rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定

目的 :构建 lt B/ ct B- omp L1/ 1融合基因及其原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性 ,检测问号钩端螺旋体 (简称钩体 )野生株 omp L 1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平。方法 :采用连接引物 PCR构建 lt B- omp L 1/ 1和 ct B- omp L 1/ 1融合基因 ,常规方法构建其原核表达系统。采用 SDS- PAGE、Westernblot和 GM1- ELISA分别检测目的重组蛋白 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L 1/ 1表达量、免疫反应性及与 GM1结合的活性。采用 PCR和 MAT分别检测 97株问号钩体野生株 omp L1基因及其表达情况。采用 ELISA检测 2 2 8例钩体患者血清 omp L1基因产物的抗体。结果 :与报道的相关序列比较 ,lt B- omp L1/ 1和 ct B- omp L1/ 1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性 ,分别为 99.7%～ 99.9%和 99.5 %～ 10 0 %。r LTB- r Omp L1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1表达产量均约为细菌总蛋白的 10 % ,主要以包涵体形式存在。 r LTB- r Omp L 1/ 1和 r CTB- r Omp L1/ 1均分别能与r Omp L 1/ 1兔抗血清和牛 GM1结合。 89.7%问号钩体野生株含有 omp L1基因 ,87.6 %问号钩体野生株分别与r Omp L 1/ 1和 r Omp L1/ 2兔抗血清出现效价 ,为 1∶ 4～ 1∶ 2 5 6的 MAT阳性结果。 86 .8%和 88.6 %的患?

rCTB和TT为蛋白载体的A群流脑多糖黏膜免疫初步研究

目的对重组霍乱毒素B亚单位（rCTB）作为多糖蛋白结合疫苗候选载体的可行性进行分析，并对以破伤风类毒素（TF）与rCTB为蛋白载体的黏膜投递型疫苗的免疫效果进行初步探讨。方法首先通过基因工程手段获得具有五聚体结构的rCTB。再将rCTB五聚体蛋白利用化学方法（ADH方法）与A群脑膜炎球菌多糖（GAMP）耦联，获得多糖蛋白结合物GAMP—rCTB，并将其与TT为蛋白载体的A群流脑多糖蛋白结合物（GAMP—TT）以滴鼻和注射途径免疫BALB／c小鼠，并对其进行免疫学评价。结果以rCTB和TT为载体的A群流脑多糖蛋白结合物，通过黏膜投递途径均可在血清中产生相对较高的多糖特异性IgG抗体，在肺部盥洗液和小肠黏膜也产生了相应的特异性IgA抗体。结论rCTB和TT均可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选蛋白载体。以rCTB为载体的多糖蛋白结合物，黏膜途径可能在免疫功能方面优于注射途径。

鸡毒支原体HS株pMGA1.2重组蛋白的免疫保护性研究

为评价鸡毒支原体(MG)HS株p MGA1.2重组蛋白(rp MGA1.2)的免疫保护效果,本研究检测了rp MGA1.2对MG黏附体外培养的鸡胚气管环粘膜的抑制作用,同时以重组霍乱毒素B亚基(r CTB)作为粘膜免疫佐剂,对rp MGA1.2免疫的SPF鸡进行了攻毒试验。结果表明,rp MGA1.2能够有效的竞争性抑制MG定植于体外培养的鸡胚气管纤毛;而且rp MGA1.2经滴鼻点眼途径免疫SPF鸡能够诱导产生特异性体液免疫和呼吸道粘膜免疫,对2×109 ccu MG-HS攻击的保护率为67%。因此,rp MGA1.2具有较强的免疫原性,具有作为疫苗抗原的潜力。

以霍乱毒素重组B亚单位为佐剂的流感抗原滴鼻免疫效果研究

研究霍乱毒素重组B亚单位(recombinant cholera toxin B subunit,rCTB)为佐剂的流感抗原滴鼻免疫小鼠后,小鼠的体液免疫和局部黏膜免疫反应。三价流感病毒灭活抗原及裂解抗原按比例与rCTB配伍,滴鼻免疫小鼠,分析血清中IgG和IgM的动态变化,二免三周后,分析血清中HAI的变化,收集鼻、肺冲洗液,分析IgG和sIgA的变化。结果表明:全病毒组及rCTB+裂解抗原组各项指标变化较明显,小鼠血清IgG和IgM在二免三周后仍维持在较高的水平,而其他两组均呈下降趋势;全病毒组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度均高于rCTB+全病毒组(P<0.01),而rCTB+裂解抗原组鼻、肺冲洗液IgG和sIgA抗体滴度以及血清HAI抗体滴度明显高于裂解抗原组(P<0.01)。研究表明:以全病毒抗原及rCTB+裂解抗原滴鼻免疫小鼠,均可诱导小鼠产生较强的系统免疫反应和局部黏膜免疫反应。rCTB与流感裂解抗原配伍滴鼻,可提高抗原的免疫原性,增强机体的黏膜免疫应答反应。

润肠通便颗粒对小鼠便秘及肠推进作用的实验研究

目的研究润肠通便颗粒对小鼠便秘及肠推进作用的影响。方法(1)将50只小鼠随机分为5组,除正常组外,其他4组造模,观察小鼠排便情况,造成小鼠便秘模型,造模成功后随机分为模型组、麻仁丸对照组、润肠通便颗粒低、高剂量(3、6 g/kg)组,治疗后观察其排便时间、排便次数、平均便重、大便性状。(2)小鼠40只,随机分为4组,即正常对照组、麻仁丸对照组、润肠通便颗粒低、高剂量(3、6 g/kg)组,观察小鼠灌胃给药后对肠推进的影响。结果造模后模型组大便次数减少、排便时间延长、平均便重减少、粪便量少且发硬,与正常组比较均具有显著性差异;对照组、治疗组与模型组比较,大便次数明显增加,排便时间缩短,平均便重增加,大便性状变软,且治疗组疗效优于对照组,润肠通便颗粒明显能促进小肠推进。结论润肠通便颗粒可以显著缩短便秘小鼠排便时间、增加排便次数及便重、促进小鼠粪便软化,增加肠推进,促进小肠的传输功能。

顶空气相色谱-质谱法测定润肠通便茶中有机溶剂残留量

目的:建立润肠通便茶中4种有机溶剂残留的分离测定方法。方法:采用顶空进样气相色谱-质谱法,应用HP-INNOWAX毛细管柱(30×0.25 mm,0.25μm),柱温采取程序升温,初始温度40℃,保持5 min,再以30℃/min的速率升至200℃,保持3 min,测定润肠通便茶中乙酸乙酯、甲醇、氯仿、甲苯的残留量。结果:各有机溶剂均能得到有效分离,在所考察的浓度范围内线性关系良好,r为0.9919～0.9988,平均回收率为98%～100%。结论:本方法灵敏、准确、可靠,可用于润肠通便茶中有机溶剂的检测。