型增生胃黏膜、早期胃癌及进展期胃癌组织中的阳性表达率分别为33.3%,40.0%,43.8%,55.6%,57.9%.Rb蛋白的阳性表达率分别为94.4%,100.0%,81.3%,55.6%,63.2%.随着胃黏膜病变的进展,MDM2表达率逐渐增高,在进展期胃癌中达到高峰,但各组间相比差异无统计学意义(P>0.05).Rb的表达呈相反的趋势,在I型增生中表达最高,到进展期胃癌时表达最低.在I型增生胃黏膜中的表达率与早期胃癌、进展期胃癌相比,差异均有统计学意义(P均<0.05).MDM2蛋白表达与胃癌淋巴结转移、浸润深度有关.Rb蛋白表达与胃癌临床病理学相关指标间无关.MDM2和Rb在胃癌中的表达呈负相关(P<0.01,γs=-0.475).干涉mdm2后可以明显抑制细胞的增殖.结论:MDM2,Rb的表达可作为判断胃癌生物学行为的一个指标,对预后有一定的指导意义;特异性降低mdm2的表达可以作为胃癌治疗的一个分子靶点.

胃癌中P16,Survivin和Rb基因甲基化状态

目的:研究胃癌中P16、Survivin和Rb基因启动子区甲基化状态的改变。方法:收集106例胃癌患者和18例健康成人体检者的外周血标本,提取全血DNA,甲基化特异PCR(MSP)方法检测P16、Survivin和Rb基因启动子区甲基化表达情况,统计学方法分析实验数据。结果:106例病例组中p16基因启动子区甲基化率为72.6%(77例甲基化阳性)对照组甲基化仅为1例,病例组p16基因启动子区甲基化率明显高于对照组;病例组Survivin基因启动子区甲基化率6%(7例甲基化阳性)对照组甲基化率0;病例组Rb基因启动子区甲基化率为17.9%(19例甲基化阳性)对照组甲基化仅为1例。统计学分析P(p16)=5.097E-08,P(Survivin)=0.262,P(Rb)=0.187。结论:胃癌中p16基因启动子区甲基化状态可能对胃癌的发生、发展起到一定的作用,通过进一步研究可将p16基因启动子区的甲基化作为胃癌早期筛选指标。Survivin和Rb基因启动子区甲基化状态的改变,病例组和对照组的差异无显著性,对胃癌发生、发展的关系是否存在其他机制,有待进一步的研究。

Rb基因诱导视网膜母细胞瘤移植瘤细胞凋亡的实验研究

目的观察外源性Ｒｂ基因对视网膜母细胞瘤（ＲＢ）细胞凋亡的影响。方法建立裸鼠眼玻璃体腔ＲＢ移植瘤模型及构建Ｒｂ基因的逆转录病毒表达载体Ｐｂａｂｅ－Ｒｂ，用脂质体Ｄｏｓｐｅｒ介导法将Ｒｂ基因导入裸鼠ＲＢ移植瘤，采用流式细胞术（ＦＣＭ），光镜、电镜及ＴＵＮＥＬ细胞凋亡原位末端标记法进行ＲＢ细胞凋亡的检测。结果Ｒｂ基因在ＲＢ移植瘤内表达至少持续７天。ＦＣＭ检测发现在Ｒｂ基因转染后第４天，各实验组治疗眼ＲＢ中均可检测到凋亡细胞峰，凋亡细胞百分率高于对照眼；第２０天，各实验组治疗眼细胞凋亡百分率与对照眼比无差异（Ｐ＞０．０５）。透射电镜下可见到典型的早期凋亡细胞及晚期凋亡小体形成。ＴＵＮＥＬ方法可在荧光显微镜下见到发黄绿色荧光的凋亡细胞，光镜下可见到紫红色的被标记的凋亡细胞。结论Ｒｂ基因可诱导ＲＢ移植瘤细胞凋亡，这可能是Ｒｂ基因体内抗癌的又一作用机制。

树舌多糖对小鼠HepA P16 P27 Rb基因表达的影响

目的:探讨树舌多糖抗肿瘤作用的机制. 方法:通过免疫组化、ELISA法分别测定瘤体和血清中抑癌基因P16,P27,Rb表达蛋白的量;通过透射电镜观察凋亡小体是否存在. 结果:树舌多糖作用后P16,P27,Rb基因表达蛋白的量与盐水组有差异具有统计学意义,免疫组化结果:bP<0.01, vs(1)(2);aP<0.05,vs(2)(3);dP<0.01,vs(3).ELISA结果: aP<0.05,vs(3);bP<0.01,cP<0.05,vs(4);dP<0.01,vs (3)(4);fp<0.01,vs(4);gP<0.05,hP<0.01,vs(3).且P16, P27表达的量与Rb呈负相关mr=-0.094(1),nr=-0.446 (1),再有观察到凋亡小体的存在. 结论:树舌多糖通过激活抑癌基因,抑制肿瘤的生长促进肿瘤细胞凋亡.

HSPC238对肝癌细胞中RB基因表达的影响

目的观察HSPC238对肝癌细胞中RB mRNA和pRb蛋白水平的影响。方法将PcDNA3.1-HSPC238质粒和PLL3.7-HSPC238干扰载体分别转染HepG2细胞,用实时荧光定量PCR的方法检测RB mRNA的表达量;采用Western blotting法检测pRb蛋白的表达。结果和对照组相比,转染高表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb表达量也增加;相反地,和对照组相比,转染低表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb蛋白的表达量也减少。以上结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在HepG2细胞中HSPC238对RB基因的表达存在正向调控作用。

树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。

肺癌p16、Rb基因mRNA和蛋白水平表达的定位观察

为研究 p16和Rb基因在蛋白水平和mRNA水平的表达及其与肺癌发生发展的关系 ,采用免疫组化和原位杂交的方法 ,对 89例肺癌手术标本进行了p16和Rb基因表达的定位观察。发现 p16基因蛋白的丢失主要发生于非小细胞肺癌 ,Rb基因蛋白的丢失主要发生于小细胞肺癌。两种基因各自在蛋白水平和mRNA水平的表达基本相符。提示p16和Rb基因的表达与肺癌的组织学类型密切相关 ,有可能作为非小细胞肺癌与小细胞肺癌基因分型诊断的分子生物学指标之一 ;在翻译水平上也存在着引起基因失活的可能机制。

cyclinD_1、Rb基因蛋白在乳腺癌中的表达

目的：探讨ｃｙｃｌｉｎＤ１基因及Ｒｂ基因的表达与乳腺癌发生发展的关系。方法：应用ＡＢＣ免疫组化法检测２４例良性乳腺组织及５８例乳腺癌中ｃｙｃｌｉｎＤ１及Ｒｂ蛋白表达。结果：乳腺癌中ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达阳性率５８．６２％（３４／５８）显著高于良性乳腺组织中的１６．６７％（４／２４），Ｐ＜０．０５。ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达出现于导管原位癌并持续于浸润、转移等进展过程中，与年龄、肿瘤大小、组织学类型及淋巴结状态无相关性，但与组织学分级负相关。乳腺癌中Ｒｂ蛋白表达阳性率为３６．２％（２１／５８），显著低于良性乳腺组织的７５％（１８／２４），Ｐ＜０．０５；未见Ｒｂ失表达与临床病理参数间存在相关性，Ｒｂ表达与ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达呈正相关。结论：ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达及Ｒｂ失表达是乳腺癌发生中的重要事件且前者是一早期分子事件；ｃｙｃｌｉｎＤ１过表达发挥作用可能部分依赖于Ｒｂ蛋白的存在；提示细胞周期调控异常参与乳腺癌的发生。

利用组织芯片研究Rb基因在原发性肝细胞肝癌中的表达

目的 研究原发性肝细胞肝癌 (HCC)中Rb基因的表达。方法 利用组织芯片技术和免疫组织化学技术(SP法 )检测 40例HCC及其相应癌旁、远癌正常组织中Rb蛋白的表达情况。结果 40例原发性HCC患者标本中 ,肿瘤组织中Rb蛋白表达缺失者有 17例 ,癌旁组织中有 4例 ,在远癌正常组织有 1例 ,HCC肿瘤组织中Rb蛋白缺失率显著高于相应癌旁及远癌正常组织 (P<0 .0 5 ) ;Rb蛋白表达的缺失与肿瘤的大小、病理学分级无统计学相关性 (P>0 .0 5 )。结论 HCC的发生、发展与Rb蛋白的缺失可能有关。

Rb基因产物与原发性肝癌的生物学特性及预后关系的研究

为探讨Rb蛋白与原发性肝癌生物学特性及预后的关系 ,笔者应用免疫组化SABC法检测Rb蛋白在原发性肝癌及肝硬化组织中的表达。结果显示Rb蛋白在原发性肝癌组织中的表达明显低于肝脏良性病变组 (P <0 .0 1) ,有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组 ,与TNM分期有关 (P <0 .0 5 )。提示Rb基因蛋白的表达异常可能在原发性肝癌发生发展过程中具有重要作用 ,检测Rb蛋白表达 ,有助于对原发性肝癌的生物学行为及预后的评价。

Rb基因导入对膀胱癌细胞生长的抑制作用

为探讨腺病毒载体介导的外源性Rb基因导入对膀胱癌细胞生长的抑制作用,为膀胱癌的基因治疗提供实验依据,构建了Rb基因的复制缺陷型重组腺病毒载体.体外转染人膀胱癌细胞株EJ.应用免疫组化法、免疫印迹及聚合酶链反应技术检测外源性Rb基因腺病毒载体的转染效率及Rb基因表达效果;用流式细胞仪分析细胞周期;以细胞计数及同位素掺入技术观察外源性Rb基因对EJ细胞生长的抑制效果.结果显示腺病毒载体可有效地将外源基因导入EJ细胞.Rb基因重组腺病毒载体转染细胞后,胞内DNA合成减少,细胞生长受到抑制.流式细胞仪分析显示68%的EJ细胞生长停滞在GO/GI期.结果提示。

外源性Rb基因转染对头颈肿瘤的抑制作用

目的 探讨外源性 Rb基因对头颈肿瘤的抑制作用。方法 运用携带 Rb基因的复制缺陷型腺病毒转染口腔鳞癌细胞株 0 12 ,观察其体内和体外的抑癌效果。结果 腺病毒表达载体可有效地将外源性 Rb基因转染 0 12细胞并使其表达。体内、体外抑瘤实验表明 :导入 Ad- Rb基因的肿瘤细胞 ,其细胞生长曲线明显受抑制 ,Ad- Rb基因治疗组裸鼠肿瘤生长最为缓慢 ,与 DL312和 PBS对照组比较有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 腺病毒介导的外源性 Rb基因可有效地转染入口腔鳞癌细胞株 ,并抑制其生长。

Rb基因、Rb2/p130基因在骨肉瘤中的表达与相关性

目的探讨骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)中Rb基因、Rb2/p130基因表达情况及两者间的相关性。方法用免疫组织化学SP法检测Rb、Rb2/p130基因在62例OS、39例骨软骨瘤及51例非肿瘤患者患旁正常骨组织中的蛋白表达情况。结果1.OS组中pRb、pRb2/p130阳性率分别为38.71%、27.42%;2.骨软骨瘤组中两者的阳性率分别为84.62%、76.92%;3.正常骨组织组中两者的阳性率分别为94.12%、82.35%;4.OS组与骨软骨瘤组及正常骨组织组中二个基因表达差异均有统计学意义(P<0.01);5.在骨肉瘤中二个基因表达呈正相关,有统计学意义(r=0.8743,P<0.01)。结论Rb、Rb2/p130基因在骨肉瘤中以低表达方式存在,它们与骨肉瘤的发生、发展及预后关系密切,它们在骨肉瘤中的表达呈正相关,并且有可能通过共同低表达来促使骨肉瘤的发生、发展,而它们共同作用的机制有待进一步研究。

Rb基因在染料木黄酮抑制人乳腺癌细胞生长中的作用

目的:研究Rb基因在染料木黄酮(genistein,Gen)抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖中的作用。方法:采用MTT实验和集落形成实验观察Gen对人乳腺癌细胞增殖影响,Westernblotting检测Rb基因、细胞周期素cyclinE蛋白表达情况,RT-PCR检测Rb基因mRNA的表达。结果:Gen显著抑制MCF-7细胞生长,促进细胞Rb基因在蛋白及mRNA水平的表达,抑制cyclinE蛋白的表达。结论:Gen抑制人乳腺癌细胞增殖,其机制可能通过上调Rb基因表达,下调cyclinE蛋白表达。

急性淋巴细胞白血病Rb基因的分析

应用限制性内切酶片段长度多态性分析了３２例原发急性淋巴细胞白血病Ｒｂ基因的等位基因变化，采用３２Ｐ－标记的ＲｂｃＤＮＡ３．８ｋｂ探针，结果在８例患者中发现Ｒｂ基因结构异常（２５％）．其中４例出现新的３．１ｋｂ和２．３ｋｂ片段，选用Ｒｂ基因外显子１８，１９，２１，２２，２７五对引物，对已发现Ｒｂ基因异常的６例患者进行了分析，发现１例在外显子１８和２１无扩增产物．结果提示：Ｒｂ基因异常与急性淋巴细胞白血病的疾病加剧的关系较疾病的始发关系更为密切。