重组牛白细胞介素-2的高效表达及其生物学活性的测定

以ＰＣＲ方法扩增重组牛白细胞介素２基因，获得带有ＡＴＧ的完整牛白细胞介素２基因片段。以ｐＢＶ２２０为表达质粒，成功地构建了重组牛白细胞介素２的高效表达载体ｐＢＶｍＢｏＩＬ２，并转入Ｅ．ｃｏｌｉ。诱导表达结果表明，表达的重组牛白细胞介素２占总菌体蛋白的２２％以上，比原来提高２倍。活性测定结果表明，表达的重组牛白细胞介素２具有极显著的体外增殖活化淋巴细胞的活性，重组牛白细胞介素２的分子量约为１５４８８。

重组牛白细胞介素-2生物活性单位的测定及其理化性质的分析

本研究对大肠杆菌表达的重组牛白细胞介素－２的生物活性单位进行了测定。以已标定的人白细胞介素－２为标准品，ＭＴＴ比色法测出重组牛白细胞介素－２的生物活性单位约为４×１０６ｕ／Ｌ菌液。同时，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法测出表达的重组牛白细胞介素－２分子量约为１５．５ＫＤ。理化性质分析结果表明，重组牛白细胞介素－２生物活性酸碱适应范围约为２～１０；对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的作用敏感，而对核酸酶的作用则不敏感；重组牛白细胞介素－２对温度变化敏感，表现为不耐高温。

大肠杆菌表达重组牛IL-2复性技术的研究(英文)

研究了重组牛白介素2复性条件,如pH,蛋白浓度,DTT浓度,氧化剂(GSSG)和还原剂(GSH)的比例,Cu2+及L-Arg,低浓度的盐酸胍的添加,复性方法等。结果表明,复性液中添加20 mmol/mL DTT可以提高rBoIL-2的复性效率;利用尿浓度梯度复性法3.5 mg/mL的rBoIL-2蛋白溶液复性率可达50%以上,测定活性效价达9.6×104IU/mL。